დაპროგრამებული უჯრედის სიკვდილი. ალექსანდრე შტილი
თქვენი ძიების შედეგების შესამცირებლად, შეგიძლიათ დახვეწოთ თქვენი მოთხოვნა საძიებო ველების მითითებით. ველების სია მოცემულია ზემოთ. Მაგალითად:
თქვენ შეგიძლიათ მოძებნოთ რამდენიმე ველი ერთდროულად:
ლოგიკური ოპერატორები
ნაგულისხმევი ოპერატორი არის და.
ოპერატორი დანიშნავს, რომ დოკუმენტი უნდა შეესაბამებოდეს ჯგუფის ყველა ელემენტს:
კვლევის განვითარება
ოპერატორი ანნიშნავს, რომ დოკუმენტი უნდა შეესაბამებოდეს ჯგუფის ერთ მნიშვნელობას:
სწავლა ანგანვითარება
ოპერატორი არაგამორიცხავს ამ ელემენტის შემცველ დოკუმენტებს:
სწავლა არაგანვითარება
ძიების ტიპი
მოთხოვნის წერისას შეგიძლიათ მიუთითოთ ის გზა, რომლითაც ფრაზა მოიძებნება. ოთხი მეთოდია მხარდაჭერილი: მორფოლოგიის ძებნა, მორფოლოგიის გარეშე, პრეფიქსის ძებნა, ფრაზის ძებნა.
სტანდარტულად, ძებნა ხორციელდება მორფოლოგიის გათვალისწინებით.
მორფოლოგიის გარეშე მოსაძიებლად, უბრალოდ განათავსეთ დოლარის ნიშანი სიტყვების წინ ფრაზაში:
$ სწავლა $ განვითარება
პრეფიქსის მოსაძებნად, თქვენ უნდა დააყენოთ ვარსკვლავი მოთხოვნის შემდეგ:
სწავლა *
ფრაზის მოსაძებნად, თქვენ უნდა ჩაწეროთ მოთხოვნა ორმაგ ბრჭყალებში:
" კვლევა და განვითარება "
მოძებნეთ სინონიმების მიხედვით
სინონიმების ძიების შედეგში სიტყვის ჩასაწერად, ჩაყარეთ ჰაში " #
"სიტყვამდე ან ფრჩხილებში გამოთქმამდე.
როდესაც გამოიყენება ერთ სიტყვაზე, სამამდე სინონიმი მოიძებნება მისთვის.
როდესაც გამოიყენება ფრჩხილებში გამოთქმულ გამონათქვამზე, სინონიმი დაემატება თითოეულ სიტყვას, თუ მოიძებნება.
არ შეიძლება შერწყმული იყოს არა მორფოლოგიური ძიების, პრეფიქსების ძიების, ან ფრაზების ძიებასთან.
# სწავლა
დაჯგუფება
საძიებო ფრაზების დაჯგუფების მიზნით, თქვენ უნდა გამოიყენოთ ფრჩხილები. ეს საშუალებას გაძლევთ გააკონტროლოთ მოთხოვნის ლოგიკური ლოგიკა.
მაგალითად, თქვენ უნდა გააკეთოთ მოთხოვნა: იპოვეთ დოკუმენტები, რომელთა ავტორი არის ივანოვი ან პეტროვი, ხოლო სათაური შეიცავს სიტყვებს კვლევა ან განვითარება:
სიტყვების სავარაუდო ძებნა
სავარაუდო ძიებისთვის, თქვენ უნდა დააყენოთ ტილდა " ~ "ფრაზის სიტყვის ბოლოს. მაგალითად:
ბრომი ~
ძიებისას ნახავთ სიტყვებს, როგორიცაა "ბრომი", "რომი", "გამოსაშვები" და ა.შ.
თქვენ შეგიძლიათ დამატებით მიუთითოთ შესაძლო რედაქტირების მაქსიმალური რაოდენობა: 0, 1 ან 2. მაგალითად:
ბრომი ~1
სტანდარტულად, ნებადართულია 2 რედაქტირება.
სიახლოვის კრიტერიუმი
სიახლოვის მოსაძებნად, თქვენ უნდა დააყენოთ ტილდა " ~ "ფრაზის ბოლოს. მაგალითად, რომ იპოვოთ დოკუმენტები სიტყვებით" კვლევა და განვითარება "2 სიტყვაში, გამოიყენეთ შემდეგი შეკითხვა:
" კვლევის განვითარება "~2
გამოხატვის შესაბამისობა
გამოიყენეთ " ^
"გამოთქმის ბოლოს და შემდეგ მიუთითეთ ამ გამოთქმის შესაბამისობის დონე დანარჩენებთან მიმართებაში.
რაც უფრო მაღალია დონე, მით უფრო აქტუალურია გამოთქმა.
მაგალითად, ამ გამოთქმაში სიტყვა "კვლევა" ოთხჯერ უფრო აქტუალურია ვიდრე სიტყვა "განვითარება":
სწავლა ^4 განვითარება
სტანდარტულად, დონე არის 1. დასაშვები მნიშვნელობები არის დადებითი რეალური რიცხვი.
ინტერვალის ძებნა
ინტერვალის დასაზუსტებლად, რომელშიც უნდა იყოს განთავსებული ველის მნიშვნელობა, თქვენ უნდა მიუთითოთ სასაზღვრო მნიშვნელობები ფრჩხილებში, რომლებიც გამოყოფილია ოპერატორის მიერ TO.
შესრულდება ლექსიკოგრაფიული დახარისხება.
ასეთი შეკითხვა დაუბრუნებს შედეგებს ავტორთან, დაწყებული ივანოვიდან პეტროვამდე, მაგრამ ივანოვი და პეტროვი არ ჩაითვლება შედეგში.
ინტერვალში მნიშვნელობის დასაყენებლად გამოიყენეთ კვადრატული ფრჩხილები. გამოიყენეთ ხვეული სამაგრები მნიშვნელობის გამორიცხვის მიზნით.
დისერტაციის რეზიუმემედიცინის თემაზე სიმსივნური უჯრედების P- გლიკოპროტეინებით გამოწვეული წამლის წინააღმდეგობა: გადაუდებელი ფორმირების მექანიზმები და დაძლევის მიდგომები
ხელნაწერის სახით
შტილ ალექსანდრე ალბერტოვიჩი
სიმსივნური უჯრედების წამლისადმი წინააღმდეგობა პ-გლიკოპროტეინით: გადაუდებელი ფორმირებისა და გადალახვის მიდგომების მექანიზმები
მოსკოვი 2003 წ
ნაშრომი შესრულდა სახელმწიფო დაწესებულებაში რუსული კიბოს კვლევის ცენტრში N.N. Blokhin, რუსეთის სამედიცინო მეცნიერებათა აკადემია, მოსკოვი
ოფიციალური ოპონენტები:
მედიცინის მეცნიერებათა დოქტორი, პროფესორი ა.მ. გარინ,
ბიოლოგიურ მეცნიერებათა დოქტორი, პროფესორი, რუსეთის ფედერაციის დამსახურებული მეცნიერი A.N. Salrin,
ბიოლოგიურ მეცნიერებათა დოქტორი, პროფესორი ნ. სერგეევა,
წამყვანი დაწესებულება: რუსეთის ფედერაციის ჯანდაცვის სამინისტროს დიპლომისშემდგომი განათლების რუსეთის სამედიცინო აკადემია.
დისერტაციის დაცვა გაიმართება 2003 წლის 25 დეკემბერს სპეციალიზებული აკადემიური საბჭოს სხდომაზე D.001.017.01
ახვევს მათ. N.N.Blokhin RAMS მისამართი: 115478, მოსკოვი, კაშირსკოს გზატკეცილი, 24.
ნაშრომი შეგიძლიათ იხილოთ რუსეთის ონკოლოგიის ცენტრის ბიბლიოთეკაში. N.N.Blokhin RAMS.
სპეციალიზებული სამეცნიერო საბჭოს სამეცნიერო მდივანი
მედიცინის მეცნიერებათა დოქტორი
იუ.ვ. შიშკინი
მუშაობის ზოგადი მახასიათებლები თემის აიუალურობა
I. სიმსივნური უჯრედების მრავალჯერადი წამლის წინააღმდეგობა: ბიოლოგიური მექანიზმები და მნიშვნელობა ონკოლოგიაში.
ფარმაკოლოგიაში მნიშვნელოვანი მიღწევების მიუხედავად, მათ შორის მოსალოდნელი თვისებების მქონე წამლების შესაქმნელად ტექნოლოგიების შემუშავება, სიმსივნეების ქიმიოთერაპიის წარმატება შემოიფარგლება ცოცხალი სისტემების უმნიშვნელოვანესი მახასიათებლით - გარე გარემოში ცვლილებების დათარიღების უნარით. ასეთი ელასტიურობის ერთი ჰექტარი არის სიმსივნური უჯრედების წინააღმდეგობის განვითარება წამლების მიმართ [გამოიყენება ქიმიოთერაპიაში. უჯრედების ადაპტაციის ფართოდ გავრცელებული და გრძელვადიანი, სტაბილური ხასიათი გარე გავლენებზე მიგვითითებს იმაზე, რომ წამლისადმი წინააღმდეგობის დაძლევა შეიძლება ასოცირდებოდეს არა მხოლოდ უფრო ეფექტური წამლების ძიებასთან: ალბათ არ არსებობს წამალი, რომლის მიმართაც უჯრედები ვერ შეძლებენ წინააღმდეგობის გამომუშავებას რა მხოლოდ სხვადასხვა სახის სტრესისადმი წინააღმდეგობის იოლოგიური მექანიზმების განმარტება იქნება საფუძველი წამლებისადმი წინააღმდეგობის დაძლევის სტრატეგიების შემუშავებისათვის, აუცილებელი პირობა კიბოს პაციენტთა მკურნალობის ეფექტურობის გასაზრდელად.
სიმსივნური უჯრედების მიერ სიცოცხლისუნარიანობის შენარჩუნება სხვადასხვა სამკურნალო ნივთიერებების ზემოქმედების საპასუხოდ - არის დაავადების პროგრესირების ერთ -ერთი მთავარი მიზეზი: სიმსივნე ქიმიოთერაპიის მიმართ მგრძნობიარეა, მიუხედავად წამლების კომბინაციისა. MDR ფენომენს აქვს გრძელვადიანი და სტაბილური ხასიათი: წინააღმდეგობის მექანიზმები მემკვიდრეობით მიიღება უჯრედების თაობებში. ამრიგად, MDR არის სიმსივნის პროგრესირების ერთ -ერთი მთავარი ფაქტორი.
არსებობს უჯრედების წინააღმდეგობის ორი ძირითადი ტიპი ტოქსინების მიმართ. ძირითადი G.E. შეინიშნება ქიმიოთერაპიის ზემოქმედებამდე) წინააღმდეგობა განპირობებულია სიმსივნის პროგრესირების დროს დამცავი მექანიზმების გამოხატულებით. ასე რომ, გააქტიურება
ანტიაპოპტოზური მექანიზმები, რომლებიც ხელს უწყობენ იმუნიტეტის ეფექტორისადმი წინააღმდეგობას, შეიძლება დაკავშირებული იყოს წამლისადმი წინააღმდეგობასთან. მეორადი (შეძენილი) წინააღმდეგობა ხდება სტრესულ უჯრედებში. ამ ზემოქმედებამდე მცენარის მექანიზმები ასეთ უჯრედებში ცუდად არის გამოხატული ან არ არსებობს; გადარჩნენ ერთი ტოქსინით მკურნალობის შემდეგ, უჯრედები იძენენ წინააღმდეგობას მრავალი ნივთიერების მიმართ - MDR (რიორდანი, ლინგი, 1985). შემდგომი შერჩევა აძლიერებს შეძენილ ფენოტიპს უჯრედების თაობებში.
MDR– ის ყველაზე მნიშვნელოვანი მექანიზმი არის უჯრედში ტოქსინის დაგროვება, რაც გამოწვეულია ნივთიერებების უჯრედულ გარემოში გამოყოფით. ეს ტრანსპორტი ხორციელდება პლაზმური მემბრანის P- გლიკოპროტეინის (Pgp) ინტეგრალური პროტეინით ATP ჰიდროლიზის ენერგიის გამო (ჯულიანო და ლინგი, 1984). ”! ლოკალიზებულია მე -7 ქრომოსომაზე (Chen et al., 1986) მრავალი მონაცემი მიუთითებს იმაზე, რომ MDRI და Pgp mRNA– ს ზრდა ხშირად არის ფაქტორი მრავალი სახის სიმსივნის მკურნალობისადმი წინააღმდეგობის გაწევისა (Linn et al., 1995; Stavrovskaya et al., 1998).
II სიმსივნურ უჯრედებში MDR ფორმირება: ბიოლოგიური მექანიზმები, როგორც პრევენციის სამიზნე
ლოგიკურია ვივარაუდოთ, რომ MDRI mRNA- ს რაოდენობის ზრდა განპირობებულია ამ გენის გაძლიერებით. ეს MDR მექანიზმი გამოვლენილია უჯრედულ უჯრედებში, რომლებმაც გადაარჩინეს გადარჩენის საშუალება ტოქსინების არსებობისას (რონინსონი, 1991). თუმცა, ადამიანის სიმსივნეების ანალიზისას, MDRI გენის გაძლიერება არ გამოვლენილა არც პირველადი სიმსივნეების დროს და არც ნეოპლაზმების მკურნალობის შემდეგ. კლინიკური MDR– ის სავარაუდო მიზეზი არის MDRI– ისა და Pgp– ის გადაჭარბებული გამოხატულება გენის უცვლელი სტრუქტურით (ინუკლეოტიდური თანმიმდევრობის ასლის ნომრის შენარჩუნება), ე.ი. ეპიგენეტიკური აქტივი! ფენოტიპი ადამიანის სიმსივნური უჯრედების კულტურებში, MDRI mRNA დონის ზრდა და Pgp ოდენობა დაფიქსირდა ქიმიოთერაპიის წამლით ერთჯერადი მკურნალობის შემდეგ.
ისინი განსხვავდებიან ქიმიური სტრუქტურისა და მოქმედების მექანიზმების მიხედვით (ChaudoBary, Epiphany, 1993). მოპოვებულია მტკიცებულება MOI 1 mRNA– ის დაგროვების შესახებ rcoma– ს მეტასტაზებში ფილტვის ქსოვილში, დოქსორუბიცინით ფილტვის ინტრაოპერაციული ინფუზიის დაწყებიდან 20-50 წუთის შემდეგ (Abolhoda et al., 1999). ეს შედეგები ვარაუდობს MDR– ის ეპიგენეტიკური გააქტიურების შესაძლებლობას ექსპერიმენტსა და ფსიქიკურ სიტუაციებში: სიმსივნეებში MNR1 და Pgp mRNA– ს მომატება შეიძლება მოხდეს MNR1 გენის გაძლიერების გარეშე.
ამ ტიპის ბიოლოგიური რეგულირება - ფენოტიპის გადაუდებელი გააქტიურება - ითვალისწინებს გენის (ების) ტრანსკრიფციის ინდუქციას, რომელიც ასახავს შესაბამის ფენოტიპს და / ან პოსტ -ტრანსკრიპციულ კონტროლს (NK– ის სტაბილიზაცია, ცილის სინთეზისა და ფუნქციონირების რეგულირება). (უჯრედების კრუნჩხვები და წინააღმდეგობის შედარებით სწრაფი განვითარება [სიმსივნური უჯრედები სტრესის საპასუხოდ. MOF 1 გენის ინდუქციურობა გვთავაზობს სიგნალის გადაცემის სხვადასხვა გზებს უჯრედის პერიფერიიდან ბირთვამდე. ასეთი გზები) შესაძლოა იყოს სტრესის რეალიზების სასიგნალო მექანიზმები: ცილა კინაზა C KS), ფოსფოლიპაზები და უჯრედშიდა Ca2 +, მიტოგენით გააქტიურებული იუტეფსინაზები, ბირთვული ფაქტორი კაპა B (NaKB) სიგნალი RNR1 გენის გულატორულ რეგიონში და ტრანსკრიპტი უზრუნველყოფს გენის შეკუმშვის გააქტიურებას.
MDR რეგულირების შესწავლას ასევე აქვს ფუნდამენტური პრაქტიკული ასპექტი. ამ მექანიზმების დათრგუნვა ფარმაკოლოგიური და / ან არატოქსიკური ეფექტებით ხელს შეუშლის MDR– ის განვითარებას ჩემი თერაპიის დროს.
III. ჩამოყალიბებული MDR სიმსივნური უჯრედების დაძლევა.
თუ MYS გენის გააქტიურების სიგნალების დაბლოკვას შეუძლია ხელი შეუშალოს MDR- ის წარმოქმნას პირველადი მგრძნობიარე უჯრედებში, მაშინ ასეთი
მიდგომა გამოუყენებელია უკვე ჩამოყალიბებული წინააღმდეგობის დასაძლევად. მეორადი MDR– ის წინააღმდეგ ბრძოლის ტრადიციული მეთოდია Pgp მოდულატორების გამოყენება ციტოსტატიკებთან ერთად (Lehne, 2000). თუმცა, Pgp ინჰიბიტორების გამოყენება შეზღუდულია გვერდითი ეფექტებით (გულის არითმიები, იმუნოლოგიური დისბალანსი). თანაბრად მნიშვნელოვანია, რომ ეფექტური მოდულატორი + ციტოსტატიკური კომბინაციები შემცირდეს MDR– ის შერჩევისას უჯრედების სიკვდილის ზოგიერთი მექანიზმის დაბლოკვით.
ჩამოყალიბებული MDR- ის გადალახვა შესაძლებელია ორი პირობის დაკმაყოფილებისას: 1) პრეპარატის კონცენტრაცია საკმარისი უნდა იყოს უჯრედების სიკვდილის ეფექტორული მექანიზმების გასააქტიურებლად, 2) ამ მექანიზმების ფუნქციები დაცული უნდა იყოს MDR უჯრედებში. პირველი პირობა დაკმაყოფილებულია, თუ წამალი გადალახავს Pgp ბარიერს. თუმცა, საჭიროა დამტკიცდეს, რომ აგენტის კრიტიკული უჯრედშიდა კონცენტრაციის მიღწევა საკმარისია მრავალი გავლენისადმი მდგრადი უჯრედის სიკვდილის გასააქტიურებლად. რეზისტენტულ უჯრედებში მოქმედი გადარჩენის მექანიზმები უნდა ემსახურებოდეს ამ უკანასკნელის აღმოფხვრის სამიზნეს.
მეორე პირობის განსახორციელებლად, პერსპექტიული ჩანს მიდგომა, რომელიც მიმართულია რეზისტენტული უჯრედების ლიზისისკენ, როგორც მათი სიკვდილის ინდუქციის მექანიზმისკენ. თაგვების ვაქცინაცია სინგენური მიელომის უჯრედებით, რომელიც გადატანილია გარკვეული ციტოკინების cDNA– ით, იწვევს იმუნური პასუხის განვითარებას, რომელსაც შუამავალია ციტოტოქსიური T ლიმფოციტები (CTLs) და ვაქცინირებული სიმსივნის უარყოფა იმუნიზირებულ ცხოველებში (დრანოფ და სხვები, 1993; ლევიცკი და სხვები). , 1996). CTL ლიზის უჯრედებს გრანზიმით B და პერფორნით. ვინაიდან გრანიზი B ააქტიურებს კასპაზას 3 -ს, აპოპტოზის ერთ -ერთ დისტალურ ეფექტს და პერფორინი იწვევს პლაზმური მემბრანის პირველადი დაზიანებას (ნეკროზი), ვიმედოვნებთ, რომ CTL- ები ეფექტური იქნება, თუკი პროქსიმალური სიკვდილის მექანიზმები დაიბლოკება; აპოპტოზის დისტალური კავშირების გააქტიურება ნეკროზთან ერთად
იწვევს კიბოს საწინააღმდეგო პრეპარატებისადმი მდგრადი უჯრედების სიკვდილს - დაპროგრამებული უჯრედების სიკვდილს.
პრობლემის ფორმულირება
MDR არის კლინიკურად არახელსაყრელი ფენომენი, რომლის დაძლევა მოითხოვს ცოდნას მისი განვითარების მექანიზმებისა და უჯრედების სიკვდილის რეალიზაციის გზების შესახებ; საჭიროა პრობლემის ორივე ასპექტის გამოძიება. უპირველეს ყოვლისა, აუცილებელია MDR1 / Pgp- უარყოფით უჯრედებში MDR ფორმირების მექანიზმების შესწავლა; ამ მექანიზმების გამოკვლევა ხელს შეუწყობს პირველადი მგრძნობიარე უჯრედებში წინააღმდეგობის განვითარების თავიდან აცილებას. მეორე, MDR უჯრედებში მოქმედი სიკვდილის პროცესების ანალიზი შექმნის საფუძველს წინააღმდეგობის გადალახვისათვის იმ სიტუაციებში, როდესაც მეორადი MDR ჩამოყალიბდა.
კვლევის მიზანია ადამიანის სიმსივნურ უჯრედებში [LN– ის გადაუდებელი ფორმირების მექანიზმების ჩამოყალიბება და ამ ჯოჯოხეთის წინააღმდეგობის დაძლევის მიდგომების შემუშავება.
1. ადამიანის სიმსივნური უჯრედების კულტურებში MDR ფორმირების მოდელების ოპტიმიზაცია ქიმიოთერაპიული პრეპარატების და სასიგნალო მექანიზმების ექსპერიმენტული აგონისტებისა და ანტაგონისტების ზემოქმედების საპასუხოდ.
2. განსაზღვრეთ MDR– ის გადაუდებელი განვითარების ძირითადი მექანიზმი უჯრედების კიბოს საწინააღმდეგო საშუალებებით მკურნალობის დროს: MDR გენის გაძლიერება, Pgp დადებითი უჯრედების შერჩევა, ან de novo MDR ინდუქცია.
3. გამოიკვლიეთ უჯრედული სიგნალების გადაცემის გზები, რომლებიც არეგულირებენ MDR– ის გააქტიურებას - ცილა კინაზა C, ფოსფოლიპაზა C, უჯრედშიდა Ca2 +, მიტოგენით გააქტიურებული ცილოვანი კინაზები, NFkB).
4. ქიმიური თერაპიის საპასუხოდ MDR გენის გამოხატვის ტრანსკრიპციული გააქტიურების და პოსტ-ტრანსკრიპციული რეგულირების (mRNA სტაბილურობის) როლის გასარკვევად.
5. სიმსივნურ უჯრედებში MDR- ის განვითარების თავიდან აცილების გზების შემუშავება ქიმიოთერაპიული პრეპარატების შერწყმით RNC- გამააქტიურებელი სასიგნალო გზების ბლოკატორებთან და გენის ტრანსკრიფციის ინჰიბიტორებთან
6. შესწავლილი იყოს კინეტიკის გააქტიურების დამწყები და ეფექტიანი კუპები, ცვლილებები მიტოქონდრიის ტრანსმემბრანულ პოტენციალში, პოლი (ADP) რიბოზას პოლიმერაზის პროტეოლიზური გახლეჩა, ინტერუკლეოზომური დნმ -ის ფრაგმენტაცია და პლაზმური მემბრანის მთლიანობა მშობლის უჯრედებში და MDR- ის მქონე ვარიანტები მკურნალობენ წამლით, რომელიც არ არის ტრანსპორტირებული P- გლიკოპროტეინით.
7. გამოიყენეთ ვაქცინაცია სიმსივნური უჯრედების გამომხატველით
ციტოკინები წარმოქმნიან იმუნურ პასუხს MDR უჯრედების წინააღმდეგ. "
დებულებები თავდაცვისთვის.
1. Pgp– შუამავლობით MDR - უჯრედების გადაუდებელი პასუხი მრავალ ზემოქმედებაზე - ხდება MZN 1. გენის ეპიგენეტიკური გააქტიურებით. ამ სიგნალების ინჰიბიტორების თავიდან აცილება შესაძლებელია.
2. Pgp– ს შუამავლობით MDR– ის დაძლევა შეიძლება დაკავშირებული იყოს რეზისტენტული უჯრედების პლაზმურ გარსზე მიზნობრივ ეფექტთან. Pgp არ იცავს უჯრედებს პლაზმური მემბრანის მთლიანობის დაზიანებისგან - ნეკროზისგან.
სამეცნიერო პოვზნა
1. პირველად დასაბუთებულია MDR ფორმირების კონცეფცია, როგორც უჯრედის გადაუდებელი პასუხი ეგზოგენურ სტიმულზე;
2. პირველად, დეტალურად იქნა შესწავლილი წამლისადმი წინააღმდეგობის სპეციფიკური ფენოტიპის ფორმირების მექანიზმი - P £ p შუამავლობით MDR: ამ ცილის მაკოდირებელი MOR1 გენის ეპიგენეტიკური გააქტიურება.
3. პირველად შემუშავდა MVS გენის გადაუდებელი გააქტიურების მოდელი.
რომელსაც თან ახლავს ადამიანის სიმსივნური უჯრედების კულტურაში Pgp- შუამავლობით MDR სტაბილური ფენოტიპის შეძენა; 1. გამოვლენილია სიგნალის გადაცემის გზები, ტრანსკრიპციის გააქტიურების მექანიზმი და MOK 1 გენის პოსტტრანსკრიპციული რეგულირება უჯრედებში, რომლებიც დაუცველნი არიან კიბოს საწინააღმდეგო პრეპარატებს. 5. პირველად დახასიათებულია ფარმაკოლოგიური ნივთიერებების კლასები - უჯრედული სიგნალის გადაცემის ბლოკატორები - სიმსივნურ უჯრედებში Rcr შუამავლობით MDR წარმოქმნის თავიდან ასაცილებლად. 5. პირველად, გამოკვლეულია Pgp შუამავლობით MDR უჯრედებში სიკვდილის მექანიზმები და შემუშავებულია წინააღმდეგობის დაძლევის მიდგომა, რომელიც შედგება პლაზმური მემბრანის მთლიანობის პირველადი დაზიანებისგან.
პრაქტიკული ღირებულება.
1. ქიმიოთერაპიული პრეპარატების ზემოქმედების ქვეშ სიმსივნური უჯრედების კულტურაში Pgp შუამავლობით MDR– ის გადაუდებელი ფორმირების თავიდან აცილების მეთოდების შემუშავება.
2. მოდიფიცირებული გენმოდიფიცირებული ვაქცინების პრეკლინიკური კვლევები MDR– ის დასაძლევად.
სამუშაოს მოწონება.
დისერტაცია განიხილებოდა 2003 წლის 30 ივნისს სიმსივნური უჯრედების გენეტიკის გაბორაგორიუმების ერთობლივ კონფერენციაზე, ციტოგენეტიკა მოლეკულური გენეტიკის ჯგუფთან, ვირუსული და უჯრედული ონკოგენები, მოლეკულური ენდოკრინოლოგია, სიმსივნის საწინააღმდეგო იმუნიტეტი, ბიოქიმიური ფარმაკოლოგია, სამედიცინო მკურნალობა, ექსპერიმენტული დიაგნოსტიკა და ბიოთერაპია სიმსივნეები; შმუნოლოგიის, ჰემატოლოგიის, ქიმიოთერაპიის, კლინიკური ფარმაკოლოგიის განყოფილებები, "რუსეთის კიბოს კვლევის ცენტრის მკურნალობის გახეხილი მეთოდები. N.N.Blokhsha RAMS.
სადისერტაციო ნაშრომის ძირითადი მასალები წარმოდგენილია შემდეგ კონფერენციებზე: მე -2 საერთაშორისო სიმპოზიუმი "Cylostatic Drug Resistance", (K გერმანია, 1991); გორდონის კონფერენცია "ქიმიოთერაპიის წინსვლა" (NYC ლონდონი, აშშ, 1994); მოლეკულური ტოქსიკოლოგია (სპილენძის მთა, აშშ, 1995); ინდუქციური გენომური პასუხები (სტივენსონი, აშშ, 1996); ნუკლეინის მჟავები - მოლეკულური დიაგნოსტიკისა და თერაპიის ინტეგრირება (სან დიეგო, აშშ, 1996); კიბოს კვლევის ამერიკული ასოციაციის ყოველწლიური კონფერენცია (1994-2001): მე -6 და მე -7 მიღწევები ონკოლოგიურ კონგრესებში, (ჰერსონისოსი, საბერძნეთი, 2001,2002); "უჯრედის ბირთვის სტრუქტურები და ფუნქციები" (პეტერბურგი, 2002), ასევე სემინარებზე Oncotech, Inc. (ირვინი, აშშ, 1996), სალკის ინსტიტუტი (ლაჰოია, აშშ, 1997), ლი მოფიტის კიბოს ცენტრი (ტამპა, აშშ, 1997), ჯექსონ ლაბორატი (ბარ ჰარბორი, აშშ, 1997), სლოუნ-კეტერინგის კიბოს ცენტრი, ახალი იო] აშშ, 1999), კოპენჰაგენის უნივერსიტეტები (2002), ინსბრუკი (2002) და გრონინგსი! (2003), მოსკოვის სახელმწიფო უნივერსიტეტი. MV ლომონოსოვი (2002), ონკოლოგიისა და რადიობიოლოგიის ექსპერიმენტული პათოლოგიის კვლევითი ინსტიტუტი V.I. R.E. კავეცკი (კიევი, 2002).
პუბლიკაციები.
ნაშრომის სტრუქტურა და მოცულობა.
ნაშრომი წარმოდგენილია აკრეფილი ტიპის 181 გვერდზე და შედგება თავების შესასვლელად "ლიტერატურის მიმოხილვა", "მასალები და კვლევის მეთოდები", "კვლევის შედეგები" (ორი ნაწილი), დისკუსია და დასკვნები. ნამუშევარი შეიცავს 44 ფიგურას 6 ცხრილს. ბიბლიოგრაფიული მასალა შეიცავს ცნობებს 270 ლიტერატურულ წყაროზე.
მასალები და კვლევის მეთოდები.
ლაბორატორიული ცხოველები და უჯრედული ხაზები. გამოყენებულია ბალბი / თაგვები. MDR გააქტიურების ექსპერიმენტებისთვის, ადამიანის უჯრედული ხაზები H9 (T- უჯრედების ლეიკემია), K562 (პრომიელოციტური ლეიკემია), SW<
(მსხვილი ნაწლავის კიბო), ასევე სუბლინიგო K562Í / S9, რომელშიც Pgp გამოხატულია უჯრედების შერჩევის გარეშე ტოქსინებისადმი წინააღმდეგობის გაწევის მიზნით (Mechetner et al., 1997). სიმსივნის საწინააღმდეგო იმუნიტეტის შექმნის ექსპერიმენტებისთვის გამოყენებულია მიელომის ხაზები MPC11, J558 და S194. MDR– ით ქვეგანყოფილების მისაღებად, დოქსორუბიცინისადმი წინააღმდეგობისათვის MPC11 უჯრედების ეტაპობრივი შერჩევა განხორციელდა. დამოუკიდებელი MPC1 სუბლაიდები lDoxlO-1 და MPCllDoxlO-2 მრავლდება 100 ნმ დოქსორუბინის თანდასწრებით.
MDR- ის და MDRI გენის რნმ -ის შესწავლა, Pgp- ის რაოდენობა და ფუნქცია.
MDR- ის გასააქტიურებლად ჩვენ გამოვიყენეთ shgozin-1P- E> -არაბინოფურანოზიდი (ციტოზარი, არა C), დოქსორუბიცინი, ვინკრისტინი, ნოკოდაზოლი, ბლსომიცინი, სფინგომიელინაზა, იონოფორი Ca2 + A23187, თაფსიგარგინი, 2-დეოქსიგლუქოქისტოქისტოქისტიტი ester-0 13-acetate (TFA). MDR გააქტიურების ინჰიბირების მიზნით, აქტინომიცინი D, a-amanitin, ექტეინასკიდინი 743 (ET743), ქელერიტრინი, ბის-ინდოლილმეიმიდი I, კალფოსტინი C, BAPTA / AM, TMV-8, პიროლიდინის პტიოკარბამატი (PDTK) სალიცილის მჟავა, PD98095. ინჰიბიტორები დაემატა უჯრედებს 30 წუთის განმავლობაში. აქტივატორების დამატებამდე. უჯრედებში mRNA MDR \ დონის შესწავლა მოხდა პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქციის (PCR) მეთოდით საპირისპირო ტრანსკრიფციით (Noonan et al., 1990; Shtil et al., 2000) პრაიმერების გამოყენებით: MDRV. პირდაპირი: 5 "-ССС АТС АТТ GCA ATA GCA GG-3"; უკანა: 5 "-GTT CAA ACT TST GCT SST GA-3". პროდუქტის სიგრძე 167 გვ p2-მიკროგლობულინი: პირდაპირი: 5 "-ACC CCC ACT GAA AAA GAT GA-3"; უკანა: 5 "-ATC TTC AAA CCT CCA TGA TG-3". პროდუქტის სიგრძე 120 ცალი
Pgp– ის რაოდენობა და მისი სატრანსპორტო ფუნქცია განისაზღვრა ნაკადის ციტომეტრიით მონოკონური ანტისხეულებით UIC2 (Mechetner et al., 1997). თაგვის IgG– ის ანტისხეულები კონიუგირებული ფლუორესცეინ იზოთიოციანატთან (FITC) გამოიყენეს როგორც მეორადი ანტისხეულები. Pgp სწავლებისთვის-
დამოკიდებული ტრანსპორტი იყენებდა ფლუორესცენტურ სუბსტრატებს Pgp-rhodamine 123 (MDR ინდუქციის ექსპერიმენტებში) (Neyfakh, 1988) და კალცეინის აცეტოქსიმეთილ ესტერს (მიელომის უჯრედებზე ექსპერიმენტებში) (Holló et al., 1996; Shtü et al., 1999).
უჯრედების სიკვდილის კვლევა. უჯრედების გადარჩენა ტოქსინების არსებობისას შეისწავლეს 3- (4,5-დიმეთილთიაზოლ-2-ილ) -5- (3-კარბოქსიმეთოქსიფენილ) -2- (4-სულფოფენილ) -2P- ტეტრაზოლიუმის შემცირებით (MTT ტესტი) (მოსმანი, 1983; სიდოროვა და სხვ., 2002). V-FITC- ის ანექსია გამოყენებულ იქნა აპოპტოზური უჯრედების რაოდენობის დასადგენად; ნეკროზული უჯრედები გამოვლინდა პროპიდიუმის იოდიდით (PI). მიტოქონდრიის ტრანსმემბრანული ელექტრული პოტენციალი განისაზღვრა JC-1 ზონდის ფლუორესცენციით (Zamzair et al., 1997). გენომიკური დნმ-ის ფრაგმენტაციის დასადგენად, უჯრედები ლიზდება ნატრიუმის ციტრატის შემცველი ბუფერში, NP-40, RNase A და PI; სუსპენზია გაანალიზებულია ნაკადის ციტომეტრზე (Shtil et al., 1999; ფრაგმენტული დნმ გამოვლენილია ქვე-Gl რეგიონში. უჯრედებში თავისუფალი ჟანგბადის სახეობების ფორმირების შესასწავლად, დიქლოროფლუორესცეინ დიაცეტარული ესტერი (DCFDA), რომელიც აღწევს ციტოპლაზმში და ფლუორესცენტი უჯრედული მეტაბოლიტების დაჟანგვის შემდეგ იქნა გამოყენებული.
PCD– ის აქტივობა ციტოზოლში და ნაწილაკების ფრაქცია განისაზღვრა რადიოაქტიური მეთოდით მიელინის ძირითადი ცილის ფოსფორილირებით უჯრედისის ლიზისის შემდეგ და ფრაქციების გამოყოფა ცენტრიფუგირებით (Shtil et al. 2000).
მიტოგენით გააქტიურებული ცილოვანი კინაზების ERK1 / 2 და JNK1 აქტივობა განისაზღვრა სპეციფიკური სუბსტრატების ფოსფორილირებით (მიელინის ძირითადი ცილა და c-Jun) უჯრედების ლიზისის და კინაზას იმუნოკრეპიტაციის შემდეგ (et al., 1996).
რეპორტიორი პლაზმიდები, გამოხატვის ვექტორები, ტრანსფექცია.
K562 და B \ V620 უჯრედები გადაადგილდნენ პლაზმიდით, რომელიც ატარებს MOL 1 -1202 / + 118 ნტ გენის ტროქსიმალური პრომოუტერის რეგიონს. ტრანსკრიფციის დაწყების ადგილის მიმართ, კლონირებული ვექტორში pOB2b. ლუციფერაზა Pge / 1y იყო სელკომის რეპორტიორი. NaKB– ის ტრანსაქტივაციური გულუბრყვილობის შესამოწმებლად, უჯრედები დაინფიცირდა პრომოტორ – რეპორტიორის სონორული სტრუქტურით RTKB– ის შემაერთებელი ადგილებით (5xNaKB-lhociferase). ლუციფერაზას აქტივობის ჰორმონირების მიზნით, უჯრედებს ერთდროულად გაუკეთეს შაზმიდი, რომელიც ახორციელებს რეინიდას ლუციფერაზას 8V40 პრომოუტერის კონტროლის ქვეშ. ექსპერიმენტების შხამში, ლუციფერაზას Pne] \ y აქტივობა დაკავშირებული იყო ტრანსფექციურ უჯრედებში მთლიანი ცილის კონცენტრაციასთან. ტრანსფექციისთვის ჩვენ გამოვიყენეთ სპოფეცინი ან ლიპოფექტამინი, ასევე გენის იარაღი (მიელომის უჯრედებისთვის) KahlichteV1 cb e [a!., 1996). BU40 პრომოუტერის კონტროლის ქვეშ გამოყენებულ იქნა p50 და p65 ^ kB ქვედანაყოფების გამომხატველი ვექტორები. კოტრანსფექცია შასმიდით-1202 / + 118-ლუციფერაზა ლუციფერაზების აქტივობა 1 უჯრედში შესწავლილია ქიმიური მინერალური მეთოდის გამოყენებით.
თაგვების იმუნიზაცია. უჯრედები MPC11 და MDR ქვესექცია დასხივებული იქნა (40 ~ p), დაიჭირეს პლაზმიდით გრანულოციტ-მაკროფაგ-სოლონია-მასტიმულირებელი ფაქტორის (GM-CSF) cDNA მატარებელი პლაზმიდით და კანქვეშ გაუკეთეს თაგვებს (1.5x105 წელი ცხოველისთვის). საკონტროლო თაგვებს გაუკეთეს იგივე რაოდენობის დასხივებული უჯრედები, რომლებიც ტრანსფიცირებულია ვექტორით ჩანართის გარეშე. 7 დღის შემდეგ, ახალი უჯრედები დასხივდნენ და დააბინძურეს პლაზმიდით [ინტერლეუკინ -12 (IL-12) დნმ-ის მატარებელი ან დასხივებული უჯრედები შაზმიდით ინფიცირებული (კონტროლის) გარეშე. კიდევ 7 დღე (ადრეული ვაქცინაციიდან მხოლოდ 14 დღის შემდეგ), ცხოველებს კანქვეშ ჩაუტარეს ახალი უჯრედების ინექცია (10e ერთ თავზე) (Tisheg et al., 1998).
CTL აქტივობა შერეულ კულტურაში მიელომის უჯრედებთან. თაგვებში IL-2-გადატანილი მიელომის უჯრედების ინექციიდან 11 დღის შემდეგ ელენთა ამოიღეს. სპლენოციტები გაშენებულია 5 დღის განმავლობაში 37 ° C ტემპერატურაზე, 5%
CO2 იმუნიზაციისთვის გამოყენებული ხაზის ახლად დასხივებული უჯრედებით. შემდეგ ახალი მიელომის უჯრედები დატვირთული იყო 51Cr (CTL სამიზნე უჯრედები). CTL აქტივობა შეფასდა სამიზნეებთან ინკუბაციის შემდეგ mSg მედიუმში გამოშვებით. პერფორინის დამუშავების ინჰიბირების მიზნით, ელენთები ინკუბაცირებული იქნა კონკანამიცინით A და შემდეგ სამიზნეებით (Kataok et al., 1996).
კვლევის შედეგები
Pgp შუამავლობით MDR– ის გადაუდებელი გააქტიურება.
I-RNA MDRI გროვდება უჯრედებში კიბოს საწინააღმდეგო პრეპარატების საპასუხოდ (Chaudhary, Roninson, 1993). იმის გასარკვევად, არის თუ არა ეს ეფექტი ასოცირებული Pgp პოზიტიური უჯრედების შერჩევასთან თუ MDR ინდუქციასთან, ექსპერიმენტები ჩატარდა MES / Pgp უარყოფით H9 უჯრედებზე. უჯრედები მკურნალობდნენ Ara C– ით, არაგადამტანი Pgp წამლით, რომელიც გამოიყენება ძუძუს კიბოს და ჰემატოლოგიური ავთვისებიანი სიმსივნეების მქონე პაციენტებში. MDR \ გამოუმუშავებელ უჯრედებში არ გამოვლენილია 25 PCR ციკლის შემდეგ, ხოლო Ara C– ით დამუშავებულ უჯრედებში, MDRI mRNA– ს ზრდა აღინიშნება 3-6 საათის შემდეგ. ზემოქმედება (სურ. 1, ა). MDRI mRNA– ს ზრდა შეიძლება შეინიშნოს კიდევ უფრო სწრაფად - ექსპოზიციის 1 საათის შემდეგ, ციტოზარის კონცენტრაცია შეიძლება გაიზარდოს 75 μM– მდე. MDRI mRNA– ს ზრდა გრძელდება უჯრედებში, რომლებიც გადაურჩნენ Ara C– ს ერთ ექსპოზიციას მინიმუმ 6 კვირის განმავლობაში.
გარდა ამისა, გამოიკვლიეს გაიზარდა თუ არა Pgp რაოდენობა MDRI mRNA დაგროვების პარალელურად. ლეღვი 1B გვიჩვენებს, რომ Ara C- ით დამუშავებული უჯრედები გამოხატავს Pgp. მნიშვნელოვანია, რომ Ara C– ს ზემოქმედებამ გამოიწვიოს გადაადგილება მთელი მოსახლეობის მარჯვნივ, რაც მიუთითებს იმაზე, რომ კულტურის თითქმის ნებისმიერ უჯრედს შეუძლია Pgp დაგროვება. Ara C- ით დამუშავებული უჯრედები გამოხატავს ფუნქციურად აქტიურ Pgp: ამ უჯრედებში, ექსკრეციას
როდამინი 123 უფრო ინტენსიურია ვიდრე ხელუხლებელ უჯრედებში; ეფექტი ამოღებულია ვერაპამილით, Pgp- ზე დამოკიდებული სატრანსპორტო ბლოკერით.
О 1 3 6 10 16 24 საათი.
ფლუორესცენცია (Ig) -
ნახ. 1 MDRX და Pgp mRNA– ს ზრდა Ara C.– ზე ერთჯერადი ზემოქმედების შემდეგ. A: H9 უჯრედები დამუშავდა 10 μM Ara C. mRNA MDR1– ით და p2– მიკროგლობულინით (B2M) განისაზღვრა PCR– ით საპირისპირო ტრანსკრიფციის შემდეგ. B: უჯრედები დამუშავდა 10 μM Ara C– ით 24 საათის განმავლობაში (nieu<яя панель). Контроль - необработанные клетки (верхняя панель). Таким образом, накопление иРНК MDR\ наблюдается в течение первых
აგენტები ზემოქმედების ქვეშ, რომლებიც არ არის გადაყვანილი Pgp. Ეს ნიშნავს, რომ
ამ ეფექტის ყველაზე სავარაუდო მექანიზმი არის ფენოტიპის ინდუქცია,
არ არის შერჩეული "ადრე არსებული" რეზისტენტული უჯრედები.
ლეღვი 2 გვიჩვენებს უჯრედების გადარჩენის დამოკიდებულებას ვინკრისტინის კონცენტრაციაზე, ქიმიოთერაპიული პრეპარატი Pgp. უჯრედები, რომლებიც გადარჩნენ
ბრინჯი 2. ცპტოსარზე ერთჯერადი ზემოქმედება იწვევს სტაბილურად „Pgp ტრანსპორტირებული პრეპარატის ფორმირებას.
H9 უჯრედები დამუშავდა 10 μM Ara C– ით 24 საათის განმავლობაში, ხელახლა შეჩერდა სუფთა გარემოში და ინკუბაცია 12 დღის განმავლობაში. უჯრედების ლოგარითმული ზრდის აღდგენის შემდეგ, ვინკრისტინის მიმართ მათი მგრძნობელობა გამოიკვლია იმ უჯრედებთან შედარებით, რომლებიც არ მკურნალობენ ციტოზარით (კონტროლი). 4 ექსპერიმენტის შედეგი (MTT ტესტი)
ამრიგად, ქიმიოთერაპიის წამლის ერთჯერადი ზემოქმედება, რომელიც Pgp არ გადააქვს Pgp უარყოფით უჯრედებზე, იწვევს MDRI mRNA გენის სწრაფ (ერთ უჯრედულ ციკლში) ფუნქციურად კომპეტენტურ Pgp დაგროვებას და, რაც მთავარია, წინააღმდეგობის გამომუშავებას Pgp. ძირითადად მგრძნობიარე უჯრედები იძენენ Pgp შუამავლობით MDR- ს. ამ ფენომენის მექანიზმი არ არის Pgp- დადებითი უჯრედების შერჩევა, არამედ de novo ფენოტიპის გააქტიურება. როგორ ხდება ფორმირება Pgp შუამავლობით! MDR: მუშაობს ორივე მექანიზმი MDRX გენის ტრანსკრიფციის გააქტიურების ან mRNA სტაბილიზაციის გამო?
ნახ. 3 -ში ნაჩვენები ექსპერიმენტების დროს H9 უჯრედები დამუშავდა Ara C- ით თანდასწრებით ტრანსკრიფციის ინჰიბიტორები - აქტინომიცინი D, a -amanitin და ecteinascidin 743 (ET743). ყველა შესწავლილი ინჰიბიტორი აფერხებდა Ara C- ით გამოწვეულ MDRI mRNA დონის ზრდას.
ბრინჯი 3. ტრანსკრიპციული ინჰიბიტორები ხელს უშლიან MDR1 რნმ -ის დაგროვებას. H9 უჯრედები დამუშავდა 10 μM Ara C 24 საათის განმავლობაში. აქტინომიცინი D- ს, a-amanitin ან ET743 გარეშე ან თანდასწრებით. 3 ექსპერიმენტის შედეგები შეჯამებულია.
MRNA უჯრედების ნახევარგამოყოფის (სტაბილურობის) შესასწავლად Ara C მკურნალობდნენ 10 საათის განმავლობაში. და გადატანილია ახალ საშუალოზე ან საშუალოზე აქტინომიცინ D- თან ერთად და ინკუბაცია ხდება კიდევ 36 საათის განმავლობაში. არანამკურნალებ უჯრედებში, MDRI mRNA აღმოჩნდა ხანმოკლე: მისი ნახევარგამოყოფის პერიოდი იყო ~ 30 წთ. Ara C მკურნალობამ mRNA– ს ნახევარგამოყოფის პერიოდი 6 საათამდე გაზარდა. ამრიგად, MDRI mRNA დაგროვება და, შესაბამისად, Pgp შუამავლობით MDR განვითარება ციტოტოქსიკური სტრესის საპასუხოდ, გამოწვეულია არა მხოლოდ MDR1 ტრანსკრიფციის გააქტიურებით, არამედ ამ გენის mRNA სტაბილიზაციით.
MDR გააქტიურების უჯრედშიდა სიგნალიზაციის მექანიზმები ფიგურა 4 გვიჩვენებს, რომ H9 უჯრედების ერთჯერადი მკურნალობა TFA– ით, PKC აგონისტით, გამოიწვია MDRI გენის ინდუქცია. PKC– ს სპეციფიკური ინჰიბიტორები - ქელერიტრინი, კალფოსტინი C და ბის -ინდოლილმელემიდი I - ხელს უშლიდა MDR / phorbol ester და ქიმიოთერაპიის გააქტიურებას. Მსგავსი
მონაცემები მიღებულია K562 უჯრედებზე დამუშავებული Ara C, დოქსორუბიცინით ან TFA მითითებული PKC ინჰიბიტორების თანდასწრებით.
ბრინჯი 4. PCL ინჰიბიტორები ხელს უშლიან MDRI ინდუქციას. H9 უჯრედები მკურნალობდნენ 10 μM Ara C– ით 16 საათის განმავლობაში. PKC ინჰიბიტორების გარეშე ან თანდასწრებით. 3 ექსპერიმენტის შედეგები შეჯამებულია.
ამრიგად, PKD მნიშვნელოვანია MDRI– ის რეგულირებისთვის (და, შესაბამისად, MJI ფენოტიპის მიხედვით, ეს გენი შეიძლება გამოწვეული იყოს PKD აგონისტით, ხოლო PKD ინჰიბიტორები ხელს უშლიან MDRI– ს გააქტიურებას კიბოს საწინააღმდეგო საშუალებებით.
PKC– ის ფიზიოლოგიური აგონისტი არის დიაცილგლიცეროლი (DAT), რომელიც წარმოიქმნება ფოსფატიდილინოზიტოლ-4,5-დიფოსფატის (ნახ.) ჰიდროლიზის დროს ფოსფატიდილინოზიტოზოლ-სპეციფიური ფოსფოლიპაზა C და / ან ფოსფოტიდილქოლინის დაშლის დროს ფოსფოლიპიდის სპეციფიკური მოქმედების დროს ფოსფოლიპიდი (ბერიჯი, ირიჯი, 1984). Ara C ან დოქსორუბიცინით გამოწვეული MDRI აქტივაცია შეიძლება დაბლოკოს ნეომიცინის სულფატით და U73122, ფოსფატიდილინოზიტოლის სპეციფიური ფოსფოლიპაზა C ინჰიბიტორებით (სურ. 5). MDRI- ის გააქტიურება ფორბოლ ესტერით არის მგრძნობიარე ნეომიცინის სულფატისა და U73122– ის მიმართ, რადგან TFA არის PCD– ის უშუალო აგონისტი და ეს კინაზა ფუნქციონირებს დისტალურად ფოსფოლიპაზას C. ინჰიბირება ფოსფატიდილქოლინის სპეციფიკური
იუსფოლიპაზა C (მომზადება B609) არ შეცვლილა MOF 1 -ის გამოხატულება (სურათი 5). ეს შედეგები მიუთითებს იუსფათიდილინოსენგოლის სპეციფიური ფოსფოლიპაზონ C- ს მიერ PI2- ის ჰიდროლიზის მნიშვნელობაზე MOF 1-ის გააქტიურებაში.
ბრინჯი 5. ფოსფოლიპაზების C ინჰიბიტორები MDR– ის ინდუქციაში \.
H9 უჯრედები დამუშავდა 10 μM Ara C 16 სთ -ით. ნეომიცინის სულფატის გარეშე ან თანდასწრებით, U73122 ან D609. 3 ექსპერიმენტის შედეგები შეჯამებულია.
ფოსფოლიპაზა C ანაწილებს PI2 DAP და PIs. პირველი პროდუქტი ააქტიურებს PKC- ს, მეორე ზრდის უჯრედშიდა Ca2 + დონეს ეზოზოპლაზმური ბადედან მისი მობილიზაციის გამო. უჯრედშიდა Ca2 + -ის როლი MDRI– ის ინდუქციაში დადასტურდა Ca2 + -სპეციფიური იონოფორის A23187 და Caps + -ის ინჰიბიტორების თაფსიგარგინის ამ გენის გააქტიურებით; სპეციფიკური ჩელატორი Ca2 + BAPTA / AM ხელს უშლიდა MDR1– ის ინდუქციას როგორც ქიმიოთერაპიის წამლებით, ასევე TPA– ით (სურ. 6).
1 2 3 4 5 v 7 8 E 10 11 12 14 14 15 1617 18 19 რნ. ბ უჯრედშიდა Ca2 + როლი ინდუქციურ (NA) R1- ში.
H9 უჯრედები დამუშავდა MOI ინდუქტორებით \ 16 სთ. მარტო ან კალციუმის ჩელატორის BARTA / AM თანდასწრებით. ტრეკები: 1-დამუშავებული უჯრედები, 2,3-A23187; 4.5-
თაფსიგარგინი; 6,7-AgaC; 8,9-დოქსორუბიცინი; 10,11-ბლეომიცინი; 12,13-2-დეოქსი-გლუკოზა; 14,15-ნოკოდაზოლი; 16,17-სფინგომიელინაზა; 18,19-TFA. ლუწი ბილიკები: ინდუქტორი კენტია (1-ის გარდა): ინდუქტორი არის "-5 µM VARTA / AM.
MDR- ის გააქტიურებაში უჯრედშიდა და უჯრედშიდა Ca2 +- ის მონაწილეობის გასარკვევად ჩატარდა ექსპერიმენტების ორი სერია. პირველ რიგში, გენის გააქტიურება შეისწავლეს უჯრედებში ინკუბაციის პირობებში, Ca2 + - ის გარეშე. უჯრედული Ca2 + - ის მოცილება ხელს არ უშლიდა MDRI აქტივაციას ქიმიოთერაპიით და TPA– ით. მეორე, TMB-8 აგენტი, რომელიც ხელს უშლის Ca2 + უჯრედებში შესვლას და არ ცვლის უჯრედშიდა Ca2 + კონცენტრაციას, არ იმოქმედა MDRI ინდუქციაზე. ამრიგად, MDRX გააქტიურებისათვის საჭიროა უჯრედშიდა, მაგრამ არა უჯრედშიდა კალციუმი. ეს ექსპერიმენტები ადასტურებს ფოსფოლიპაზის C-> DAG- * PKC და PI3-> Ca2 + სასიგნალო გზების ფუნდამენტურ როლს MDRX გენის გააქტიურებაში სხვადასხვა ნივთიერებით, ქიმიოთერაპიის ჩათვლით.
თუმცა, PCD არ არის MDR- ის გააქტიურების უნივერსალური მექანიზმი. PKC აქტივობა ცალკეულ MDRX ინდუქტორებით დამუშავებულ უჯრედებში განსხვავებულია. თ< активирует ПКС, Ara С не оказывает существенного влияния на активность этой киназы, а церамид - вторичный мессенджер, накапливающийся в обработанных химиопрепаратами клетках (Bose et al., 1995), ингибирует ее (табл. 1).
ცხრილი 1. MDRI გენის ინდუქტორების გავლენა PCD აქტივობაზე.
PCL აქტივობის დამუშავება, pmol / მგ ცილა / წთ.
ციტოზოლის ნაწილაკების ფრაქცია
კონტროლი 119 ± 13 59 + 9
TFA, UNM 47 + 10 * 153 + 14 *
Ara C, 25 μM 143 + 16 65 + 10
კერამიდი, 1 μM 138 + 15 27 + 8 *
კერამიდი, YumkM 83 + 15 * 15 + 7 *
*რ<0,05 в сравнении с контролем (необработанные клетки). Данные 6 опытов.
PCC ინჰიბიტორებმა ჩელერიგრინმა და ბის-ინდოლნმალეიმიდ I– მა შეუშალა ხელი MDR \ Ara C, დოკეორუბიცინის და TPA– ს გააქტიურებას, მაგრამ არა კერამიდს (სურ. 7). ამრიგად, PCD– ის გააქტიურება არ არის წინაპირობა MDRX გენის ინდუქციისთვის. ზოგიერთი აგენტი (მაგალითად, ceramvd) ააქტიურებს PKL– სგან დამოუკიდებელ სასიგნალო მექანიზმებს ან მოქმედებს PKL– ის დისტანციურად.
ბრინჯი 7. Ceramnd ააქტიურებს MDR \ ს PCS ინექციის მიუხედავად.
H9 უჯრედები დამუშავდა 25 μM C2- კერამიდით 24 საათის განმავლობაში. მარტო ან PKC ინჰიბიტორების თანდასწრებით. ინჰიბიტორების ეფექტურობის კონტროლი - ბლოკავს მათ MDR აქტივაციას 10 μM ციტოზარის ზემოქმედებისას.
მიტოგენით გააქტიურებული ცილის კინაზები შეიძლება იყოს ასეთი მექანიზმები. დოქსორუბიცინი და Ara C კონცენტრაციებში, რომლებიც ააქტიურებენ MDR \ აძლიერებენ JNK1– ის აქტივობას, მაგრამ არა ERK1 / 2, ხოლო TPA ააქტიურებს ERK1 / 2 და JNK1– ის აქტივობა არ იცვლება (სურ. 8). ამ მონაცემების თანახმად, ERKI / 2 PD98059 ინჰიბიტორმა გააუქმა MDRI აქტივაცია TFA– ით, მაგრამ არა ქიმიოთერაპიით. ამრიგად, მიტოგენით გააქტიურებული ცილის კინაზები ემსახურება სხვადასხვა ნივთიერებების მიერ წარმოქმნილი MDR1 გამააქტიურებელი სიგნალების განსხვავების დონეს.
MAP კინაზას გააქტიურება დოქსორუბიცინით და TPA
ბრინჯი 8. MDR1 ინდუქტორებით MAP- კნაზების დიფერენციალური გააქტიურება. H9 უჯრედები მკურნალობდნენ დოქსორუბიცინით და TFA– ით. ERK1 / 2 და JNK1- ის საქმიანობა განისაზღვრა იმუნოპრეციპიტაციისა და ფოსფორილირებული სუბსტრატების შემდეგ. ინდუქტორების ეფექტები გამოიხატება როგორც თითოეული კინაზის აქტივაციის დონე დაუმუშავებელ უჯრედებთან შედარებით, რომლებშიც აქტივობა მიიღება როგორც 1. 3 ექსპერიმენტის მონაცემები შეჯამებულია.
ტრანსკრიტიკული ფაქტორი NFkB არის მექანიზმი უჯრედების სწრაფი რეაგირებისათვის გარე სტიმულებზე (კარინ, 1995). დასასვენებელ უჯრედში ეს ცილა არის ციტოპლაზმაში კომპლექსში ინჰიბიტორული ქვედანაყოფით; ზემოქმედების საპასუხოდ, NFkB გამოყოფს კომპლექსს, გადააქვს ბირთვში და ააქტიურებს გენს, რომლის მარეგულირებელ რეგიონებს აქვთ NFkB სავალდებულო ადგილები. NFkB ინჰიბიტორებმა PDTC, TPHMK და სალიცილატებმა ხელი შეუშალეს MDRX აქტივაციას ციტოზარით, დოქსორუბიცინით და TPA– ით (სურ. 9). განსაკუთრებით მნიშვნელოვანია, რომ კლინიკაში ფართოდ გავრცელებული სალიცილაპური პრეპარატები იყოს MDRI– ის გადაუდებელი აქტივაციის ეფექტური ბლოკატორები. უფრო მეტიც, ნატრიუმის სალიცილატმა გააუქმა MDRX– ის გრძელვადიანი (7 დღემდე) გააქტიურება ციტოსარით (სურ. 10), დადასტურებულია; NFkB- ის ღირებულება, როგორც MDR გააქტიურების მექანიზმი.
ბრინჯი 9. NFkB ინჰიბიტორების მიერ MDR1 ინდუქციის პრევენცია. H9 უჯრედები დამუშავდა 10 μM Ara C, 5 μM doxorubicin, ან 10 nM TFA 16 სთ. მარტო ან NFkB აქტივაციის ინჰიბიტორების თანდასწრებით. 4 ექსპერიმენტის შედეგები შეჯამებულია.
4, გარეცხეთ
ლ ჰა C- + + ----
სალიცილატი - - + \ s 5 7
დღეები აგასის გარეშე
ბრინჯი 10. ნატრიუმის მარილის გრძელვადიანი ეფექტი, როგორც MDRI ინდუქციის ინჰიბიტორი.
H9 უჯრედები დამუშავდა 10 μM Ara C 48 საათის განმავლობაში. ცალკე ან ნატრიუმის სალიცილატის თანდასწრებით, ხელახლა შეჩერებულია სუფთა გარემოში და ინკუბაცია ხდება კიდევ 1-7 დღის განმავლობაში.
NaKB- ის როლის დამყარების მნიშვნელობა იმაში მდგომარეობს იმაში, რომ ეს მექანიზმი "აერთიანებს" ციტოპლაზმურ და ბირთვულ მოვლენებს MON1 გენის გააქტიურებაში.ასეთი კავშირი დასტურდება ექსპერიმენტებით გენის პრომოუტერის გააქტიურების შესახებ; AYUSH ეგზოგენური No. kV. P50 და p65 OTcV ქვედანაყოფების კოტრანსფექციამ გამოიწვია -1202 / + 118 ნტ რეგიონის გააქტიურება. AYuSh პრომოუტერი (სურ. 11). ამასთან, მითითებულ რეგიონში, კანონიკური თანმიმდევრობა 5 "-COOIM ^ YUSS-3" (R-ნებისმიერი პურინის ბაზა, ალ-ნებისმიერი პირიმიდინის ბაზა) NaKB– სთან ან ჰომოლოგიურ თანმიმდევრობასთან ურთიერთქმედებისათვის არ იქნა ნაპოვნი. შესაძლებელია შემდეგი დაშვებები: 1) NaKB ურთიერთქმედებს დაუდგენელ თანმიმდევრობასთან -1202 / + 118 i.i. რეგიონში; 2) NaKB ააქტიურებს შუალედურ გენს (გენებს), რომლის პროდუქტი უკავშირდება -1202 / + 118 ნტ რეგიონს. და იწვევს MDR1 პრომოუტერს.
ბრინჯი 11. NFkB - MDR \ პრომოუტერის აქტივატორი.
K562 უჯრედები გადაყვანილ იქნა მითითებული კონსტრუქციებით და პლაზმიდით, რომელიც ატარებდა რენილა ლუციფერაზას SV40 პრომოტორის ქვეშ. ციცინათელა ლუციფერაზას აქტივობა, რომელიც ასახავს MDRX პრომოუტერის -1202 / + 118 ნტ რეგიონის ინდუქციას (დანიშნულია როგორც MDF ნორმალიზებული რენილა ლუციფერაზას აქტივობად).
MDR1 გენის პრომოუტერის რეგულირება.
L / L> L1- გააქტიურების სიგნალების გადაცემის გზებს უნდა ჰქონდეთ საერთო "კონვერგენციის წერტილი" - გენისა და mRNA მარეგულირებელი რეგიონი. MDRI პრომოუტერის შესასწავლად, ჩვენ გამოვიყენეთ მედიკამენტები, რომლებიც ახდენენ ქრომატინის ფიზიკოქიმიური მდგომარეობის მოდულირებას - ტრიქოსტატინი A ჰისტონის დეაცეტილაზების ინჰიბიტორებს და ნატრიუმის ბუტირატს, ქიმიოთერაპიის წამლების კლასების წარმომადგენლებს, რომლებიც გენების ტრანსკრიფციის უშუალო რეგულატორებს წარმოადგენენ. მნიშვნელოვანია შევადაროთ MDR გააქტიურების მექანიზმი ამ აგენტებით და Ara C და დოქსორუბიცინი, წამლები, რომელთა ქრომატინი არ არის პირდაპირი სამიზნე. ტრიქოსტატინი A და ნატრიუმის ბუტირატი ააქტიურებს ენდოგენურ MDRX გენს H9, K562 და SW620 უჯრედებში. MRNA– ს ზრდა (სურათი 12, მარცხენა პანელი) თან ახლდა ლუციფერაზას გააქტიურება -1202M18 bp რეგიონიდან. MDRI პრომოუტერი (სურათი 12, მარჯვენა პანელი).
ბრინჯი 12. ჰისტონის დეაცეტილაზას ინჰიბიტორები იწვევენ ენდოგენურ MDRX გენს და პრომოუტერს (გარდამავალი ტრანსფექცია).
Slash, საკნები H9, K562 და SW620 დამუშავდა მითითებული პრეპარატებით 24 საათის განმავლობაში. MDRX– ის mRNA დონე შესწავლილია GTCR– ში. მარჯვნივ: K562 უჯრედები გადანაწილდა -1202 / + P8 ns -luciferase კონსტრუქციით. 24 საათის შემდეგ. უჯრედები სტიმულირდება ამ პრეპარატებით 16 საათის განმავლობაში. წარმოდგენილია 3 ექსპერიმენტის შედეგი.
აღმოჩნდა, რომ ტრიქოსტატინი A და ბუტირატი ააქტიურებს MDRI- ს ტრანსკრიფციის ფაქტორის NF -Y ინვერსიულ XAAT ყუთთან ურთიერთქმედების გამო (Jin and Scolto, 1998), რაც ადასტურებს მოვლენათა ჯაჭვს "ინდუქტორი -ქრომატინის მოდიფიკაცია -> გააქტიურება MDRI პრომოუტერი ". თუმცა, "ქამრის ტრანსფექციის" პირობებში ქრომატინი პლაზმიდზე რჩება "არასრულყოფილი".
ქრომატინის როლის შესასწავლად MDRI ინდუქციაში, SW620 უჯრედები გადანაწილდა -1202 / + 118 np -Firefly luciferase კონსტრუქციით და პლაზმიდით, რომელიც ატარებს ნეოს; შემდეგ, უჯრედები შეირჩა გადარჩენისთვის ნეომიცინის თანდასწრებით. სელექციონერებში, ისევე როგორც გარდამავალ ტრანსფექციაში, ტრიქოსტატინი A და ნატრიუმის ბუტირატი იწვევდა ენდოგენური MDRI mRNA– ს დაგროვებას და იწვევს ტრანსკრიფციას -1202 / + 118 ir რეგიონიდან. ამ გენის პრომოუტერი. MDRI აქტივაცია ჰისტონის დეაცეტილაზას ინჰიბიტორებით გაუქმდა ET743– ით, ტრანსკრიპციული ბლოკატორით. ეს აჩვენებს პირდაპირ კავშირს MDRI mRNA- ს რაოდენობის ზრდას და ამ გენის პრომოუტერის გააქტიურებას ქრომატინის აცეტილირების გზით.
ეს მონაცემები მიღებულია აგენტების უჯრედებზე მოქმედების ქვეშ, რომლებიც პირდაპირ ცვლის ქრომატინის ფიზიკოქიმიურ მდგომარეობას. მექანიზმი ყოველთვის იდენტიფიცირებულია, ვინაიდან ქიმიოთერაპიის ყველა პრეპარატი (და სხვა ეგზოგენური სტიმულები) არ არის ქრომატინის უშუალო რეგულატორები? ჩვენ აღვნიშნეთ, რომ ნახევარგამოყოფის პერიოდი: MDRI mRNA იზრდება უჯრედებში, რომლებიც მკურნალობენ Ara C და TPA– ით. ნახ. 1: ნაჩვენებია, რომ TFA და ტრიქოსტატინი A არიან MDRI- ის პრომოტორული აქტივობის (ტრანსკრიფცია) ძლიერი გამომწვევები, ხოლო არც Ara C, არც დოქსორუბიცინი და არც კერამიდი არ ააქტიურებენ პრომოუტერს ან იწვევენ მხოლოდ სუსტ ეფექტს.
ბრინჯი 13. MDR აქტივატორების ეფექტები MDRI პრომოუტერის ინდუქციაზე. K562 უჯრედები გადანაწილდა -1202 / + 118 np -Firefly luciferase კონსტრუქციით, იყოფა თანაბარ ნაწილებად და სტიმულირდება 16 საათის განმავლობაში. მითითებულ წამლებთან ერთად.
ლუციფერაზას აქტივობა არანამკურნალებ უჯრედებში, ნორმალიზებულია უჯრედის ლიზატებში პროტეინის მთლიანი შემცველობით, მიღებული იყო როგორც 1. შედეგები განისაზღვრა 3 ექსპერიმენტში.
ეს შედეგები მიუთითებს იმაზე, რომ mRNA A / III1 დონის ზრდა ხდება როგორც ტრანსკრიპციის გააქტიურების შედეგად (TFA, ტრიქოსტატინი A), ისე პრომოუტერის (ციტოზარი, დოქსორუბიცინი, კერამიდი) პირდაპირი ინდუქციის გარეშე. ამ უკანასკნელ შემთხვევაში, უნდა იყოს აღიარებული mRNA სტაბილიზაციის მექანიზმები ან შუალედური გენის გააქტიურება, რომლის პროდუქტი იწვევს MIEK პრომოუტერს ან ასტაბილურებს ტრანსკრიპტს (იხ. ექსპერიმენტები ეგზოგენური NKB– ით).
ცხრილი 2. სასიგნალო მექანიზმების ინჰიბიტორები, რომლებიც ხელს უშლიან MF1 გენის cntozprom– ის გადაუდებელ გააქტიურებას.
წამლის უჯრედშიდა სამიზნე ინჰიბიტორული კონცენტრაცია
ჩელერიტრინი PKS 10 μM
კალფოსტინი C PKS 1 μM
ბის-ინდოლილი-
maleimide I PKS 5 μM
VARTA / AM Ca2 + 5 μM
PDTC No. kV 5 μM
GFKhMK No.kV 25 μM
ნატრიუმის სალიცილატი no. kV 20 მმ
იუტირინი No kV 10 მმ
მაღალი პლაზმის ზეთერები
ცხიმოვანი მჟავების მემბრანა? იუმკგ / მლ
1KTSHGOMISCHSH B ტრანსკრიპტის გახანგრძლივება? 500-1000 ნგ / მლ
x-amanitin რნმ პოლიმერაზა II 9 მკგ / მლ
zheinascischsh 743 არ არის დადგენილი 100 ნმ
ცხრილი 2 გვიჩვენებს ფარმაკოლოგიურ აგენტებს, რომლებიც წარმოადგენენ სიგნალის გადაცემის ინჰიბიტორთა ჯგუფებს, რომლებიც ხელს უშლიან MDR / წიგოსარის ან დოქსორუბიცინის გააქტიურებას H9 და K562 ლეიკემიის უჯრედებში.
Pgp– ს შუამავლობით MDR– ის დაძლევა: პლაზმური მემბრანა არის სამიზნე
ციტოტოქსიკური მოქმედება.
ამრიგად, Pgp– ით შუამავლობით MDR შეიძლება საკმაოდ სწრაფად ჩამოყალიბდეს ერთი უჯრედის გაყოფის დროს და შენარჩუნდეს გადარჩენილი უჯრედების თაობებში. მრავალი სტიმული არის MDR– ის ინდუქტორები, მათ შორის ის, რაც კლინიკებში გამოიყენება სხვადასხვა ქიმიური ჯგუფის კიბოს საწინააღმდეგო პრეპარატების მიერ. Pgp არის მექანიზმების ოდა, რომელიც აფერხებს დაპროგრამებული სიკვდილის გააქტიურებას (აპოპტო (Johnstone et al., 1999). აქედან გამომდინარე, სიმსივნე, რომელსაც აქვს პირველადი წინააღმდეგობა აპოპტოგენური სტიმულის მიმართ და სწრაფად იძენს MDR მკურნალობის საპასუხოდ, არის თერაპიის განსაკუთრებული გამოწვევა. არის სტრატეგიები მრავალფუნქციური წინააღმდეგობის დასაძლევად?
შესწავლილია ასეთი უჯრედების სიკვდილი იმუნიტეტის ეფექტორების მოქმედებით. ამ მიდგომის წინაპირობა იყო მონაცემები სპლენოციტების მიერ ინოკულაციური მიელომის უარყოფის შესახებ, რომლებიც გროვდება თაგვების ვაქცინაციის დროს; იგივე სიმსივნე, მოდიფიცირებული ციტოკინების გამოხატვისათვის (ტურნერი და სხვ., 1996). ვინაიდან ქვეპუნქტების MPC1 IDoxlO-1 და MPC1 1Dox10-2 თვისებები მსგავსი იყო, MPCllDoxlO-1 უჯრედები ქვემოთ არის გაანალიზებული.
MDR ფენოტიპი სელექტანტებში ხასიათდებოდა mdrVo გენის გადაჭარბებული გამოხატულებით, კალცინის ტრანსპორტის შემცირებით და დოქსორუბიცინ ვინკრისტინის წინააღმდეგობით, Pgp სუბსტრატით. მიელოლის გადანერგვის მიმართ იმუნიტეტის შესაქმნელად MPC11 და MPCI IDoxlO-1 უჯრედები გადანაწილდა ციტოკინების GM-KS IL-12 cDNA– ით. უჯრედების ინოკულაცია ხუთჯერ აღემატებოდა სიმსივნის 100% -იან მინიმალურ დოზას.
ცხრილი 3. სიმსივნის უარყოფის სიხშირე კონტროლში და
იმუნიზებული ცხოველები.
თაგვის ვაქცინაცია
MPC11 MPCllDoxlO-1
უცვლელი 0/15 * 0/10
იმუნიზაცია MPC11 უჯრედებით:
დასხივებული უჯრედები 1/15 0/10
■ M-CSF/IL-12-ტრანსფიცირებული უჯრედები 15/15 ** 9/10 **
იმუნიზაცია MPC1 Schox10-1 უჯრედებით:
დასხივებული უჯრედები 0/15 0/10
"M-CSF/IL-12-ტრანსფიცირებული უჯრედები 9/10 ** 10/10 **
სიმსივნის უარყოფის მაჩვენებელი: მრიცხველში - თაგვების რაოდენობა, რომელთაც არ განუვითარდათ სიმსივნე; 1 შემცვლელში - აცრილი თაგვების საერთო რაოდენობა, ** Р<0,001 по критерию х2 в сравнении с еиммунизированными (интактными и вакцинированными только облученными клетками) ивотными.
ცხრილი 3 გვიჩვენებს, რომ MPC11 და MPC1 IDoxIO უჯრედები სიმსივნის მატარებელია: იმუნიზებული ცხოველების 100% -ში სიმსივნეები გამოჩნდა შესაბამისი უჯრედების ინოკულაციიდან 8-10 დღის შემდეგ. თუმცა, სხვა უჯრედების გამომხატველი ციტოკინით იმუნიზირებულ თაგვებში სიმსივნეები არ გამოჩნდა (ინოკულაცია MPC11– ით) ან იშვიათი იყო (ინოკულაცია რეზისტენტული ქვე -ხაზით). სიმსივნის საწინააღმდეგო იმუნიტეტი გრძელვადიანი აღმოჩნდა: სიმსივნეები არ გამოჩნდა ახალი უჯრედების ინოკულაციიდან 5 კვირის განმავლობაში. დამყნობილი უჯრედების უარყოფის მაჩვენებელი მსგავსი იყო MPC 11 უჯრედებით და რეზისტენტული ქვე -ხაზით იმუნიზირებულ ჯგუფებში. ეს შედეგები მიუთითებს ავთვისებიანი რეზისტენტული უჯრედების გარდაცვალების შესაძლებლობას ინ ვივო ექსპერიმენტებში აღმოჩენილი ფაქტორ (ფაქტორების) ზემოქმედებისას.
ეს ფაქტორი არის ელენთაში წარმოქმნილი CTL– ები იმუნურიზაციის საპასუხოდ ციტოსექსპრესიულ უჯრედებთან. ლეღვი 14 გვიჩვენებს, რომ თაგვების სპლენოციტები, რომლებიც იმუნიზირებულნი არიან MPC 11 უჯრედებით, რომლებიც გამოხატავს სხვა GM-CSF და IL-12 ლიზებს სამიზნე უჯრედებს MPC 11 და MPCllDoxlO-1 თითქმის იგივე ეფექტურობით (სურ. 14).
-ér-MPCU / MPCJlDoilO
MRS11 / MRSI
ეფექტიანი გ. მისია
ბრინჯი 14. მშობლებისა და Pgp- დადებითი უჯრედების CTL- ების ანალიზი.
ნუმერატორი: უჯრედების იმუნიზაცია, მნიშვნელი: უჯრედები საინექციო.
შესაბამისად, ციტოკინების გამომხატველი უჯრედის ვაქცინით ვაქცინირებულ ცხოველებში სიმსივნის საწინააღმდეგო იმუნიტეტი დაკავშირებულია MDR უჯრედების მგრძნობელობას CTL– ების ლოგიკური მოქმედების მიმართ.
CTL– ის მკვლელი აქტივობა განპირობებულია ამ უჯრედების მიერ CD95 / Fas ლიგანდის და / ან ტანდემური გრანიზმით B- პერფორინის სეკრეციით (Vetke, 1994). იმ საკითხის გადასაჭრელად, თუ რომელი მექანიზმი მუშაობს შესწავლილ სისტემაში, შესწავლილი იქნა უჯრედების გადარჩენა Fas ლიგანდის თანდასწრებით. უჯრედები MPC11 და MPC1 Shox10-1 მდგრადია Fas ლიგანდის შედარებით მაღალი კონცენტრაციების მიმართაც კი. რა ამრიგად, გრანიზი B / perforin უნდა ჩაითვალოს კანდიდატად იმუნური UTJ– ების ციტოტოქსიკური მოქმედების მექანიზმის როლზე. მართლაც, იმუნო] CTL– ის პრეინკუბაციამ კონკანამიცინ A– სთან, პერფორინის დამუშავების ინჰიბიტორთან, შეამცირა MPCllDoxl 0-1 სამიზნე უჯრედების ლიზი (სურათი 15).
MDR– ის დასაძლევად გზების მოსაძიებლად მნიშვნელოვანია, რომ MJB– თან ერთად ქვემდებარე ხაზებმა შეინარჩუნონ მგრძნობელობა ციტოტოქსიკური მოქმედების მიმართ პერფორინის მიერ პლაზმური მემბრანის მთლიანობის დარღვევის გამო. პერფორინის მიერ წარმოქმნილი პლაზმის მემბრანის პორების მეშვეობით გრანზიმის B უჯრედში შეღწევა გამოიწვევს ეფეკგორიული კასპაზების გააქტიურებას. დაჩშუნდი
მკვლელი ტანდემი - აგენტის ერთდროული მოქმედება, რომელიც ქმნის ფორებს გარე გარსში და პროტეაზა - საშუალებას გაძლევთ გამოიწვიოს უჯრედების სიკვდილი, რომლებიც მდგრადია მრავალი გარე გავლენის მიმართ. შესაბამისად, პლაზმური მემბრანა არის მნიშვნელოვანი სამიზნე თერაპიისთვის, რომელიც მიმართულია მდგრადი უჯრედების აღმოფხვრაზე.
T; co k) ოჰ ოჰ ოჰ
n (o n ii) o o
ეფექტიანი: სამიზნე
ბრინჯი 15. Granznm B / psrforin - CTL- შუამავლობით სიკვდილის მექანიზმი. კონკანამიცინი A (მსუბუქი ზოლები) ამცირებს CTL შუამავლობით MPC1 Schox10-1 უჯრედების ლიზისს. მუქი ბარები - CTL სამიზნეების ლიზინგი კონკანამიცინთან წინასწარი ინკუბაციის გარეშე წარმოდგენილია 3 წარმომადგენლობითი ექსპერიმენტიდან ერთი.
Zerschid და თავისუფალი ჟანგბადის რადიკალები MDR დაძლევისას. თუ პლაზმური მემბრანა არის სასურველი სამიზნე, როგორ შეიძლება მისი დაზიანება? განსაკუთრებით სასურველია, რომ ასეთ ეფექტს განახორციელოს $> მსახიობი, რომელიც საერთოა მრავალი კიბოს საწინააღმდეგო პრეპარატისათვის. ერთ -ერთი ასეთი "შუამავალი" არის ceramvd. იმისათვის, რომ კერამიდი იყოს ეფექტური MDR– ის სამკურნალოდ, ის უნდა აკმაყოფილებდეს მინიმუმ ორ მოთხოვნას:;) არ უნდა იყოს ტრანსპორტირებული უჯრედიდან Pgp– ით; 2) გამოიწვიოს სიკვდილის გზები, რომლებიც მოქმედებენ რეზისტენტულ უჯრედებში. საკმარისია თუ არა ტრანსმემბრანული გადამყვანის, MDR– ის წამყვანი მექანიზმის „გვერდის ავლით“, რიგი გავლენისადმი მდგრადი უჯრედების დაკარგვის გამოწვევა?
კერამიდი არ ტრანსპორტირდება P- ჰპიკოპროტეინით.
მას შემდეგ, რაც კერამიდი გროვდება მრავალი ქიმიოთერაპიული საშუალების ზემოქმედების საპასუხოდ, ჩვენ გამოვიკვლიეთ აკმაყოფილებს თუ არა ეს მეტაბოლიტი ამ პირობებს. აღმოჩნდა, რომ კერამიდის დაგროვების კინეტიკა K562- ის მშობლის უჯრედებში და მათი Pgp- დადებითი ქვესტრიქონი K5621 / 89 პრაქტიკულად ერთნაირია (სურ. 16). ამავდროულად, K562-D9 უჯრედებმა დაგროვდა მნიშვნელოვნად ნაკლები როდამინი 123 ვიდრე K562 უჯრედები (Pgp- შუამავლობით ტრანსპორტის კონტროლი). შესაბამისად, კერამიდი არ არის Pgp– ს სატრანსპორტო სუბსტრატი.
8000 6000 4000 2000 0
0 0.05 0.2 1 5 C5-BOO! RU- კერამიდი
ბრინჯი 16. Pgp არ ახდენს მოკლე ჯაჭვის კერამიდის ტრანსპორტირებას. K562 და K5621 / 59 უჯრედები ინკუბირებულია 30 წუთის განმავლობაში. C5- კერამიდით კონიუგირებული ფტორქრომის VSYu1RU (ზედა პანელი) ან როდაამინით (R1) 123 (ქვედა პანელი). უჯრედების ლუმინესცენცია შესწავლილია ნაკადის ციტომეტრიის გამოყენებით. მონაცემები 3 ექსპერიმენტიდან.
არ იყო განსხვავება სინთეზური (C2) და ბუნებრივი (Cu) კერამიდების ციტოტოქსიკურობაში K562 და K5621 / 89 უჯრედებში, ასევე წყვილებში
მშობლის უჯრედები და სელექტანტები: MCP-7 და MCP-7Ac1g, KV-3-1 და KV-8-5-11. ამრიგად, კერამიდი იწვევს Pgp- უარყოფითი და Pgp- დადებითი უჯრედების სიკვდილს თანაბარი ეფექტურობით.
არ ერევა პლაზმური მემბრანის მთლიანობის დარღვევაში.
კერამიდის მოქმედებით K5621 / 59 უჯრედების გარდაცვალების მექანიზმების შესასწავლად, შეისწავლეს შემდეგი პარამეტრები: კასპაზების 9 და 3 გააქტიურება, პოლი-ADP-ribose polymerase (PACP) გახლეჩა, ინტერუკლეოსომური დნმ-ის დეგრადაცია, ფოსფატიდილსერინის ინტრამემბრანული გადაადგილება , (ანექსინ V- ს შეკავშირებით), ტრანსმემბრანული მიტოქონდრიული პოტენციალი და პლაზმური მემბრანის მთლიანობა (PI უჯრედებში ჩართვით). ლეღვი 17 გვიჩვენებს, რომ 24 საათის განმავლობაში. კერამიდის ზემოქმედება, მომაკვდავი უჯრედების პროცენტულმა მაჩვენებელმა მიაღწია 37 + 4%-ს. "ორმაგი დადებითი" (დანართი ^ PI4) უჯრედების გამოჩენა განსაკუთრებით მნიშვნელოვანი აღმოჩნდა, რაც იმას ნიშნავს, რომ K562LB9 უჯრედებში კერამიდი ადრეულ ეტაპზე იწვევს პლაზმური მემბრანის გამტარიანობის დარღვევას (ნეკროზი ან გვიან აპოპტოზი). ამავდროულად, კლასიკური აპოპტოზისათვის დამახასიათებელი კასპაზა 3 -ის გააქტიურება არ გამოვლინდა; RAS> პროტეოლიზი> იყო გვიანდელი მოვლენა (ექსპოზიცია 48 საათის განმავლობაში).
კერამიდის მოქმედებას K5621 / B9 უჯრედებზე პრაქტიკულად არ ახლდა მიტოქონდრიის ტრანსმემბრანული პოტენციალის ცვლილება: მომაკვდავ უჯრედებში ეს მაჩვენებელი არ განსხვავდება დაუმუშავებელი უჯრედების შესაბამისი მნიშვნელობისაგან. ინტერუკლეოსომური დნმ-ის ფრაგმენტაცია არ იყო სიკვდილის წამყვანი ნიშანი: მოვლენების მხოლოდ 11% მოხდა ქვე-01 რეგიონში (ჰიპოდიპლოიდური უჯრედები), ხოლო მომაკვდავი უჯრედების პროცენტული მაჩვენებელი (ანექსინი + / PI ჯამი), ანექსინი 7PI + და ორმაგი დადებითი ) იგივე ხანგრძლივობით ამრიგად, კერამიდის მოქმედებით K562LB9 უჯრედების გარდაცვალების ყველაზე მნიშვნელოვანი ნიშანი არის პლაზმური მემბრანის მთლიანობის ადრეული დარღვევა - ნეკროზი.
დრო (საათი) კერამიდით
■ К562, Annexin + □ К562, Annexin + PI + BK562i / S9, nH +
IK562.PI + V K562i / S9, AHHeKCHH + ■ K562 | 789, დანართი + PI +
ბრინჯი 17. უჯრედის სიკვდილის მაჩვენებლები K562 და K562L / S9 კერამიდის ზემოქმედებით. უჯრედები დამუშავდა 25 μM C2- კერამიდით მითითებული დროის ინტერვალებისათვის. V- პოზიტიური, პროპიდიუმის იოდიდის (PI +)-დადებითი და ორმაგად დადებითი (ანექსინი +PI +) უჯრედების პროცენტული ანექსია განისაზღვრა ნაკადის ციტომეტრიით.
K562 უჯრედებში p53 არ ფუნქციონირებს და ქიმერული ცილა კინაზა Bsr / Ab1 გამოხატულია, ე.ი. ამ უჯრედებში არის აპოპტოზისადმი წინააღმდეგობის მოლეკულური განმსაზღვრელი ფაქტორები. ამრიგად, ქვეტიპი K562i / S9 შეიძლება ჩაითვალოს პლეოტროპული წინააღმდეგობის მოდელებად, სადაც Pgp არის ერთ -ერთი მექანიზმი. რაც უფრო მნიშვნელოვანია მონაცემები კერამიდის სიკვდილის გამომწვევი უნარის შესახებ! ასეთი უჯრედები ნეკროზის მექანიზმით.
ჟანგბადის თავისუფალი რადიკალები შეიძლება იყოს მეტაბოლიტები, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს ნეკროზი. K562 / iS9 უჯრედების კერამიდინით გამოწვეულ სიკვდილში მათი როლის დასადგენად, შესწავლილი იქნა კერამიდის ციტოტოქსიკურობა N აცეტილცისტეინის (NAC), ჟანგბადის რადიკალური ჩელატორის თანდასწრებით და ჟანგბადის რადიკალური წარმოქმნის კინეტიკა უჯრედებში დამუშავებული კერამიდი გამოიკვლიეს. B ნახ .18 გვიჩვენებს, რომ NAC- მ გააუქმა კერამიდის ციტოტოქსიკურობა. ამრიგად, თავისუფალი ჟანგბადი გადამწყვეტ როლს ასრულებს კერამიდის ზემოქმედებისას რეზისტენტული * უჯრედების სიკვდილში. სურათი 19 გვიჩვენებს დამოკიდებულებას
უჯრედების ლორესცენცია დატვირთული OSROA– ით კერამიდის მოქმედების მომენტიდან და
"Ntrol აგენტი - წყალბადის ზეჟანგი, O2 დონორი." H2O2 გამოიწვია სწრაფი
20 წუთის შემდეგ - უჯრედების ფლუორესცენციის ზრდა. კერამიდი გამოიწვია
იუპოზიტური ეფექტი: 15 წუთის შემდეგ ზემოქმედება დაფიქსირდა მკვეთრი - 1.5 -ით
რიგი - ამცირებს ბზინვარებას. მხოლოდ 24 საათის განმავლობაში. დამუშავების ინტენსივობა
უჯრედის გორესცენცია დაუბრუნდა ამ მაჩვენებლის დონეს
დამუშავებული უჯრედები და გაიზარდა 48-72 საათით. გავლენა, როდესაც თანხა
დამსხვრეული უჯრედების რაოდენობა უკვე დიდი იყო (სურ. 17). ამიტომ, დამუშავებული
ჭაობის უჯრედები, თავდაპირველად ხდება შემცირება და დაჟანგვა
ხდება მოგვიანებით, ალბათ უტილის სუბსტრატების აღდგენის რესურსების ამოწურვის შედეგად.
ნახ .18. NAC ბლოკავს K562i / S9 უჯრედის სიკვდილს. უჯრედები დამუშავდა Cr-ceramide– ით ან 5 მმ NAC– ით. მხოლოდ NAC არ ახდენს გავლენას უჯრედების სიცოცხლისუნარიანობაზე.
ბრინჯი 19. დაჟანგვა K562 | / 89 უჯრედში კერამიდის მოქმედებით. უჯრედები დამუშავდა 25 μM C2- კერამიდით მითითებული დროის ინტერვალებისთვის. უჯრედშიდა ჟანგვა შეისწავლა უჯრედების ფლუორესცენციის შეცვლით, დატვირთვით E> CGOA. H2O2 გამოიყენებოდა როგორც კონტროლი "ჟანგბადის აფეთქებაზე". 3 ექსპერიმენტის შედეგები შეჯამებულია.
შედეგების განხილვა
MOI1 გენის გააქტიურების მექანიზმების ანალიზი გვაძლევს შემდეგს: 1) ALM გენი და MDR ფენოტიპი შეიძლება გამოწვეული იყოს უჯრედების მოკლევადიანი ზემოქმედებით მრავალი ნივთიერების მიმართ. MBN \ და Pgp დაგროვება ვლინდება უჯრედებში, რომლებიც გადარჩნენ შეწყვეტის შემდეგ! ქსენობიოტიკების ეფექტები. ამრიგად, MYR გენის ეპიგენეტიკური გააქტიურება უზრუნველყოფს სტაბილურ MDR ფენოტიპს.
2) MDR– ის გადაუდებელი ფორმირება რეგულირდება უჯრედის ზოგადი სასიგნალო მექანიზმებით. მართლაც, ფოსფოლიპაზების გააქტიურება, უჯრედშიდა Ca2 +–ის მობილიზება, NaKB– ის ინდუქცია და სტრესით გააქტიურებული ცილის კინაზების კასკადები არის მექანიზმები, რომლებიც უზრუნველყოფენ უჯრედის რეაგირებას სტრესზე. გარდა ამისა, ტრანსკრიფციის ფაქტორები და ფუნქციურად აქტიური საიტები
MDR1 გენის ipoMOTope, რომლებიც მნიშვნელოვანია MDR გააქტიურებისათვის, არ არის უნიკალური ამ ენისთვის: JF-Y, CCAAT ყუთი და ქრომატინის მოდულირების სიგნალები მნიშვნელოვანია ევკარიოტული გენების ტრანსკრიფციის რეგულირებისათვის. ეს, როგორც ჩანს, ხსნის MDRX გენის მაღალ ინდუქციურობას: ეს გენი გააქტიურებულია პესტიციდების სტიმულებით სხვადასხვა ჰისტოგენეზის უჯრედებში. თავის მხრივ, MDRX– ის რეგულირება სტრესის განმსაზღვრელი საერთო მექანიზმებით ხაზს უსვამს MDR გააქტიურების ივიოლოგიურ მნიშვნელობას, ეგზოგენურ ზემოქმედებაზე მაღალი დონის სხვა რეაქციებთან ერთად.
3) MDR III- ის გააქტიურების მექანიზმების სიმრავლე და ურთიერთშემცვლელობა. 20) განისაზღვრება ამ ფენოტიპის რეგულირების მრავალდონიანი ხასიათით. თითოეულ ამ დონეზე, უჯრედს ეძლევა შესაძლებლობა "აირჩიოს" MDR აქტივაცია. პირველ რიგში, არჩევანი ნაკარნახევია სტიმულის ხასიათით (სხვადასხვა მექანიზმი მოქმედებს სხვადასხვა მექანიზმის საშუალებით). მეორეც, კონკრეტული მექანიზმი დამოკიდებულია გარკვეული სასიგნალო მოლეკულების არსებობაზე და მათ ურთიერთქმედებაზე ამ ტიპის უჯრედებში. მესამე, არჩევანი ხდება ფაქტობრივი ანკრიპციული მექანიზმების დონეზე (ქრომატინის მდგომარეობა DRI პრომოუტერის რეგიონში). ამ მოსაზრებების გათვალისწინებით, ცხადია, რომ MDRX– ზე მაღალი ინდუქციურობის მიზეზები (ფართო ურთიერთშემცვლელობა და სასიგნალო და ტრანსკრიპციული მექანიზმების გადაკვეთა უზრუნველყოფს მრავალი იმულისა და სხვადასხვა ტიპის უჯრედების ინდუქციას), ხოლო ინდუქციის არარსებობის შემთხვევები არ არის გამოწვეული ყველა სტიმულით. და არა რაიმე ექსპერიმენტულ სისტემაში).
MDRX გენის გადაუდებელი გააქტიურების სქემა (ციტოზარისა და TPA- ს მაგალითით) ნაჩვენებია ნახ .20 -ში.
MDRX ინდუქციის კონცეფცია, როგორც დაგვიანებული მოვლენა, რომელიც თავდაპირველად ითვალისწინებს toro MDRX ინდუქციისათვის საჭირო ცილების გააქტიურებას, კიდევ უფრო ართულებს MDR ეპიგენეტიკური გააქტიურების სურათს.<ой каскадный механизм может быть главным или дополнительным,
MY 1 რეგულირება ქიმიოთერაპიით და TFA– ით
ნეომიცინი, 1173122
ტრანსკრიფციის mRNA სტაბილიზაციის გააქტიურება
ბრინჯი 20. MY 1 გენის გადაუდებელი გააქტიურების მექანიზმები.
ტრანსკრიფციის სიჩქარის გაძლიერება ან შენარჩუნება. უჯრედის უნარი აირჩიოს MDR ინდუქციის სხვადასხვა გზები - პირდაპირი (შუალედური გენის გააქტიურების გარეშე) და / ან სხვა გენების ინდუქციით გამოწვეული - კიდევ უფრო ართულებს MDR განვითარების პრევენციას.
LA გენის ტრანსკრიფციის გააქტიურება) /? 1 არ არის MDR ფორმირების ერთადერთი მექანიზმი. ეპიგენეტიკური რეგულირების კიდევ ერთი მნიშვნელოვანი კომპონენტი შეიძლება იყოს IOC 1 nRNA– ს სტაბილიზაცია. შესაძლებელია, რომ რაც შეეხება ბალანსს MYR 1 mRNA ტრანსკრიფციის ინდუქციასა და სტაბილიზაციას შორის, სხვადასხვა ინდუქტორების გავლენის ქვეშ MDR გააქტიურების მექანიზმები და უჯრედის სხვადასხვა ტიპში ასევე განსხვავებულია. ეს ვარაუდი შეესაბამება MyNX გენის გამოხატვის მრავალ დონის რეგულირების კონცეფციას (სურ. 19).
4) MDR- ის მიზანმიმართული პრევენცია შესაძლებელია M) L1- გააქტიურების სიგნალების გადაცემის მექანიზმების დამკვიდრებით. კლინიკაში MDR- ის განვითარების თავიდან აცილების აუცილებლობა დადასტურებულია MDR ნაწლავის და წამლის ციტოტოქსიკურობას შორის ურთიერთობით. მართლაც, ტოქსინებით დამუშავებულ უჯრედებში mRNA / £ Y? 1 დონე იზრდება ამ უკანასკნელის კონცენტრაციის მატებასთან ერთად. შესაბამისად, მაღალი დოზის ქიმიოთერაპიის რეჟიმების გამოყენებამ (მკურნალობის ეფექტურობის გასაუმჯობესებლად გამართლებული) შეიძლება გამოიწვიოს MDR განვითარება გადარჩენილ უჯრედებში. ნეოპლაზმის სრული რეზორბციისთვის საჭირო წამლების კონცენტრაცია შეიძლება იყოს უფრო მაღალი ვიდრე პაციენტისათვის ასატანი, რაც განსაზღვრავს ქიმიოთერაპიაში დოზების გაზრდის ზღვარს. უჯრედული სიგნალის ანტაგონისტები ზემოთ გამოვლენილი შეიძლება იყოს მომავალი MDR წამლების ბლოკატორების პროტოტიპები, რომლებიც გამოიყენება ტრადიციულ კიბოს საწინააღმდეგო პრეპარატებთან ერთად. ამრიგად, MDR– ის გადაუდებელი განვითარების პრევენცია აძლიერებს ამ კლინიკურად არასასურველი ფენომენის დაძლევის შესაძლებლობას.
როგორია ჩამოყალიბებული MDR დაძლევის მიდგომები? რეზისტენტულ უჯრედებში ერთ -ერთი "დაუცველი" სამიზნე შეიძლება იყოს პლაზმური მემბრანა. მისი მთლიანობის დარღვევა იწვევს მდგრადი უჯრედების სიკვდილს: Pgp არ აფერხებს სიკვდილს ნეკროზის გამომწვევი ეფექტებიდან. გამოვლენილია თერაპიული მნიშვნელობის მქონე უჯრედული სტრუქტურა მიზნობრივად. ცხადია, უბრალოდ მემბრანზე დაფუძნებული აგენტები შეუსაბამოა ქსოვილების უკონტროლო ტოქსიკურობის გამო, მათ შორის არა ნეოპლასტიკური. აუცილებელია ისეთი აგენტების პოვნა, რომლებიც კვეთენ Pgp ბარიერს და იწვევენ პლაზმური მემბრანის დაზიანებას, ე.ი. ნეკროზის გასააქტიურებლად წამლის უჯრედული კონცენტრაციის შესაქმნელად. ნივთიერება, რომელიც აკმაყოფილებს მითითებულ მდგომარეობას, შეიძლება იყოს კერამიდი, სფინგოლიპიდი, რომელიც გროვდება უჯრედში მრავალი სტიმულის საპასუხოდ, მათ შორის კიბოს საწინააღმდეგო პრეპარატების ჩათვლით. კერამიდი არ ტრანსპორტირდება Pgp– ით, რაც უზრუნველყოფს, რომ ამ მეტაბოლიტის კონცენტრაცია რეზისტენტულ ნაპრალებში საკმარისი იყოს სიკვდილის ინდუქციისათვის.
კერამიდის ტოქსიკურობა რეზისტენტულ უჯრედებზე ნიშნავს იმას, რომ ამ უჯრედებში კერამიდის დაგროვებაზე დისტანციური სასიგნალო გზები არ არის დაბლოკილი არც Pgp– ით და არც სხვა მექანიზმებით, რომლებიც დაკავშირებულია MDR– ის შერჩევასთან. შესაბამისად, წინააღმდეგობის დაძლევა უნდა იყოს დაკავშირებული მდგრადი უჯრედებში კერამიდის (და, შესაძლოა, სხვა ტოქსიკური მეტაბოლიტების) დაგროვების გზების ძიებასთან. კერამიდის ციტოტოქსიკურობისათვის საჭიროა კავეოლაები ან მათი ანალოგები - ფოსფოლიპიდებითა და ცილებით მდიდარი ქვემემბრანული წარმონაქმნები და გროვდება MDR– ის შერჩევისას (La \ et al., 1998). მნიშვნელოვანია, რომ MDR– ის შერჩევა შეიძლება თან ახლდეს უჯრედული მოლეკულური სამიზნეების ზრდას კიბოს საწინააღმდეგო თერაპიისთვის.
თავისუფალი ჟანგბადის ფორმები არის სიკვდილის აუცილებელი მექანიზმი, რომელიც გამოწვეულია კერამვდით. ეს ბადებს კითხვას მიტოქონდრიის როლის შესახებ MDR უჯრედების გადარჩენაში. მიტოქონდრიული გზა
იძლევა დამატებით სიგნალებს ეფექტიანი კასპაზების გააქტიურებისათვის. L ლითონქონდრიული "მარყუჟი" არის მძლავრი ფაქტორი ასეთი სიგნალების გასაძლიერებლად, "საკვები, მიტოქონდრიის ელექტრული პოტენციალის ვარდნა და განსაკუთრებით ციტოქრომ C- ის პროპლაზმაში გათავისუფლება უზრუნველყოფს სიკვდილის პროცესის შეუქცევადობას. ვინაიდან შეუძლებელია იმის პროგნოზირება, იქნება თუ არა წინააღმდეგობის შერჩევა დაკავშირებული სიკვდილის ამა თუ იმ გზის ინაქტივაციასთან, მნიშვნელოვანია, რომ მხოლოდ "საიმედო" კასკადმა შეინარჩუნოს თავისი ფუნქცია MDR უჯრედებში.
ჩვენი შედეგები მიუთითებს მგრძნობელობას უჯრედული ხაზების ჟანგბადის ადიკალების მიმართ Pgp შუამავლობით MDR. შეიძლება ვივარაუდოთ, რომ მიუხედავად იმისა, რომ პირველადი წინააღმდეგობა და წამლისადმი წინააღმდეგობის შერჩევა მრავალი მექანიზმით არის განპირობებული, მაინც შესაძლებელია უჯრედული დაჟანგვის გაზრდით მრავალ ფაქტორული წინააღმდეგობის გადალახვა. თავისუფალი ჟანგბადი დაუყოვნებლივ შედის მრავალ მჟავიანობის რეაქციაში, რაც იწვევს სტრუქტურის დაზიანებას, რაც მნიშვნელოვანია უჯრედის სასიცოცხლო საქმიანობისთვის - დნმ და მემბრანები. ზემოაღნიშნულ ექსპერიმენტებში, ნეკროზი გახდა წამყვანი თეთრი მეთოდი ჟანგბადის რადიკალების ზემოქმედებისას. სირცხვილი არ არის, რომ ნეკროზი სიკვდილის ერთადერთი გზაა, რომელიც გამოწვეულია თავისუფალი ჟანგბადით. კონკრეტულ სიტუაციაში, აუცილებელია დადგინდეს) ან სხვა სახის სიკვდილის უპირატესობა; აპოპტოზსა და ნეკროზს შორის სტანდარტული განსხვავება არ ახასიათებს სიკვდილის მექანიზმების მრავალფეროვნებას. ამ ჟესტს აქვს აზრი იმის დასადგენად, გარსის გარსის დაზიანება პირველადია თუ დაგვიანებული. თუმცა, როგორც ჩანს, მნიშვნელოვანია შეაფასოს პლაზმური მემბრანის გამტარიანობა ნებისმიერ ეტაპზე: მემბრანის მთლიანობის დარღვევა იწვევს შეუქცევადობას [ლეიკორეა. იწვევს ნეკროზს.
ეს უკანასკნელი გარემოება გასაკვირი არ არის. პლაზმური მემბრანის ამ ცილის ფუნქციონირებისათვის აუცილებელია მისი გარკვეული ფიზიოქიმიური მდგომარეობა, მისი მთლიანობის გამო. ნეკროზით, უჯრედის უხეში დაზიანება მოხდება, ძირითადად წყლისა და იონების ტრანსპორტირების შეფერხების გამო. ეს დაზიანება გავლენას მოახდენს თითქმის ნებისმიერ უჯრედულ სტრუქტურაზე, განსხვავებით აპოპტოზური კასკადებისაგან, რომლებიც გამოიხატება სუბსტრატების თანმიმდევრულ გაყოფაში, ენერგიაზე დამოკიდებულ პროცესში, რომელიც გულისხმობს უჯრედში ცილა-ლიპიდური კომპლექსების მრავალკომპონენტიან ფორმირებას და ურთიერთქმედების მკაცრ სპეციფიკას. კასპაზები სუბსტრატებით. ასეთი კასკადის ერთი ან რამდენიმე ბმულის დაბლოკვა (მაგალითად, MNU ms უჯრედებში ლიპიდური ტრანსპორტის დარღვევის შედეგად არ იქმნება "სწორად" ლოკალიზებული სასიგნალო კომპლექსები) შეწყვეტს სიგნალების გადაცემას ძირითად მექანიზმებზე, რაც გამოიწვევს ამ მიზეზით, MDR– ის წინააღმდეგ ბრძოლის მიზნით, სასურველია, რომ სიკვდილის მექანიზმები იყოს მრავალჯერადი და მოიცავდეს არა მხოლოდ კასპაზების, არამედ: პროტეაზების სხვა ოჯახების გააქტიურებას. (ლიზოსომური, პროტეაზომული, ბირთვული), ასევე სიგნალის გაძლიერება (მიტოქონდრიული გზა) და პლაზმური მემბრანის გამტარიანობის დარღვევა. ... რაც უფრო მეტი სიკვდილის მექანიზმი შეიძლება გააქტიურდეს რეზისტენტულ უჯრედებში, მით უფრო საიმედოა საბოლოო შედეგი - MDR– ის დაძლევა.
1. MYR გენი და P-glycoprotein– ის შუამავლობით MDR– ის ფენოტიპი შეიძლება გამოწვეული იყოს მრავალი უჯრედის ერთჯერადი მოკლევადიანი ზემოქმედებით< веществ, в том числе противоопухолевых препаратов. МЛУ закрепляется в
უჯრედებში, რომლებიც გადაურჩნენ ექსპოზიციას. ეპიგენეტიკური გააქტიურება MOT– ზე ქმნის სტაბილურ MDR ფენოტიპს.
2) MDR– ის გადაუდებელი ფორმირება უზრუნველყოფილია EN1 გენის გამოხატვის გააქტიურებით: მისი ტრანსკრიფციის ინდუქციით და mRNA– ის სტაბილიზაციით.
3) სტრესზე უჯრედების რეაგირების ზოგადი მექანიზმები ჩართულია MDR– ის გააქტიურებაში: სფატიდილინოზიტოლის გზა, ცილა კინაზა C, უჯრედშიდა 2+ –ის მობილიზაცია, NaKB– ის გააქტიურება, მიტოგენით გააქტიურებული ცილოვანი კინაზები და ქრომატინის ფიზიკური მდგომარეობის რეგულირება. ამ მექანიზმების დათრგუნვა ხელს უშლის MDR- ის წარმოქმნას უჯრედებში, რომლებიც გადარჩნენ კიბოს საწინააღმდეგო პრეპარატებით მკურნალობის შემდეგ.
4) Pgp ბარიერის გადალახვა და MDR უჯრედებში სიკვდილის მექანიზმების ინდუქცია აუცილებელი და საკმარისი პირობებია ამგვარი უჯრედების მოპოვებისთვის.
5) მხოლოდ Pgp და მთლიანად MDR ფენოტიპი არ უზრუნველყოფს Pgp– ს გადარჩენას, როდესაც ზემოქმედებას იწვევს სომატური მემბრანის მთლიანობის პირველადი დარღვევა. ამრიგად, პლაზმური მემბრანა არის აპეტური სამიზნე, ხოლო ნეკროზის ინდუქცია არის ერთ -ერთი სტრატეგია არტერიული წინააღმდეგობის დასაძლევად.
6) MDR– ით უჯრედების გარდაცვალება, რომელიც გამოწვეულია ზმატური მემბრანის მთლიანობის დარღვევით (პერფუზიით განპირობებული ლიზი) გამოწვეულია ოტოქსიკური T- ლიმფოციდებით, რომლებიც წარმოიქმნება იმუნიზაციის საპასუხოდ, ქოლ უჯრედებთან მოდიფიცირებული ციტოკინების გამოსახატავად.
7) უჯრედშიდა მეტაბოლიტები, რომლებსაც შეუძლიათ ზიმის მემბრანის დაზიანება და MDR– ით უჯრედების სიკვდილი გამოიწვიოს, არის თავისუფალი ჟანგბადი. მათი წარმოქმნა სიმსივნის საწინააღმდეგო პრეპარატების მოქმედების ქვეშ არის ეფექტური მექანიზმი MDR- ის დასაძლევად.
ძირითადი პუბლიკაციები დისერტაციის თემაზე:
1. Shtil A., Shushanov A., Stavrovskaya A., Moynova E. სირიის ზაზუნას სიმსივნურ უჯრედებში მეტასტაზების სიხშირე შერჩეულია "ტიპური" მულტირეზისტენტული წინააღმდეგობის დაბალი დონისათვის. ექსპერიმენტული და ტოქსიკოლოგიური პათოლოგია 1994, 46, 257-262.
2. ეროხინა მ., შტილ ა., შუშანოვი ს., სიდოროვა თ., სტავროვსკაია ა. აქტინის ციტოკონცენტის ნაწილობრივი აღდგენა ტრანსფორმირებულ სირიულ ზაზუნას ფიბრობლასტებში, შერჩეული დაბალი დონის "ტიპიური" მრავალწახნაგოვანი წინააღმდეგობის J / FEBS წერილები, 1994,341 , 295-298 წწ.
3. სტრომსკაია თ., ფილიპოვა ნ., რიბალკინა ე., ეგუდინა ს., შტილ ა., ელისენენკოვა ა., სტავროვსკაია "ა. მელანინის სინთეზის ცვლილებები ადამიანის მელანომის უჯრედებში შერჩეული in vitro მრავალჯერადი დაზიანებისათვის J / ექსპერიმენტული და ტოქსიკოლოგიური პათოლოგია , 199 47, 157-166 წწ.
4. Yu R., Shtil A., Tan T.-H., Roninson I., Kong T. Adriamycin ააქტიურებს c-Jun N- ტერმინალურ კინაზას ადამიანის ლეიკემიის უჯრედებში: აპოპტოზის შესაბამისობა JlCancer Letter: 1996,107, 73 -81.
5. Komarov P., Shtil A., Buckingham L., Balasubramanian M., Piraner O., Emanuel M, Roninson I., Coon J. ციტარაბინით გამოწვეული MDR1 ინჰიბირება (P- გლიკოპროტეინის გენის გააქტიურება ადამიანის სიმსივნურ უჯრედებში ცხიმოვანი acid-PEG- ცხიმოვანი მჟავების დიესტერები, P- გლიკოპროტეინის ფუნქციის ახალი ინჰიბიტორები. II International Journal of Cancer, 1996.68 245-250.
6. Walter R., Shtil A., Roninson I., Holian O. 60 Hz ელექტრული ველები აფერხებენ პროტეინ კინაზას С აქტივობას და მრავალ მედიკამენტური წინააღმდეგობის გენს (MDR1) რეგულირების JIRadiatio Research, 1997, 147, 369-375.
7. ვალტერ რ., შტილ ა., რონინსონ ი., რეიეს ჰ., ჰოლიან 0. 60 Hz ელექტრული f- ის გავლენა ცილოვანი კინაზას С აქტივობაზე და მრავალ წამლისადმი წინააღმდეგობის გენზე (MDR1) გამოხატულებაზე .// მიმდინარე ქირურგია, 1997, 54,366- 370.
სტრომსკაია თ., რიბალკინა ე., ფილიპოვა ნ., შტილ ა., სტავროვსკაია ა. MDR1 გენის გამოხატვის რეგულირება და P- გლიკოპროტეინის ფუნქცია კულტივირებული მელანომისა და ჰეპატომის უჯრედებში. // British Journal of Cancer, 1998, 77, 1716-1725 ...
Komarov P., Shtil A., Holian 0., Tee L., Buckingham L., Mechetner E., Roninson I., Coon J. LRP (ფილტვების წინააღმდეგობასთან დაკავშირებული პროტეინი) გენის გააქტიურება ადამიანის მოკლევადიანი ზემოქმედებით ლეიკემიის უჯრედები phorbol ester და cytarabine.f / Oncology Research, 1998,10, 185-192.
I. Shtil A, Mandlekar S, Yu R., Walter R., Hagen K., Roninson I., Tan T.-H., Kong T. დიფერენციალური რეგულირება მიტოგენით გააქტიურებული ცილის კინაზების მიერ მიკროტუბულებით შემაკავშირებელ აგენტებით ადამიანის მკერდში კიბოს უჯრედები J / Oncogene 1999,18,377-384.
Damiano J., Cress A., Hazlehurst L., Shtil A. და Dalton W. უჯრედების ადჰეზია მედიატორული წინააღმდეგობა (CAM-DR): ინტეგრინების როლი და აპოპტოზისადმი წინააღმდეგობა ადამიანის მიელომის უჯრედულ ხაზებში MBlood, 1999,93, 1658 - 1667 წ.
შტილ ა., ტურნერი ჯ., დურფი ჯ., დალტონ ვ. და იუ ჰ. ციტოკინზე დაფუძნებული სიმსივნური უჯრედების ვაქცინა თანაბრად ეფექტურია მშობლის და იზოგენური მულტირეზისტენტული მიელომის უჯრედების წინააღმდეგ: ციტოტოქსიკური T- ლიმფოციტების როლი. I / სისხლი, 1999.93, 1831-1837.
შტილ ა., ქტიტოროვა ო., კაკპაკოვა ე. და ჰოლიან ო. დიფერენციალური ეფექტები MDR1 (მრავალრეზისტენტული რეზისტენტობა) გენის გააქტიურების აგენტები ცილა კინაზაზე: ლეიკემიის უჯრედებში შეძენილი MDR მექანიზმების გადაჭარბების მტკიცებულება. // ლეიკემია და ლიმფომა, 2000, 40, 191-195.
Shtil A., Grinchuk T., Tee L., Mechetner E., Ignatova T. MDR1 გენის ზედმეტი გამოხატულება დაკავშირებულია მიტოქონდრიული ტრანსმემბრანული პოტენციალის დაქვეითებასთან K562 ადამიანის ლეიკემიის უჯრედებში, რომლებიც შერჩეულია P- გლიკოპროტეინებით შუამავლობით მრავალმხრივ წინააღმდეგობაში./საერთაშორისო ონკოლოგიის ჟურნალი, 2000,17,387-392. Shtil A., Turner J., Dalton W., Yu H. უჯრედის სიკვდილის ალტერნატიული გზები: მიელომის უჯრედებში პლეოტროპული წინააღმდეგობის გაწევა: ციტოტოქსიკური T- ლიმფოციტების როლი // ლეიკემია და ლიმფომა, 2000,38, 59-70.
16. შტილი ა.ა. სიგნალის ტრანსდუქციის გზები და ტრანსკრიპციული მექანიზმები, როგორც ტარგეი, ადამიანის კიბოს უჯრედებში მრავალ მედიკამენტური წინააღმდეგობის გაჩენის თავიდან ასაცილებლად. H. Curre, Drug Targets, 2001,2, 57-77.
17. Shtil AA სიმსივნური უჯრედების მრავალ მედიკამენტური წინააღმდეგობის ეპიგენეტიკური გააქტიურება: სიგნალის გადაცემა, ტრანსკრიპციული გააქტიურება და პრევენციის შესაძლებლობები. // "წინსვლა თანამედროვე ბიოლოგიაში", 2001,121, 563-575.
18. სიდოროვა თ.ა., ნიგმატოვი ა., კაკპაკოვა ე.ს., სტავროვსკაია ა.ა., გერასიმოვა გ.კ., შტილ ა.ა., და სერებტიაკოვი ე.პ. OiSDB-ეთილენდიამინის იზოპრენოიდული ანალოგების ეფექტები მრავალმხრივ რეზისტენტულ სიმსივნურ უჯრედებზე მარტო და ქიმიოთერაპიულ დმგს-თან ერთად. L / Journal of Medicinal Chemistry, 2002,21,5330-5339.
19. Shtil A. A. ქიმიოთერაპიის დროს ლეიკემიის უჯრედებში მრავალმხრივი წინააღმდეგობის გაჩენა: მექანიზმები და პროფილაქტიკა. 1 ¡Journal of Hematotherapy and Stei Cell Research, 2002,11, 231-241.
20. Shtil A. A. წამლის მრავალფუნქციური წინააღმდეგობა: P- გლიკოპროტეინი Vyraxmi– ის მწვერვალზე .ll Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research, 2002,11,437-43
21. Shtil A. A. P- გლიკოპროტეინი, როგორც თერაპიული სამიზნე: კარგი ამბავი. L / ლეიკემია, 2002, 2169-2170.
22. შტილი ა.ა. მრავალმხრივი წინააღმდეგობის განვითარება, როგორც უჯრედის გადაუდებელი პასუხი ეგზოგენურ ზემოქმედებაზე. // "ბიოლოგიური გარსები (2003,20,236-243.
23. Lehne G., Shtil A. A. Targeting P-glycoprotein for cellular death მექანიზმების კიბოს., H "Targeted Cancer Therapies, An Odyssey", 2003,203-i
აღჭურვილობის დუბლირების სერვისი ჰ.ჰ. ბლოხინის რუსეთის სამედიცინო მეცნიერებათა აკადემია ხელმოწერილია გამოქვეყნებისათვის 14. II .03 წ. ბრძანება No24 "/. ტირაჟი 100 ეგზემპლარი.
ეს სადისერტაციო ნაშრომი უახლოეს მომავალში უნდა წავიდეს ბიბლიოთეკებში.
480 რუბლი | 150 UAH | $ 7.5 ", MOUSEOFF, FGCOLOR," #FFFFCC ", BGCOLOR," # 393939 ");" onMouseOut = "დაბრუნება nd ();"> დისერტაცია,-480 რუბლი, მიწოდება 1-3 საათი, 10-19 საათიდან (მოსკოვის დროით), კვირის გარდა
მშვიდად, ალექსანდრე ალბერტოვიჩ. სიმსივნური უჯრედების P- გლიკოპროტეინებით შუამავლობით წამლის წინააღმდეგობა: გადაუდებელი ფორმირების მექანიზმები და დაძლევის მიდგომები: ნაშრომის რეზიუმე. ... სამედიცინო მეცნიერებათა დოქტორები: 14.00.14. - მოსკოვი, 2003. - 46 გვ.: ავად.
მუშაობის გაცნობა
თემის აქტუალობა
I. სიმსივნური უჯრედების მრავალჯერადი წამლის წინააღმდეგობა:
ბიოლოგიური მექანიზმები და მნიშვნელობა ონკოლოგიაში.
ფარმაკოლოგიაში მნიშვნელოვანი წინსვლის მიუხედავად, მათ შორის მოსალოდნელი თვისებების მქონე წამლების შექმნის ტექნოლოგიის შემუშავებით, სიმსივნეების ქიმიოთერაპიის წარმატება შემოიფარგლება ცოცხალი სისტემების უმნიშვნელოვანესი მახასიათებლით - გარე გარემოში ცვლილებების დათარიღების უნარით. ამ ორმაგობის ერთ -ერთი გამოვლინებაა სიმსივნური უჯრედების წინააღმდეგობის განვითარება წამლების მიმართ [გამოიყენება ქიმიოთერაპიაში. გარეგანი გავლენისადმი უჯრედების ადაპტაციის ფართოდ გავრცელებული და გრძელვადიანი, სტაბილური ხასიათი მიგვითითებს იმაზე, რომ წამლისადმი წინააღმდეგობის დაძლევა შეიძლება ასოცირდებოდეს არა მხოლოდ უფრო ეფექტური წამლების ძებნასთან: ალბათ არ არსებობს წამალი, რომლის მიმართაც უჯრედები ვერ შეძლებენ წინააღმდეგობის გამომუშავებას რა მხოლოდ სხვადასხვა სახის სტრესისადმი წინააღმდეგობის მექანიკური მექანიზმების განმარტება იქნება „ახალი წამლებისადმი წინააღმდეგობის დაძლევის სტრატეგიების შემუშავებისათვის, აუცილებელი პირობა კიბოს პაციენტთა მკურნალობის ეფექტურობის გასაზრდელად.
ნეოპლაზმების მრავალჯერადი წამლის წინააღმდეგობა (MDR) - სიმსივნური უჯრედების მიერ სიცოცხლისუნარიანობის შენარჩუნება სხვადასხვა სამკურნალო ნივთიერებების ზემოქმედების საპასუხოდ - პროგრესის ერთ -ერთი მთავარი მიზეზია! დაავადებები: სიმსივნე ქიმიოთერაპიის მიმართ მგრძნობიარეა, მიუხედავად გამოყენებული მედიკამენტების კომბინაციისა. MDR ფენომენს აქვს გრძელვადიანი და სტაბილური ხასიათი: წინააღმდეგობის მექანიზმები მემკვიდრეობით მიიღება უჯრედების თაობებში. ამრიგად, MDR არის სიმსივნის პროგრესირების ერთ -ერთი მთავარი ფაქტორი.
არსებობს უჯრედების წინააღმდეგობის ორი ძირითადი ტიპი ტოქსინების მიმართ. ძირითადი G.E. შეინიშნება ქიმიოპრეპარატების ზემოქმედებამდე) წინააღმდეგობა განპირობებულია სიმსივნის პროგრესირების დროს დამცავი მექანიზმების გამოხატულებით. ასე რომ, გააქტიურება
ანტიაპოპტოზური მექანიზმები, რომლებიც ხელს უწყობენ იმუნიტეტის ეფექტორისადმი წინააღმდეგობას, შეიძლება დაკავშირებული იყოს წამლისადმი წინააღმდეგობასთან. მეორადი (შეძენილი) წინააღმდეგობა ხდება სტრესულ უჯრედებში. ამ ეფექტებამდე ამ უჯრედებში თავდაცვის მექანიზმები ცუდად არის გამოხატული ან არ არსებობს; გადარჩნენ ერთი ტოქსინით მკურნალობის შემდეგ, უჯრედები იძენენ წინააღმდეგობას მრავალი ნივთიერების მიმართ - MDR (რიორდანი, ლინგი, 1985). შემდგომი შერჩევა აძლიერებს შეძენილ ფენოტიპს უჯრედების თაობებში.
MDR– ის ყველაზე მნიშვნელოვანი მექანიზმი არის უჯრედში ტოქსინის დაგროვება, რაც გამოწვეულია ნივთიერებების უჯრედულ გარემოში გამოყოფით. ასეთ ტრანსპორტს ახორციელებს პლაზმური მემბრანის P- გლიკოპროტეინის (Pgp) ინტეგრალური ცილა ATP ჰიდროლიზის ენერგიის გამო (ჯულიანო, ლინგი, 1984). "! ადამიანის Pgp კოდირებულია გენის მიერ MDRI(მრავალწახნაგოვანი წინააღმდეგობა 1), ლოკალიზებულია მე -7 ქრომოსომაზე (Chen et al., 1986). მრავალი მონაცემი მიუთითებს t (რომ mRNA– ს ზრდა MDRIდა Pgp ხშირად არის ფაქტორი მრავალი სახის სიმსივნის მკურნალობისადმი წინააღმდეგობის გაწევისა (Linn et al., 1995; Stavrovskaya et al., 1998).
II სიმსივნის უჯრედებში MDR წარმოქმნა: ბიოლოგიური მექანიზმები, როგორც სამიზნეამისთვის პრევენცია
ლოგიკურია ვივარაუდოთ, რომ mRNA- ის რაოდენობის ზრდა MDRIამ გენის გაძლიერების გამო. ეს MDR მექანიზმი გამოვლენილია უჯრედულ უჯრედებში, რომლებმაც გადაარჩინეს გადარჩენის საშუალება ტოქსინების არსებობისას (რონინსონი, 1991). თუმცა, სიმსივნეების გაანალიზებისას, ადამიანის გენის გაძლიერება MDR1არ არის ნაპოვნი პირველადი სიმსივნეების დროს ან ნეოპლაზმებში მკურნალობის შემდეგ. კლინიკური MDR– ის სავარაუდო მიზეზი არის გადაჭარბებული გამოხატულება MDRIდა Pgp უცვლელი გენის სტრუქტურით (ინუკლეოტიდური მიმდევრობის ასლის ნომრის შენარჩუნება), ე.ი. ფენოტიპის ეპიგენეტიკური გააქტიურება. ადამიანის სიმსივნური უჯრედების კულტურებში, mRNA დონის ზრდა MDRIდა Pgp- ის რაოდენობა აღინიშნა ქიმიოთერაპიის წამლით ერთჯერადი მკურნალობის შემდეგ
განსხვავებული ქიმიური სტრუქტურით და მოქმედების მექანიზმებით (Chaudhary, aninson, 1993). მიღებული mRNA დაგროვების მტკიცებულება MDR \ფილტვის ქსოვილში რკომის მეტასტაზებში ინტრაოპერაციის დაწყებიდან 20-50 წუთის განმავლობაში: ფილტვის შერწყმა დოქსორუბიცინთან (Abolhoda et al., 1999). ეს შედეგები (ადასტურებს MDR– ის ეპიგენეტიკური გააქტიურების შესაძლებლობას ექსპერიმენტში და [ტექნიკური სიტუაციები: გაზრდილი mRNA MDR \და Pgp სიმსივნეებში შეიძლება ჩამოვიდეს გენის გაძლიერების გარეშე MDRI.
ამ ტიპის ბიოლოგიური რეგულირება - ფენოტიპის გადაუდებელი გააქტიურება - გულისხმობს გენის (ების) ტრანსკრიფციის ინდუქციას, რომელიც ასახავს შესაბამის ფენოტიპს და / ან პოსტ -ტრანსკრიპციულ კონტროლს (NK– ის სტაბილიზაცია, ცილის სინთეზისა და ფუნქციონირების რეგულირება). MDR, ამ ტიპის რეგულირება ნიშნავს გენის ინდუქციის შესაძლებლობას MDR \უჯრედული სტიმულები და სტრესის საპასუხოდ r / chol უჯრედებში წინააღმდეგობის შედარებით სწრაფი განვითარება. გენის ინდუქციურობა MDRIითვალისწინებს სიგნალის გადაცემის ტივაცგაოს გზებს უჯრედის პერიფერიიდან ბირთვამდე. ასეთი გზები) შეიძლება იყოს სტრესის რეალიზების სასიგნალო მექანიზმები: ცილის კინაზა C ІКС), ფოსფოლიპაზები და უჯრედშიდა Ca 2+, მიტოგენით გააქტიურებული უუტეინ კინაზები, ბირთვული ფაქტორი კაპა B (NFkB). სიგნალი გენის გულატორული რეგიონისთვის MDRIდა ტრანსკრიპტი უზრუნველყოფს გენის შეკუმშვის გააქტიურებას.
MDR რეგულირების შესწავლას ასევე აქვს ფუნდამენტური პრაქტიკული ასპექტი. ამ მექანიზმების დათრგუნვა ფარმაკოლოგიური და / ან არატოქსიკური ეფექტებით ხელს შეუშლის MDR პროცესის განვითარებას [მიოტერაგაში.
III. ჩამოყალიბებული MDR სიმსივნური უჯრედების დაძლევა.
თუ ბლოკავს გენების გააქტიურებას MDR \სიგნალებს შეუძლიათ ხელი შეუშალონ MDR- ის წარმოქმნას პირველადი სენსორულ უჯრედებში, შემდეგ კი
მიდგომა გამოუყენებელია უკვე ჩამოყალიბებული წინააღმდეგობის დასაძლევად. მეორადი MDR– ის წინააღმდეგ ბრძოლის ტრადიციული მეთოდია Pgp მოდულატორების გამოყენება ციტოსტატიკებთან ერთად (Lehne, 2000). თუმცა, Pgp ინჰიბიტორების გამოყენება შეზღუდულია გვერდითი ეფექტებით (გულის არითმიები, იმუნოლოგიური დისბალანსი). თანაბრად მნიშვნელოვანია, რომ ეფექტური მოდულატორი + თიროსტატიკური კომბინაციები შემცირდეს MDR– ის შერჩევისას უჯრედების სიკვდილის ზოგიერთი მექანიზმის დაბლოკვით.
ჩამოყალიბებული MDR- ის გადალახვა შესაძლებელია ორი პირობის დაკმაყოფილებისას: 1) პრეპარატის კონცენტრაცია საკმარისი უნდა იყოს უჯრედების სიკვდილის ეფექტორული მექანიზმების გასააქტიურებლად, 2) ამ მექანიზმების ფუნქციები დაცული უნდა იყოს MDR უჯრედებში. პირველი პირობა დაკმაყოფილებულია, თუ წამალი გადალახავს Pgp ბარიერს. თუმცა, საჭიროა დამტკიცდეს, რომ აგენტის კრიტიკული უჯრედშიდა კონცენტრაციის მიღწევა საკმარისია მრავალი გავლენისადმი მდგრადი უჯრედის სიკვდილის გასააქტიურებლად. რეზისტენტულ უჯრედებში მოქმედი გადარჩენის მექანიზმები უნდა ემსახურებოდეს ამ უკანასკნელის აღმოფხვრის სამიზნეს.
მეორე პირობის განსახორციელებლად, პერსპექტიული ჩანს მიდგომა, რომელიც მიმართულია რეზისტენტული უჯრედების ლიზისისკენ, როგორც მათი სიკვდილის ინდუქციის მექანიზმისკენ. თაგვების ვაქცინაცია სინგენური მიელომის უჯრედებით, რომელიც გადატანილია ზოგიერთი ციტოკინის cDNA– ით, იწვევს იმუნური ცხოველებში ციტოტოქსიკური T ლიმფოციტის (CTL) შუამავლობით იმუნური პასუხის განვითარებას და დამყნობილი სიმსივნის უარყოფას (დრანოფ და სხვ., 1993; ლევიცკი და სხვები). , 1996). CTL ლიზის უჯრედებს გრანზიმით B და პერფორნით. ვინაიდან გრანიზი B ააქტიურებს კასპაზა 3 -ს, აპოპტოზის ერთ -ერთ დისტალურ ეფექტს და პერფორინი იწვევს პლაზმური მემბრანის პირველადი დაზიანებას (ნეკროზი), ვიმედოვნებთ, რომ AP ეფექტური იქნება, თუკი პროქსიმალური სიკვდილის მექანიზმები დაიბლოკება; აპოპტოზის დისტალური კავშირების გააქტიურება ნეკროზთან ერთად
იწვევს უჯრედების კვდომას სიმსივნის საწინააღმდეგო პრეპარატების მიმართ-დაპროგრამებული უჯრედების სიკვდილის გამომწვევი.
პრობლემის ფორმულირება
MDR არის კლინიკურად არახელსაყრელი ფენომენი, რომლის დაძლევა მოითხოვს ცოდნას მისი განვითარების მექანიზმებისა და უჯრედების სიკვდილის რეალიზაციის გზების შესახებ; საჭიროა პრობლემის ორივე ასპექტის გამოძიება. პირველ რიგში, აუცილებელია MDR– ში MDR ფორმირების მექანიზმების შესწავლა? l / Pgp უარყოფითი ადამიანის უჯრედები, ამ მექანიზმების გამოკვლევა ხელს შეუშლის პირველადი მგრძნობიარე უჯრედებში წინააღმდეგობის განვითარებას. მეორე, MDR უჯრედებში მოქმედი სიკვდილის პროცესების ანალიზი შექმნის საფუძველს წინააღმდეგობის დასაძლევად იმ სიტუაციებში, როდესაც მეორადი MDR ჩამოყალიბდა.
კვლევის მიზანია ადამიანის სიმსივნურ უჯრედებში გადაუდებელი ფორმირების [LN] მექანიზმების ჩამოყალიბება და ამ їda წინააღმდეგობის დასაძლევად მიდგომების შემუშავება.
ადამიანის სიმსივნური უჯრედების კულტურებში MDR ფორმირების მოდელების ოპტიმიზაცია ქიმიოთერაპიული პრეპარატების ზემოქმედების საპასუხოდ და სასიგნალო მექანიზმების ექსპერიმენტული აგონისტები და ანტაგონისტები.
განსაზღვრეთ მთავარი! MDR– ის გადაუდებელი განვითარების მექანიზმი უჯრედების კიბოს საწინააღმდეგო საშუალებებით მკურნალობისას: გენის გაძლიერება MDRI, Pgp- დადებითი უჯრედების შერჩევა ან de novo MDR გაზჩუკინგი.
გამოიკვლიეთ უჯრედული სიგნალების გადაცემის გზები, რომლებიც არეგულირებენ MDR– ის გააქტიურებას - ცილა კინაზა C, ფოსფოლიპაზა C, ვიტრიოცელულური Ca +, მიტოგენით გააქტიურებული ცილის კინაზები, NFkB).
გენების გამოხატვის ტრანსკრიპციული გააქტიურების და პოსტტრანსკრიპციული რეგულირების (mRNA სტაბილურობის) როლის გამოვლენა MDRIსასწრაფო MDR მკურნალობაში ქიმიოთერაპიის ეფექტების საპასუხოდ.
სიმსივნურ უჯრედებში MDR განვითარების თავიდან აცილების გზების შემუშავება ქიმიოთერაპიული პრეპარატების ბლოკატორებთან კომბინირებისას MDR \ -სასიგნალო გზების გააქტიურება და გენის ტრანსკრიფციის ინჰიბიტორები
გამოიკვლიეთ მბზინავი და ეფექტიანი კუპების გააქტიურების კინეტიკა, მიტოქონდრიის ტრანსმემბრანული პოტენციალის ცვლილებები, პოლი (ADP) რიბოზას პოლიმერაზის პროტეოლიზური გახლეჩა, ინტერუკლეოზომური დნმ -ის ფრაგმენტაცია და პლაზმური მემბრანის მთლიანობა მშობლის უჯრედებში და MDR– ის მქონე ვარიანტებით მკურნალობისას პრეპარატი, რომელიც არ არის ტრანსპორტირებული P- გლიკოპროტეინით.
გამოიყენეთ ვაქცინაცია ციტოკინების გამომხატველი სიმსივნური უჯრედებით, რათა შეიქმნას იმუნური პასუხი MDR უჯრედების წინააღმდეგ.
დებულებები თავდაცვისთვის.
Pgp- შუამავლობით MDR- ის ფორმირება - უჯრედის გადაუდებელი პასუხი მრავალ სტიმულზე - ხდება ეპიგენეტიკური გენის გააქტიურებით. MDRI.ეს გააქტიურება განპირობებულია უჯრედშიდა სიგნალიზაციის მრავალი მექანიზმით, გენის პრომოუტერის ინდუქციით და mRNA სტაბილიზაციით და მისი პრევენცია შესაძლებელია ამ სიგნალების ინჰიბიტორების მიერ.
Pgp- შუამავლობით MDR- ის დაძლევა შეიძლება ასოცირებული იყოს რეზისტენტული უჯრედების პლაზმურ გარსზე მიზნობრივ ეფექტთან. Pgp არ იცავს უჯრედებს პლაზმური მემბრანის მთლიანობის დაზიანებისგან - ნეკროზისგან.
მეცნიერული კვლევა პირველად დასაბუთებულია MDR განვითარების კონცეფცია, როგორც უჯრედის გადაუდებელი პასუხი ეგზოგენურ სტიმულზე;
პირველად დეტალურად იქნა შესწავლილი წამლისადმი წინააღმდეგობის სპეციფიკური ფენოტიპის ფორმირების მექანიზმი - Pgp- შუამავლობით MDR: ამ ცილის მაკოდირებელი გენის ეპიგენეტიკური გააქტიურება MDRI.
3. პირველად შემუშავდა გენის გადაუდებელი გააქტიურების მოდელი MDRI,
რომელსაც თან ახლავს ადამიანის სიმსივნური უჯრედების კულტურაში Pgp- შუამავლობით MDR სტაბილური ფენოტიპის შეძენა; \. გამოვლენილია სიგნალის გადაცემის გზები, ტრანსკრიფციის გააქტიურების მექანიზმი და გენის პოსტ-ტრანსკრიპციული რეგულირება MDRXუჯრედებში, რომლებიც ექვემდებარებიან კიბოს საწინააღმდეგო პრეპარატებს. 5. პირველად ფარმაკოლოგიური ნივთიერებების კლასები - უჯრედული სიგნალის გადაცემის ბლოკატორები - დახასიათდა სიმსივნურ უჯრედებში Pgp შუამავლობით MDR ფორმირების თავიდან ასაცილებლად. 5. პირველად, გამოკვლეულია Pgp შუამავლობით MDR უჯრედებში სიკვდილის მექანიზმები და შემუშავებულია წინააღმდეგობის დაძლევის მიდგომა, რომელიც შედგება პლაზმური მემბრანის მთლიანობის პირველადი დაზიანებისგან.
პრაქტიკული ღირებულება.
ქიმიოთერაპიული პრეპარატების ზემოქმედების ქვეშ სიმსივნური უჯრედების კულტურაში Pgp შუამავლობით MDR– ის გადაუდებელი ფორმირების თავიდან აცილების მეთოდების შემუშავება.
გენეტიკურად მოდიფიცირებული ვაქცინების პრეკლინიკური კვლევები MDR– ის დასაძლევად.
სამუშაოს მოწონება.
დისერტაცია განიხილებოდა 2003 წლის 30 ივნისს ერთობლივ კონფერენციაზე სიმსივნური უჯრედების გენეტიკის ლაბორატორია, ციტოგენეტიკა მოლეკულური გენეტიკის ჯგუფთან, ვირუსული და უჯრედული ონკოგენები, მოლეკულური ენდოკრინოლოგია, სიმსივნის საწინააღმდეგო იმუნიტეტი, ბიოქიმიური ფარმაკოლოგია, სამედიცინო მეცნიერება, ექსპერიმენტული დიაგნოსტიკა და ბიოთერაპია სიმსივნეების; შუნოლოგიის, ჰემატოლოგიის, ქიმიოთერაპიის, კლინიკური ფარმაკოლოგიის განყოფილებები, "რუსეთის კიბოს კვლევის ცენტრის მკურნალობის გახეხილი მეთოდები. N.N.Blokhin RAMS.
ნაშრომის ძირითადი მასალები წარმოდგენილი იყო შემდეგ კონფერენციებზე: მე -2 საერთაშორისო სიმპოზიუმი "Cytostatic Drug Resistance", (სამხრეთ გერმანია, 1991); გორდონის კონფერენცია "ქიმიოთერაპიის წინსვლა" (NYC ლონდონი, აშშ, 1994); მოლეკულური ტოქსიკოლოგია (კოპლერის მთა, აშშ, 1995); ინდუქციური გენომური პასუხები (სტივენსონი, აშშ, 1996); ნუკლეინის მჟავები - მოლეკულური დიაგნოსტიკისა და თერაპიის ინტეგრირება (სან დიეგო, აშშ, 1996); კიბოს კვლევის ამერიკული ასოციაციის ყოველწლიური კონფერენცია (1994-2001): მე -6 დამე -7 კონგრესი "წინსვლა ონკოლოგიაში", (ჰერსონისოსი, საბერძნეთი, 2001,2002); "უჯრედის ბირთვის სტრუქტურები და ფუნქციები" (პეტერბურგი, 2002), ასევე სემინარებზე Oncotech, Inc. (ირვინი, აშშ, 1996), სალკის ინსტიტუტი (ლაჰოია, აშშ, 1997), ლი მოფიტის კიბოს ცენტრი (ტამპა, აშშ, 1997), ჯექსონ ლაბორა (ბარ ჰარბორი, აშშ, 1997), სლოუნ-კეტერინგის კიბოს ცენტრი, ახალი იო] აშშ, 1999), კოპენჰაგენის უნივერსიტეტები (2002), ინსბრუკი (2002) და გრონინგეი (2003), მოსკოვის სახელმწიფო უნივერსიტეტი. MV ლომონოსოვი (2002), ონკოლოგიისა და რადიობიოლოგიის ექსპერიმენტული პათოლოგიის კვლევითი ინსტიტუტი V.I. R.E. კავეცკი (კიევი, 2002).
პუბლიკაციები.
ნაშრომის სტრუქტურა და მოცულობა.
უჯრედების დაპროგრამებული სიკვდილის კვლევები - აპოპტოზი (ბერძნულიდან. αποπτωσις
- ფოთოლცვენა) - ბოლო ათწლეულის განმავლობაში მოხდა რამდენიმე მნიშვნელოვანი სამეცნიერო აღმოჩენა: აღმოჩენილია ამ ფენომენის განსახორციელებელი ინტეგრალური სისტემა - გამოვლენილია მისი მარეგულირებელი გენები, ასევე ზედაპირული უჯრედის რეცეპტორები და მათი ლიგანდები, რომლებიც ახდენენ უჯრედის სიკვდილს.
მრავალრიცხოვან ექსპერიმენტებში მეცნიერებმა დაამტკიცეს, რომ დაპროგრამებული სიკვდილი ნებისმიერი უჯრედული სისტემის ნებისმიერი უჯრედის სავალდებულო და განუყოფელი თვისებაა. (ყოველდღიურად სხეულის უჯრედების დაახლოებით 5% განიცდის აპოპტოზს, ხოლო ახალი იკავებს მათ ადგილს. უჯრედს 15 წუთიდან 2 საათამდე სჭირდება უკვალოდ გაქრობა).
2002 წელს მოლეკულური ბიოლოგები სიდნი ბრენერი ( სიდნეი ბრენერი)რობერტ ჰორვიცი ( ჰ. რობერტ ჰორვიცი) და ჯონ სულსტონი ( ჯონ ედვარდ სულსტონი) "ორგანიზმის განვითარების გენეტიკური რეგულირებისა და დაპროგრამებული უჯრედების სიკვდილის" სფეროში აღმოჩენებისთვის მიენიჭა ნობელის პრემია ფიზიოლოგიასა და მედიცინაში.
ექსპერტებს მიაჩნიათ, რომ აპოპტოზის შემდგომმა კვლევამ შეიძლება გამოიწვიოს წამლების შემუშავება ისეთი საშიში დაავადებების წინააღმდეგ, როგორიცაა კიბო, ინსულტი, გულის შეტევა, ალცჰეიმერის დაავადება, პარკინსონის დაავადება და სხვა.
ალექსანდრე ალბერტოვიჩი შტილი- მედიცინის მეცნიერებათა დოქტორი, სიმსივნური უჯრედების სიკვდილის მექანიზმების ლაბორატორიის ხელმძღვანელი, კანცეროგენეზის კვლევითი ინსტიტუტი, რუსეთის კიბოს კვლევის ცენტრი. ნ.ნ. ბლოხინის რუსეთის სამედიცინო მეცნიერებათა აკადემია.
ფიჭური და მოლეკულური ონკოლოგიის დარგის სპეციალისტი.
მეცნიერული ინტერესები: დაპროგრამებული უჯრედების სიკვდილის მექანიზმები (ბაქტერიები და ევკარიოტები, კერძოდ, სიმსივნური უჯრედები).
კითხვები_ელენა ვეტროვა
Მარტი აპრილი
მოსკოვი, 2009 წ
ალექსანდრე ალბერტოვიჩი, აპოპტოზი არის ერთ -ერთი მთავარი ბიოლოგიური პროცესი, რომელიც ხდება ორგანიზმში მთელი ცხოვრების განმავლობაში. ის მნიშვნელოვან როლს ასრულებს ორგანიზმის ემბრიონულ განვითარებაში (მორფოგენეზი) და ორგანოებსა და ქსოვილებში დინამიური ბალანსის შენარჩუნებაში (ჰომეოსტაზი) და სიმსივნეების ბირთვული წარმოქმნის პროცესში.(კანცეროგენეზი).
სხვა რა შემთხვევებში ჩართავს სხეული უჯრედების თვითმკვლელობის პროგრამას? და როგორ იცის ამ პროგრამამ რა არის კარგი სხეულისთვის და რა არის ცუდი?
ლეღვი აპოპტოზი პროცესი იწყება მაშინ, როდესაც უჯრედის ფუნქციონირება ამოიწურება. გენები, რომლებიც უზრუნველყოფენ უჯრედების გაყოფას, დაბლოკილია და გენები, რომლებიც უზრუნველყოფენ ლიტის სინთეზს (ბერძნულიდან.ლითიკოსი - მოშორება , დაითხოვოს ) ფერმენტები სტიმულირდება. ეს ფერმენტები შედიან ბირთვში და ლიზა (ანადგურებენ) ქრომატინსქრომოსომები- დნმ, რნმ და ცილების კომპლექსი. ქრომოსომები იშლება, უჯრედში სინთეზი წყდება.
უჯრედში აპოპტოზის ზოგიერთი გარეგანი ნიშანი:
პიკნოზი (ბირთვის შემცირება);
ქრომატოლიზი (ბირთვის შეღებვის შემცირება);
კარიორექსი (ბირთვის ნაწილებად დაშლა);
ციტოპლაზმის განადგურება და ა.
ნაშთები ფაგოციტოზირებულია (შეიწოვება) მაკროფაგების მიერ.
დაპროგრამებული სიკვდილი ჩართულია ფიზიოლოგიური პროცესების დროს - უმარტივეს ორგანიზმებში, მაგალითად, ბაქტერიაში, რათა შეინარჩუნოს უჯრედების პოპულაციის რაოდენობა, რომელიც ოპტიმალურია მოცემული გარემო პირობებისთვის (საკვები ნივთიერებები, ტემპერატურა). ეს ეფექტი შეინიშნება ბიოფილმებში - თვითრეგულირებად ბაქტერიულ საზოგადოებებში.
უმაღლესი ორგანიზმების ქსოვილებისა და ორგანოების ემბრიონულ განვითარებაში და ზრდასრულ ორგანიზმში, დაპროგრამებული სიკვდილი ემსახურება უჯრედების პოპულაციის შეცვლას - დაბერებას და ფუნქციების დაკარგვას - ახალგაზრდებში.
პროგრამამ არ იცის რა არის კარგი სხეულისთვის და რა არის ცუდი, ეს მხოლოდ ცხოვრების წესია - სიკვდილი არის ცხოვრების მხარე ...
ანუ, ევოლუციის გვერდითი მოვლენაარას ნიშნავს ავგუსტ ვაისმანი,გერმანელი ზოოლოგი და ევოლუციონისტი, წერდა მე -19 საუკუნის ბოლოს ...
... მაშასადამე, ქიმიოთერაპიის დროს არა სიმსივნური უჯრედების სიკვდილი ცუდია: ნორმალური უჯრედების აპოპტოზი არასასურველია აქ, მაგრამ პროგრამა არ ანაწილებს „ცუდ-კარგს“ შორის, მაგრამ საშუალებას აძლევს მათ, ვისაც შეუძლია გადარჩეს, გაანადგუროს უფრო დაუცველი, მეტი მგრძნობიარეები ... აქ არ მუშაობს და ეს სასოწარკვეთილება და „პრინციპის ნაკლებობა“ უნდა გადაიხადოს.
მეცნიერებმა აპოპტოზის არსებობის შესახებ შეიტყვეს არც ისე დიდი ხნის წინ, დაახლოებით ნახევარი საუკუნის წინ. როგორ იმოქმედა ამ აღმოჩენამ მეცნიერების განვითარებაზე?
ლეღვი უჯრედში აპოპტოზის გენეტიკური პროგრამის გააქტიურება გარე ფაქტორების (სიგნალების) გავლენის ქვეშ
(ნახ. იზრდება, როდესაც კურსორს დააჭერთ მასზე)
ამ აღმოჩენამ შესაძლებელი გახადა მოკლე დროში - დაახლოებით 15 წლის განმავლობაში - ჩამოაყალიბოს იდეები ყველაზე მნიშვნელოვანი ბიოლოგიური პროცესების შესახებ - უჯრედშიდა სიგნალების გადაცემა, პროტეოლიზის რეგულირება - ორგანიზმში ცილებისა და პეპტიდების გაყოფის პროცესი, ფორმის რეგულირება. ბირთვის, ორგანულებისა და გარსების.
ქრომატინის ცილების როლის შესწავლა გენების გამოხატვაში გააქტიურდა.
სიმსივნეზე და ნორმალურ უჯრედებზე ციტოსტატიკური აგენტების, ძირითადად კიბოს საწინააღმდეგო პრეპარატებისა და მაიონებელი გამოსხივების მოქმედების მექანიზმის კონცეფცია.
უჯრედების სიკვდილის მექანიზმების აღმოჩენამ დღეს მრავალი მეცნიერული მიმართულება გაამახვილა - ბიოლოგიიდან და ქიმიიდან დაწყებული ადამიანების, ცხოველებისა და მცენარეების დაავადებების მკურნალობამდე.
დიახ, ეს ტერიტორია ითვლება ერთ -ერთ ყველაზე პერსპექტიულად მოლეკულურ ბიოლოგიაში. ის ოპტიმისტურად არის დაკავშირებული ფუნდამენტურად ახალი წამლების შემუშავებასთან ჯერ კიდევ განუკურნებელი დეგენერაციული დაავადებების, კიბოს და სიბერის დამარცხების შესაძლებლობის სამკურნალოდ.
ზოგიერთი ანგარიშის თანახმად, დღესდღეობით მსოფლიოში ოთხასზე მეტი ლაბორატორია რატომღაც არის ჩართული ამ საკითხში.
მოლეკულური ბიოლოგიისათვის აპოპტოზის შესწავლის პერსპექტივა განპირობებულია იმით, რომ ეს ფენომენი (და, უფრო ფართოდ, უჯრედის სიკვდილი) მოიცავს მრავალი სამეცნიერო იდეისა და მიმართულების მთლიანობას. უჯრედი - უმარტივესი და ყველაზე რთული - ყოველთვის არის რთული სისტემა და სიკვდილი ცოცხალი არსების განუყოფელი თვისებაა. ამრიგად, სიკვდილის შესწავლა ზოგადად პერსპექტიულია სიცოცხლის არსის გასაგებად.
და, მართლაც, პრაქტიკული თვალსაზრისით, სიკვდილის მექანიზმების შესწავლა შესაძლებელს გახდის მრავალი წამლის მოქმედების კონკრეტიზებას.
შედარებით ცოტა ხნის წინ, ფენომენი დამკვირვებლის ეფექტი (« დამკვირვებლის ეფექტი"): როდესაც რაიმე მიზეზით კვდება უჯრედები აგზავნიან გარკვეულ სიგნალს მეზობელ ჯანსაღ უჯრედებზე და ეს უჯრედები თვითგანადგურდება. რა ამოძრავებს მათ? არსებობს რაიმე ჰიპოთეზა ამ ქულაზე?
ეს არის კომპლექსურ სისტემაში ბიოლოგიური რეგულირების მაგალითი: ამ გზით უჯრედები კლავს ერთმანეთს მეზობლებს სიგნალების გაგზავნით. სიგნალი (ჩვეულებრივ წყალში ხსნადი ცილა) არ არის საზიანო საკუთარი თავისთვის, მაგრამ იმავე პოპულაციაში განლაგებული სხვა წარმოშობის უჯრედებისათვის ის დამანგრეველია - მგრძნობელობის ეს განსხვავება არის თამაშის საფუძველი.
რა არის ჟანგბადის და წყალბადის ზეჟანგის როლი აპოპტოზის პროცესში?
ძალიან მნიშვნელოვანია - ჟანგბადის რადიკალები ქიმიურად ძალიან აქტიურია. ისინი იწვევენ რეაქციებს, რომლებიც აზიანებენ ცილებს, ნუკლეინის მჟავებს და ლიპიდებს.
ბრინჯი იზრდება, როდესაც კურსორზე დააწკაპუნებთ მასზე.
ამ თვისებაზეა დაფუძნებული მაიონებელი გამოსხივების და ანტრაციკლინის ანტიბიოტიკების თერაპიული ეფექტი. აღგზნება სპეციალური ქიმიური ნაერთების - ფოტოსენსიბილიზატორების შუქზე - იწვევს ჟანგბადის აფეთქებას და უჯრედების მძიმე დაზიანებას. თუ ასეთი ფოტოსენსიბილიზატორი გროვდება სიმსივნეში და ეს უკანასკნელი განათებულია, ხდება სიმსივნური უჯრედების სიკვდილი. ონკოლოგიაში ასეთ თერაპიას ეწოდება ფოტოდინამიკური თერაპია და ფართოდ გამოიყენება, თუმცა, სიმსივნეებისათვის, რომლებიც ხელმისაწვდომია განათებისთვის და არ არის ძალიან დიდი ზომის.
აპოპტოზის პრინციპი შეინიშნება როგორც უჯრედულ, ისე უჯრედულ დონეზე, ქსოვილებსა და ორგანოებში. RAS აკადემიკოსმა ვლადიმერ სკულაჩოვმა შესთავაზა ამ ფენომენს ფენოპტოზი უწოდოს. რატომ, ბუნებაში, ზოგიერთი მცენარე და ცხოველი (ბამბუკი ყვავილობის შემდეგ, ორაგული ყვავილის შემდეგ) ჩართავს თვითგანადგურების პროგრამას თავის დროზე? ეს ნაკლებად სავარაუდოა გამოწვეული იყოს შეუქცევადი გენის მუტაციებით.
ალბათ არ არის დაკავშირებული, მაგრამ ეს არის ბუნების მექანიზმი - ენა, რომელშიც ნათქვამია, რომ გაცვეთილი ბამბუკი მოკვდება ... მექანიზმი ეპიგენეტიკურია - აქ მუტაციები არ არის, მაგრამ არის სწრაფი ცვლილებები ქრომატინის ფიზიკოქიმიურ თვისებებში. და მუშაობის მნიშვნელოვანი გენი (გენები) დუმს ... ასეთი ენისთვის განადგურება არ არის საჭირო - საკმარისია ქიმიური ჯგუფის - მეთილის, ფოსფატის, აცეტილის - ერთი ცილიდან მეორეზე მიმაგრება ან მოწყვეტა.
საკმარისი მინიშნება ...
არსებობს ჰიპოთეზა, რომ კიბო ასევე არის გენეტიკურად არასტაბილური ორგანიზმის დაპროგრამებული სიკვდილი, რომელიც შეიცავს გამოუსწორებელ ზიანს (და ამიტომ საშიშია ევოლუციისთვის). უფრო და უფრო ხშირად შეიძლება მოისმინოს ონკოლოგების განაჩენი, რომ მთლიანად გარდაქმნილი უჯრედის გამოჩენა მხოლოდ დროის საკითხია. თუ ასეა, მაშინ კიბო არ არის დაავადება, სიბერის მსგავსად, არამედ ცოცხალი სისტემის განვითარების გარკვეული შედეგია. მაგრამ მეცნიერები ვარაუდობენ და ფუტუროლოგები მომავალში პროგნოზირებენ გამარჯვებას კიბოზე. მართლაც, ყოველივე ამის შემდეგ, ადამიანი აღარ ელოდება წყალობას ევოლუციისგან დიდი ხნის განმავლობაში. შესაძლებელია კიბოს დამარცხება?
ალბათ შეუძლებელია მისი დამარცხება - კიბო არის არახელსაყრელი ინდივიდის მოცილების ერთ -ერთი მექანიზმი, სხვა ტიპურ პათოლოგიურ პროცესებთან ერთად - ანთება, ალერგია. ორგანული სიცოცხლე აგებულია ორგანიზმების ცვალებადობაზე - სიკვდილი გარდაუვალია და მისი განხორციელების მექანიზმები აუცილებელია. კიბო ერთ -ერთი ასეთი მექანიზმია. მეცნიერთა ამოცანაა სიკვდილის გადადება და არა მისი თავიდან აცილება.
თუ არსებობს მკვეთრი კავშირი დაბერებასა და კიბოს განვითარებას შორის და, როგორც ჩანს, ამაში ეჭვი არავის ეპარება, იქნებ აუცილებელია მისი წინააღმდეგ ბრძოლის ფრონტის გაფართოება დაბერების წინააღმდეგ ბრძოლის მასშტაბით?
დაბერებასთან ბრძოლა აუცილებელია როგორც სიმსივნეების წინააღმდეგ ბრძოლის ნაწილად, ასევე სხვა ასპექტებში - ეს ეჭვის გარეშეა.
სხეულის კიბოს საწინააღმდეგო დაცვა ემყარება აპოპტოზს. რატომ წყვეტს აპოპტოზი მუტაციების სერიის შემდეგ? რატომ, რაღაც მომენტში, სხეული წყვეტს წინააღმდეგობას და იწყებს სიმსივნის (მაგალითად, იმუნური სისტემის) დახმარებას?
იმის გამო, რომ აპოპტოზი, ისევე როგორც ნებისმიერი ბიოლოგიური პროცესი, ირღვევა მუტაციებით და ასევე იმიტომ, რომ აპოპტოზი ადვილად შეიძლება დაირღვეს მუტაციების გარეშე.
რა როლი აქვს ფერმენტების ციტოქრომ P450 ჯგუფს კანცეროგენეზის პროცესში?
3.სერ ჯონ სულსტონი- ბრიტანელი ბიოლოგი, დიდი ბრიტანეთის სამეფო საზოგადოების წევრი. მისმა ლაბორატორიამ შეადგინა ნემატოდების Caenorhabditis elegans ემბრიონის უჯრედების დაყოფის რიგის სრული აღწერა და მიაკვლია აბსოლუტურად ყველა მისი 959 უჯრედის ბედს განვითარების პროცესში.
უეჭველად. ასეთი ცილების არსებობა ადასტურებს აპოპტოზის არსებით მნიშვნელობას ბიოლოგიაში - ამ ფენომენის მექანიზმები შემთხვევითი არ არის, ისინი დაშიფრულია უჯრედის დნმ -ში და მოქმედებენ შესაბამისი სიგნალის გაცემისას. მათ გარეშე სიკვდილი არ არსებობს.
ცოტა ხნის წინ, ალბერტ აინშტაინის მედიცინის ინსტიტუტის ამერიკელმა მკვლევარებმა აღმოაჩინეს, რომ უჯრედშიდა ცილის p115 მცირე ფრაგმენტი ააქტიურებს აპოპტოზს.
აპოპტოზის დაწყებამდე, p115 იყოფა ორ ნაწილად, რომელთაგან მცირე შედგება 205 ამინომჟავისგან. მეცნიერთა აზრით, ის არის ის, ვინც მნიშვნელოვან როლს ასრულებს უჯრედების სიკვდილის პროცესში, რადგან მისი გამოხატვა იწვევს ციტოქრომ C- ს მიტოქონდრიიდან უჯრედების ციტოპლაზმაში გათავისუფლებას, რაც იწვევს მათ სიკვდილს. მეცნიერები იმედოვნებენ, რომ ამ აღმოჩენამ შეიძლება გამოიწვიოს ახალი წამლების გაჩენა კიბოსთან საბრძოლველად და სხვა პათოლოგიები, რომლებიც ხასიათდება უჯრედების გადაჭარბებული გამრავლებით.
თქვენი აზრით, აპოპტოზის სფეროში რომელი უახლესი აღმოჩენაა მედიცინისა და ბიოლოგიის გასაღები?
ლეღვი P115 ცილის მცირე ფრაგმენტის გამოხატვა (ნაჩვენებია მწვანე ფერით) იწვევს ციტოქრომ C- ს (წითელი) მიტოქონდრიიდან უჯრედების ციტოპლაზმაში გათავისუფლებას, რაც იწვევს მათ სიკვდილს.
http://www.cbio.ru/article.php?storyid=3319
პროლიფერაციული დაავადებების თერაპიის ახალი მიდგომები ემყარება ამ ფენომენს - შექმნას პირობები, რომლის მიხედვითაც უჯრედების საკუთარი ცილები იმუშავებენ მკვლელების მსგავსად. ამრიგად, პოლი (ADP-ribose) პოლიმერაზას ცილის პროტეოლიზური დაშლა, რომელიც ხდება აპოპტოზის ინდუქციის დროს, ქმნის მის ფრაგმენტს, რომელიც უკავშირდება დნმ-ს და ხელს უშლის მისი დაზიანების აღდგენას. ნორმალური ცილის პოლი (ADP-ribose) პოლიმერაზა, რომელიც აუცილებელია დნმ-ის დაზიანების სამკურნალოდ, ხდება უჯრედისათვის საბედისწერო.
უახლესი აღმოჩენები, რომლებიც ამჟამად იღებენ მნიშვნელოვან პრაქტიკულ გამოყენებას უჯრედის სიკვდილის რეგულირებისათვის, მოიცავს მტკიცებულებას უჯრედში და მთელ ორგანიზმში კონკრეტული გენის ჩახშობის შესაძლებლობის შესახებ ეგრეთ წოდებული მოკლე თმის სამაგრის საწინააღმდეგო რნმ-ების დანერგვით.
მდუმარე გენის ტექნოლოგია ( დადუმებაგენები), როდესაც მოკლე ორჯაჭვიანი რნმ-ის მოლეკულების დაკავშირება სამიზნე გენის მარეგულირებელ თანმიმდევრობასთან საშუალებას გაძლევთ შეაჩეროთ ამ გენის სინთეზის პროცესი.
პერსპექტიული ვექტორული (ვირუსული) გენური თერაპია.
ამ ინსტრუმენტებს - ქიმიკოსებსა და ბიოლოგებს შორის მრავალწლიანი თანამშრომლობის პროდუქტს - შეუძლია მიაღწიოს გენების ხანგრძლივ დახურვას. თუ ასეთი გენების პროდუქტები მნიშვნელოვანია უჯრედის სიცოცხლისუნარიანობისთვის, ჩვენ ვიწვევთ სიკვდილს მინიმალური გვერდითი ეფექტებით. ეს უკანასკნელი განსაკუთრებით მნიშვნელოვანია ონკოლოგიურ კლინიკაში - ხშირად ქიმიორადიაციური მკურნალობა უფრო რთულია პაციენტებისთვის, ვიდრე თავად დაავადება ... სტანდარტული მედიკამენტები ჯერ კიდევ ცუდად არის გაგებული, რომელი უჯრედები უნდა განადგურდეს და რა გზებით. გენური თერაპია შეიძლება იყოს უფრო ეფექტური და მკურნალობის გვერდითი ეფექტები შემცირებული.
უდავოდ, კონცეფცია სამიზნეზე ორიენტირებული - მიზნობრივი - (ინგლისურიდან სამიზნე - სამიზნე, სამიზნესიმსივნური თერაპია.
ლეღვი
დ წამლის მოქმედება ჰერცეპტინი - (დამზადებულია როშეს მიერ / შვეიცარია). შექმნილია ანტისხეულების საფუძველზე, რომლებსაც შეუძლიათ დაბლოკოს HER2 რეცეპტორული ცილები.
ის აფერხებს სიმსივნის განვითარებას.
ახდენს პაციენტის მდგომარეობის სტაბილიზაციას.
ამცირებს ქიმიოთერაპიის პერიოდს.
(ნახ. იზრდება, როდესაც კურსორს დააჭერთ მასზე)
სიმსივნურ უჯრედში კონკრეტული სამიზნე (ცილის) ინაქტივაციისათვის შემუშავებული გარკვეული მედიკამენტები ძალზე ეფექტურია და კარგად გადაიტანება ხანგრძლივი მკურნალობის კურსებში (მაგალითებია გლევეკი, ირესა).
თქვენი ლაბორატორია დაკავებულია სტრატეგიებით, რომლებიც მიზნად ისახავს სიმსივნური უჯრედების სიკვდილის ინიცირებისა და განხორციელების გზებს. რამდენად შეძელით წინსვლა ამ პრობლემების გადაჭრაში?
ჩვენი ლაბორატორიის სპეციალისტებმა დაადგინეს სიმსივნური უჯრედების სიკვდილის მექანიზმები რუსეთში შექმნილი ახალი წამლების მოქმედებით. კერძოდ, გამოვლენილია მექანიზმი, რომლის საშუალებითაც შესაძლებელია გვერდის ავლით სიმსივნური უჯრედების წამლისადმი წინააღმდეგობის გაწევა: ახალი ქიმიური ნაერთები გადალახავს ბარიერს, რომელიც სხვა სიტუაციებში ხელს უშლის წამლების უჯრედში შესვლას.
გარდა იმისა, რომ იკვლევთ ქიმიური ნაერთების როლს უჯრედების კიბოს გადაპროგრამებაში და კიბოს უჯრედების სიკვდილში, თქვენ ასევე იკვლევთ უჯრედების სიკვდილის მოლეკულურ მექანიზმებს. რა რჩება გაურკვეველი ამ მექანიზმებში? რა კითხვებს უნდა უპასუხონ მეცნიერებმა?
მნიშვნელოვანია გაერკვნენ, თუ როგორ არ გამოიწვიოს აპოპტოზი არა სიმსივნურ უჯრედებში. უჯრედის მოკვლა არ არის პრობლემა, პრობლემა ის არის, თუ როგორ დავიცვათ ჯანმრთელი ...
ახორციელებს თუ არა თქვენი ლაბორატორია მუშაობას კიბოს უჯრედის მკვლელი ფუნქციის მექანიზმების შესწავლაზე? შესაძლებელია თუ არა, პრინციპში, დაბლოკოს კიბოს უჯრედის ფატალური აქტივობა და მისი გავლენა ნორმალურ ქსოვილებზე?
შესაძლებელია და აუცილებელია. გამოჩნდა საშუალებები, რომლებიც ააქტიურებს სიმსივნის ნეკროზის ფაქტორს - კიბოს უჯრედის მიერ გამოყოფილ ტოქსინს და იწვევს ნორმალური უჯრედების განადგურებას, ერთგვარი დამკვირვებლის ეფექტს. ეს თანხები საწყის კლინიკურ კვლევებშია.
თქვენ მუშაობდით შეერთებულ შტატებში რვა წლის განმავლობაში. რა განსხვავებაა რუსულ და დასავლურ მიდგომებს შორის კიბოსთან ბრძოლაში? ცნობილია, რომ შეერთებულ შტატებში მნიშვნელოვანი თანხებია გამოყოფილი მის წინააღმდეგ საბრძოლველად, კიბოს პროფილაქტიკისთვის. და ამ ღონისძიებების ყველაზე მნიშვნელოვანი შედეგი ის არის, რომ კიბოთი სიკვდილიანობა თანდათან მცირდება.
რუსეთში კიბოს ავადობის მდგომარეობა კვლავ მძიმეა. რა ზომებს შეუძლია შეცვალოს არასასურველი მდგომარეობა?
დასავლური სამეცნიერო სტილი ხასიათდება მექანიზმების და არა მხოლოდ ფენომენების სიღრმისეული შესწავლის სურვილით, წარმოდგენის სისრულე, ფართო ინტერდისციპლინარული კავშირების გამო, მაღალი კონკურენცია მნიშვნელოვანი სამეცნიერო ინფორმაციის შესაქმნელად.
კიბოს სიკვდილიანობა კვლავ რჩება გლობალურ პრობლემად, მაგრამ სიტუაცია გაუმჯობესდა ზოგიერთი ლოკალიზაციისთვის. მაგალითად, კუჭის კიბოს შემთხვევები ნაკლებია - შეიცვალა კვების პირობები, საკვების გრძელვადიანი შენახვა გახდა უსაფრთხო სამაცივრე ინდუსტრიის განვითარებით, მოეწყო თამბაქოს საწინააღმდეგო პროპაგანდა - ამ საზოგადოებრივმა ღონისძიებებმა მართლაც მოიტანა დადებითი შედეგები.
ინოვაციებში ჯანმრთელობის დაცვა(პირველ რიგში კიბოს მკურნალობის სფეროში) დაგეგმილი 10 მილიარდი დოლარი- ორჯერ მეტი ვიდრე მიმდინარე ფინანსური წლისთვის.
და სიტუაცია რუსეთში შეიძლება გაუმჯობესდეს მრავალი სოციალური ფენის ერთობლივი ძალისხმევით და, რა თქმა უნდა, დაფინანსებით, რომელიც ადეკვატურია ამგვარი რთული და მნიშვნელოვანი ამოცანებისთვის.
