योजनाबध्द कोशिका मृत्यु। अलेक्जेंडर श्टिल

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अनुसंधान एवं विकास

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अध्ययन नहींविकास

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शोध प्रबंध का सारपी-ग्लाइकोप्रोटीन द्वारा मध्यस्थता वाले ट्यूमर कोशिकाओं के दवा प्रतिरोध विषय पर चिकित्सा में: तत्काल गठन के तंत्र और काबू पाने के लिए दृष्टिकोण

एक पांडुलिपि के रूप में

श्टिल अलेक्जेंडर अल्बर्टोविच

पी-ग्लाइकोप्रोटीन द्वारा संचालित ट्यूमर कोशिकाओं का दवा प्रतिरोध: आपातकालीन तंत्र और काबू पाने के दृष्टिकोण

मॉस्को 2003

यह कार्य एन.एन. ब्लोखिन रूसी चिकित्सा विज्ञान अकादमी, मॉस्को के नाम पर राज्य संस्थान रूसी ऑन्कोलॉजिकल रिसर्च सेंटर में किया गया था।

आधिकारिक प्रतिद्वंद्वी:

चिकित्सा विज्ञान के डॉक्टर, प्रोफेसर ए.एम. गारिन,

डॉक्टर ऑफ बायोलॉजिकल साइंसेज, प्रोफेसर, रूसी संघ के सम्मानित वैज्ञानिक ए.एन. साल्रिन,

डॉक्टर ऑफ बायोलॉजिकल साइंसेज, प्रोफेसर एन.एस. सर्गेयेवा,

अग्रणी संस्थान: रूसी संघ के स्वास्थ्य मंत्रालय की स्नातकोत्तर शिक्षा की रूसी मेडिकल अकादमी।

शोध प्रबंध की रक्षा 25 दिसंबर 2003 को विशेष अकादमिक परिषद डी.001.017.01 की बैठक में होगी

RONC के नाम पर रखा गया। एन.एन.ब्लोखिन रूसी चिकित्सा विज्ञान अकादमी पते पर: 115478, मॉस्को, काशीरस्को हाईवे, 24।

शोध प्रबंध रूसी कैंसर अनुसंधान केंद्र के पुस्तकालय में पाया जा सकता है जिसका नाम रखा गया है। एन.एन. ब्लोखिन RAMS।

विशिष्ट शैक्षणिक परिषद के वैज्ञानिक सचिव

चिकित्सा विज्ञान के डॉक्टर

यू.वी. शिश्किन

कार्य की सामान्य विशेषताएँ विषय की प्रासंगिकता

I. ट्यूमर कोशिकाओं का बहुऔषध प्रतिरोध: ऑन्कोलॉजी में जैविक तंत्र और महत्व।

फार्माकोलॉजी में महत्वपूर्ण प्रगति के बावजूद, अपेक्षित गुणों वाली दवाएं बनाने के लिए प्रौद्योगिकियों के विकास सहित, ट्यूमर के लिए कीमोथेरेपी की सफलता जीवित प्रणालियों की सबसे महत्वपूर्ण विशेषता - बाहरी वातावरण में परिवर्तनों पर प्रतिक्रिया करने की क्षमता तक सीमित है। ऐसी लोच की अभिव्यक्तियों में से एक ट्यूमर कोशिकाओं में दवाओं के प्रति प्रतिरोध का विकास है [कीमोथेरेपी में उपयोग किया जाता है। बाहरी प्रभावों के प्रति कोशिका अनुकूलन की व्यापक व्यापकता और दीर्घकालिक, निरंतर प्रकृति से पता चलता है कि दवा प्रतिरोध पर काबू पाना न केवल अधिक प्रभावी दवाओं की खोज से जुड़ा हो सकता है: संभवतः ऐसी कोई दवा नहीं है जिसके प्रति कोशिकाएं प्रतिरोध विकसित करने में सक्षम नहीं होंगी। केवल विभिन्न प्रकार के तनाव के प्रतिरोध के जैविक तंत्र की व्याख्या से फिर से दवा प्रतिरोध पर काबू पाने के लिए रणनीति विकसित करने में मदद मिलेगी, जो कैंसर रोगियों के उपचार की प्रभावशीलता को बढ़ाने के लिए एक आवश्यक शर्त है।

ट्यूमर का मल्टीड्रग प्रतिरोध (एमडीआर) - विभिन्न दवाओं के प्रभाव के जवाब में ट्यूमर कोशिकाओं द्वारा व्यवहार्यता का संरक्षण - रोग की प्रगति के मुख्य कारणों में से एक है: ट्यूमर कीमोथेरेपी के प्रति असंवेदनशील है, चाहे विभिन्न दवाओं का संयोजन कुछ भी हो औषधियाँ। एमडीआर घटना का एक दीर्घकालिक और स्थिर चरित्र है: प्रतिरोध तंत्र कोशिकाओं की पीढ़ियों से विरासत में मिले हैं। इस प्रकार, एमडीआर ट्यूमर के बढ़ने के प्रमुख कारकों में से एक है।

विषाक्त पदार्थों के प्रति कोशिका प्रतिरोध के दो मुख्य प्रकार हैं। प्राथमिक जी.ई. (कीमोथेरेपी के संपर्क में आने से पहले देखा गया प्रतिरोध) ट्यूमर की प्रगति के दौरान रक्षा तंत्र की अभिव्यक्ति के कारण होता है। हाँ, सक्रियण

प्रतिरक्षा प्रभावकों को प्रतिरोध प्रदान करने वाले एपोप्टोटिक विरोधी तंत्र दवा प्रतिरोध से संबंधित हो सकते हैं। द्वितीयक (अधिग्रहीत) प्रतिरोध तनाव के संपर्क में आने वाली कोशिकाओं में होता है। इन प्रभावों से पहले, ऐसी कोशिकाओं में ड्राइव तंत्र खराब रूप से व्यक्त या अनुपस्थित होते हैं; एक विष के उपचार के बाद जीवित रहने पर, कोशिकाएं कई पदार्थों के प्रति प्रतिरोध प्राप्त कर लेती हैं - एमडीआर (रिओर्डन, लिंग, 1985)। आगे का चयन कोशिकाओं की पीढ़ियों पर प्राप्त फेनोटाइप को समेकित करता है।

एमडीआर का सबसे महत्वपूर्ण तंत्र अंतरकोशिकीय वातावरण में पदार्थों के उत्सर्जन के कारण कोशिका में विषाक्त पदार्थों का कम संचय है। ऐसा परिवहन एटीपी हाइड्रोलिसिस (जूलियानो, लिंग, 1984) की ऊर्जा के कारण प्लाज्मा झिल्ली पी-ग्लाइकोप्रोटीन (पीजीपी) के अभिन्न प्रोटीन द्वारा किया जाता है। कई आंकड़ों से संकेत मिलता है कि एमडीआरआई और पीजीपी एमआरएनए में वृद्धि अक्सर प्रतिरोध में कारक होती है उपचार के लिए कई प्रकार के ट्यूमर (लिन एट अल., 1995; स्टावरोव्स्काया एट अल., 1998)।

द्वितीय. ट्यूमर कोशिकाओं में एमडीआर का विकास: रोकथाम के लक्ष्य के रूप में जैविक तंत्र

यह मानना ​​उचित है कि एमडीआरआई एमआरएनए की मात्रा में वृद्धि इस जीन के प्रवर्धन के कारण है। इस एमडीआर तंत्र की पहचान विषाक्त पदार्थों की उपस्थिति में जीवित रहने के लिए चुनी गई सुसंस्कृत कोशिका रेखाओं में की गई है (रोनिंसन, 1991)। हालाँकि, जब मानव ट्यूमर का विश्लेषण किया गया, तो प्राथमिक ट्यूमर या उपचार के बाद नियोप्लाज्म में एमडीआरआई जीन प्रवर्धन का पता नहीं चला। क्लिनिकल एमडीआर का संभावित कारण अपरिवर्तित जीन संरचना (कॉपी संख्या और न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम का संरक्षण) के साथ एमडीआरआई और पीजीपी की अत्यधिक अभिव्यक्ति है, यानी। स्वदेशी संपत्ति! फेनोटाइप. मानव ट्यूमर कोशिकाओं की संस्कृतियों में, कीमोथेरेपी दवा के एकल उपचार के बाद एमडीआरआई एमआरएनए के स्तर और पीजीपी की मात्रा में वृद्धि देखी गई।

रासायनिक संरचना और क्रिया के तंत्र में भिन्न (चेलोन और इरविन, 1993)। डॉक्सोरूबिसिन (एबोलहोडा एट अल., 1999) के साथ इंट्राऑपरेटिव फेफड़े के जलसेक की शुरुआत के 20-50 मिनट पहले ही फेफड़ों के ऊतकों में कैंसर के मेटास्टेस में एमओआई 1 एमआरएनए के संचय का प्रमाण प्राप्त किया गया था। ये परिणाम प्रायोगिक और नैदानिक ​​स्थितियों में एमडीआर के एपिजेनेटिक सक्रियण की संभावना का सुझाव देते हैं: ट्यूमर में एमडीआर1 और पीजीपी एमआरएनए में वृद्धि एमडीआर1 जीन के प्रवर्धन के बिना हो सकती है।

इस प्रकार के जैविक विनियमन - फेनोटाइप का तत्काल सक्रियण - संबंधित फेनोटाइप को एन्कोडिंग करने वाले जीन (जीन) के प्रतिलेखन को शामिल करना, और/या पोस्ट-संक्रमणकालीन नियंत्रण (एनके का स्थिरीकरण, प्रोटीन संश्लेषण और कामकाज का विनियमन) शामिल है। संबंध में एमडीआर के लिए, इस प्रकार के विनियमन का अर्थ है एमवायआर जीन के शामिल होने की संभावना\ (सेल फ्यूजन और तनाव के जवाब में कान की कोशिकाओं में प्रतिरोध का अपेक्षाकृत तेजी से विकास। एमवायआर 1 जीन की प्रेरणा से सिग्नलिंग मार्गों के विकास का पता चलता है। नाभिक तक कोशिका परिधि। ऐसे रास्ते तनाव-कार्यान्वयन सिग्नलिंग तंत्र हो सकते हैं: प्रोटीन काइनेज सी केएस), फॉस्फोलिपेज़ और इंट्रासेल्युलर सीए 2+, माइटोजेन-सक्रिय न्यूरोप्सिनेस, परमाणु कारक कप्पा बी (एनकेबी)। केवाईआर के नियामक क्षेत्र में सिग्नल ट्रांसमिशन \ जीन और प्रतिलेख जीन संपीड़न की सक्रियता सुनिश्चित करता है।

एमडीआर विनियमन के अध्ययन का एक मौलिक व्यावहारिक पहलू भी है। औषधीय और/या चिकित्सीय हस्तक्षेप के माध्यम से इन तंत्रों का निषेध मायोथेरेपी के दौरान एमडीआर के विकास को रोक देगा।

तृतीय. ट्यूमर कोशिकाओं के गठित एमडीआर पर काबू पाना।

यदि MYR जीन सक्रिय करने वाले संकेतों को अवरुद्ध करने से प्राथमिक संवेदनशील कोशिकाओं में एमडीआर के गठन को रोका जा सकता है, तो ऐसा

यह दृष्टिकोण पहले से बने प्रतिरोध पर काबू पाने के लिए लागू नहीं है। द्वितीयक एमडीआर से निपटने का पारंपरिक तरीका साइटोस्टैटिक्स (लेहने, 2000) के साथ संयोजन में पीजीपी मॉड्यूलेटर का उपयोग है। हालाँकि, पीजीपी अवरोधकों का उपयोग साइड इफेक्ट्स (हृदय ताल गड़बड़ी, प्रतिरक्षाविज्ञानी असंतुलन) द्वारा सीमित है। समान रूप से महत्वपूर्ण, एमडीआर चयन के दौरान कम से कम कुछ कोशिका मृत्यु तंत्रों को अवरुद्ध करने के कारण मॉड्यूलेटर+साइटोस्टैटिक संयोजनों की प्रभावशीलता कम हो सकती है।

यदि दो शर्तें पूरी होती हैं तो गठित एमडीआर पर काबू पाना संभव है: 1) दवा की सांद्रता कोशिका मृत्यु के एफ़ेकगोर तंत्र को सक्रिय करने के लिए पर्याप्त होनी चाहिए, 2) इन तंत्रों के कार्यों को एमडीआर वाली कोशिकाओं में संरक्षित किया जाना चाहिए। पहली शर्त तब पूरी होती है जब दवा पीजीपी बाधा पर काबू पा लेती है। हालाँकि, यह साबित करना आवश्यक है कि एजेंट की एक महत्वपूर्ण इंट्रासेल्युलर एकाग्रता प्राप्त करना एक कोशिका की मृत्यु को सक्रिय करने के लिए पर्याप्त है जो कई प्रभावों के लिए प्रतिरोधी है। प्रतिरोधी कोशिकाओं में सक्रिय जीवन रक्षा तंत्र को प्रतिरोधी कोशिकाओं के उन्मूलन के लक्ष्य के रूप में काम करना चाहिए।

दूसरी शर्त को लागू करने के लिए, प्रतिरोधी कोशिकाओं की मृत्यु को प्रेरित करने के तंत्र के रूप में उनका विश्लेषण करने के उद्देश्य से दृष्टिकोण आशाजनक प्रतीत होते हैं। कुछ साइटोकिन्स के सीडीएनए के साथ ट्रांसफ़ेक्ट सिन्जेनिक मायलोमा कोशिकाओं वाले चूहों के टीकाकरण से साइटोटॉक्सिक टी-लिम्फोसाइट (सीटीएल)-मध्यस्थ प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का विकास होता है और प्रतिरक्षित जानवरों में टीका लगाए गए ट्यूमर की अस्वीकृति होती है (ड्रैनॉफ़ एट अल।, 1993; लेवित्स्की एट अल)। ., 1996)। सीटीएल ग्रैनजाइम बी और पेर्फोरिन का उपयोग करके कोशिकाओं को नष्ट करते हैं। चूंकि ग्रैनजाइम बी एपोप्टोसिस के डिस्टल प्रभावकों में से एक, कैसपेज़ 3 को सक्रिय करता है, और पेर्फोरिन प्लाज्मा झिल्ली (नेक्रोसिस) को प्राथमिक क्षति पहुंचाता है, कोई उम्मीद कर सकता है कि यदि समीपस्थ मृत्यु तंत्र अवरुद्ध हो जाते हैं तो सीटीएल प्रभावी होंगे; नेक्रोसिस के साथ संयोजन में एपोप्टोसिस के डिस्टल लिंक को ट्रिगर करना

एंटीट्यूमर दवाओं के प्रति प्रतिरोधी कोशिकाओं की मृत्यु हो जाती है जो क्रमादेशित कोशिका मृत्यु को प्रेरित करती हैं।

समस्या का निरूपण

एमडीआर एक चिकित्सकीय रूप से प्रतिकूल घटना है, जिस पर काबू पाने के लिए इसके विकास के तंत्र और कोशिका मृत्यु के तरीकों का ज्ञान आवश्यक है; समस्या के दोनों पहलुओं का अध्ययन करना आवश्यक है। सबसे पहले, एमडीआर1/पीजीपी-नकारात्मक मानव कोशिकाओं में एमडीआर गठन के तंत्र का अध्ययन करना आवश्यक है; इन तंत्रों का अध्ययन मुख्य रूप से संवेदनशील कोशिकाओं में प्रतिरोध के विकास को रोकने में मदद करेगा। दूसरे, एमडीआर कोशिकाओं में चल रही मृत्यु प्रक्रियाओं का विश्लेषण उन स्थितियों में प्रतिरोध पर काबू पाने का आधार तैयार करेगा जहां माध्यमिक एमडीआर का गठन हुआ है।

अध्ययन का उद्देश्य मानव ट्यूमर कोशिकाओं में लिम्फ नोड्स के तत्काल गठन के तंत्र को स्थापित करना और प्रतिरोध के इस नरक को दूर करने के लिए दृष्टिकोण विकसित करना है।

1. कीमोथेरेपी दवाओं और प्रायोगिक एगोनिस्ट और सिग्नलिंग तंत्र के विरोधियों के प्रभाव के जवाब में मानव ट्यूमर सेल संस्कृतियों में एमडीआर के विकास के लिए मॉडल का अनुकूलन करना।

2. एमडीआर के तत्काल विकास के लिए मुख्य तंत्र का निर्धारण करें जब कोशिकाओं को एंटीट्यूमर एजेंटों के साथ इलाज किया जाता है: एमडीआर जीन का प्रवर्धन, पीजीपी पॉजिटिव कोशिकाओं का चयन, या एमडीआर का डे नोवो इंडक्शन।

3. इंट्रासेल्युलर सिग्नल ट्रांसमिशन के मार्गों का पता लगाएं जो एमडीआर के सक्रियण को नियंत्रित करते हैं - प्रोटीन काइनेज सी, फॉस्फोलिपेज़ सी, इंट्रासेल्युलर सीए2+, माइटोजेन-सक्रिय प्रोटीन किनेसेस, एनएफकेबी)।

4. कीमोथेरेपी के प्रभावों के जवाब में एमडीआर के तीव्र विकास में एमडीआर जीन अभिव्यक्ति के ट्रांसक्रिप्शनल सक्रियण और पोस्ट-ट्रांसक्रिप्शनल विनियमन (एमआरएनए स्थिरता) की भूमिका की पहचान करना।

5. सीआर-सक्रिय सिग्नलिंग मार्ग और जीन प्रतिलेखन अवरोधकों के अवरोधकों के साथ कीमोथेरेपी दवाओं के संयोजन से ट्यूमर कोशिकाओं में एमडीआर के विकास को रोकने के तरीके विकसित करें।

6. आरंभ करने वाले और प्रभावकारी कैस्प्स के सक्रियण की गतिकी का अध्ययन करने के लिए, माइटोकॉन्ड्रिया की ट्रांसमेम्ब्रेन क्षमता में परिवर्तन, पॉली (एडीपी) राइबोस पोलीमरेज़ के प्रोटियोलिटिक क्लीवेज, इंटरन्यूक्लियोसोमल डीएनए विखंडन और मूल कोशिकाओं में प्लाज्मा झिल्ली की अखंडता और इलाज के दौरान एमडीआर के साथ वेरिएंट का अध्ययन करना। पी-ग्लाइकोप्रोटीन द्वारा परिवहन न की जाने वाली दवा के साथ।

7. ट्यूमर कोशिकाओं को व्यक्त करने वाले टीकाकरण का प्रयोग करें

एमडीआर कोशिकाओं के खिलाफ प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया उत्पन्न करने के लिए साइटोकिन्स। »

बचाव के लिए प्रावधान प्रस्तुत किये गये।

1. पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर का गठन - कई प्रभावों के लिए एक तत्काल सेल प्रतिक्रिया - एमडीआर 1 जीन के एपिजेनेटिक सक्रियण द्वारा मध्यस्थ है। यह सक्रियण इंट्रासेल्युलर सिग्नल ट्रांसमिशन, जीन प्रमोटर के प्रेरण और एमआरएनए के स्थिरीकरण के कई तंत्रों के कारण है। और इन संकेतों के अवरोधकों द्वारा इसे रोका जा सकता है।

2. पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर पर काबू पाना प्रतिरोधी कोशिकाओं के प्लाज्मा झिल्ली पर लक्षित प्रभाव से जुड़ा हो सकता है। पीजीपी कोशिकाओं को प्लाज्मा झिल्ली की अखंडता - नेक्रोसिस के विघटन से नहीं बचाता है।

वैज्ञानिक ज्ञान

1. पहली बार, किसी बहिर्जात उत्तेजना के लिए तत्काल कोशिका प्रतिक्रिया के रूप में एमडीआर के गठन के विचार की पुष्टि की गई है;

2. पहली बार, एक विशिष्ट दवा प्रतिरोध फेनोटाइप, पी£पी-मध्यस्थता एमडीआर के विकास के तंत्र का विस्तार से अध्ययन किया गया है: इस प्रोटीन को एन्कोडिंग करने वाले एमवायआर 1 जीन का एपिजेनेटिक सक्रियण।

3. पहली बार, एमएचएस जीन के तत्काल सक्रियण का एक मॉडल विकसित किया गया है,

सुसंस्कृत मानव ट्यूमर कोशिकाओं में पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर के एक स्थिर फेनोटाइप के अधिग्रहण के साथ; 1. एंटीट्यूमर दवाओं के संपर्क में आने वाली कोशिकाओं में सिग्नल ट्रांसडक्शन मार्ग, ट्रांसक्रिप्शन सक्रियण के तंत्र और एमओके 1 जीन के पोस्ट-ट्रांसक्रिप्शनल विनियमन की पहचान की गई है। 5. पहली बार, ट्यूमर कोशिकाओं में आरसीआर-मध्यस्थ एमडीआर के गठन को रोकने के लिए औषधीय पदार्थों के वर्गों - इंट्रासेल्युलर सिग्नल ट्रांसमिशन के अवरोधकों की विशेषता बताई गई है। 5. पहली बार, पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर के साथ कोशिकाओं में सक्रिय मृत्यु तंत्र का अध्ययन किया गया, और प्रतिरोध पर काबू पाने के लिए एक दृष्टिकोण विकसित किया गया, जिसमें प्लाज्मा झिल्ली की अखंडता को प्राथमिक क्षति शामिल थी।

व्यावहारिक मूल्य।

1. कीमोथेराप्यूटिक दवाओं के संपर्क में आने पर सुसंस्कृत ट्यूमर कोशिकाओं में पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर के तत्काल विकास को रोकने के तरीकों का विकास।

2. एमडीआर पर काबू पाने के लिए संशोधित आनुवंशिक रूप से इंजीनियर किए गए टीकों का प्रीक्लिनिकल परीक्षण।

कार्य की स्वीकृति.

शोध प्रबंध पर 30 जून, 2003 को आणविक आनुवंशिकी, वायरल और सेलुलर ऑन्कोजीन, आणविक एंडोक्राइनोलॉजी, एंटीट्यूमर प्रतिरक्षा, जैव रासायनिक फार्माकोलॉजी, चिकित्सा अनुसंधान, प्रयोगात्मक निदान और बायोथेरेपी के समूह के साथ ट्यूमर सेल आनुवंशिकी, साइटोजेनेटिक्स विभागों के एक संयुक्त सम्मेलन में चर्चा की गई थी। ट्यूमर का; रूसी कैंसर अनुसंधान केंद्र के श्मुनोलॉजी, हेमेटोलॉजी, कीमोथेरेपी, क्लिनिकल फार्माकोलॉजी, उन्नत उपचार विधियों के विभागों का नाम रखा गया है। एन.एन.ब्लोख्शा RAMS।

शोध प्रबंध की मुख्य सामग्री निम्नलिखित सम्मेलनों में प्रस्तुत की गई: द्वितीय अंतर्राष्ट्रीय संगोष्ठी "साइलोस्टैटिक ड्रग रेजिस्टेंस", (के जर्मनी, 1991); गॉर्डन सम्मेलन "कीमोथेरेपी में प्रगति" (न्यूयॉर्क, लंदन, यूएसए, 1994); "आणविक विष विज्ञान" (कॉपर माउंटेन, यूएसए, 1995); "इंड्यूसिबल जीनोमिक रिस्पॉन्स" (स्टीवेन्सन, यूएसए, 1996); "न्यूक्लिक एसिड - एकीकृत आणविक निदान और थेरेपी" (सैन डिएगो, यूएसए, 1996); अमेरिकन एसोसिएशन ऑफ कैंसर रिसर्च (1994-2001) के वार्षिक सम्मेलन: 6वीं और 7वीं कांग्रेस "ऑन्कोलॉजी में प्रगति", (हर्सनिसोस, ग्रीस, 2001,2002); "सेल न्यूक्लियस की संरचना और कार्य" (सेंट पीटर्सबर्ग, 2002), साथ ही ओन्कोटेक, इंक. के सेमिनारों में भी। (इरविन, यूएसए, 1996), साल्क इंस्टीट्यूट (लाजोला, यूएसए, 1997), ली मोफिट कैंसर सेंटर (टाम्पा, यूएसए, 1997), द जैक्सन लेबोरेटी (बार हार्बर, यूएसए, 1997), स्लोअन-केटगेरिंग कैंसर सेंटर, न्यू यो ] यूएसए, 1999), कोपेनहेगन (2002), इंसब्रुक (2002) और ग्रोनिंग विश्वविद्यालय! (2003), मॉस्को स्टेट यूनिवर्सिटी। एम.वी. लोमोनोसोव (2002), रिसर्च इंस्टीट्यूट ऑफ एक्सपेरिमेंटल पैथोलॉजी, ऑन्कोलॉजी और रेडियोबायोलॉजी के नाम पर रखा गया। आर.ई. कावेत्स्की (कीव, 2002)।

प्रकाशन.

शोध प्रबंध की संरचना और दायरा.

शोध प्रबंध टाइपस्क्रिप्ट के 181 पृष्ठों पर प्रस्तुत किया गया है और इसमें "साहित्य समीक्षा", "सामग्री और अनुसंधान के तरीके", "अनुसंधान परिणाम" (दो भाग), चर्चा और निष्कर्ष अध्यायों का परिचय शामिल है। कार्य में 44 आकृतियाँ और 6 तालिकाएँ हैं। ग्रंथ सूची सामग्री में 270 साहित्य स्रोतों के लिंक शामिल हैं।

अनुसंधान की सामग्री और विधियाँ।

प्रयोगशाला जानवर और कोशिका रेखाएँ। बाल्ब/सी चूहों का प्रयोग किया गया। एमडीआर सक्रियण पर प्रयोगों के लिए, हमने मानव कोशिका रेखाओं H9 (टी-सेल ल्यूकेमिया), K562 (प्रोमाइलोसाइटिक ल्यूकेमिया), SW का उपयोग किया<

(कोलन कैंसर), साथ ही सब्लिनिगो K562Í/S9, जिसमें पीजीपी को विषाक्त पदार्थों के प्रतिरोध के लिए कोशिकाओं का चयन किए बिना व्यक्त किया जाता है (मेचेतनर एट अल।, 1997)। एंटीट्यूमर इम्युनिटी बनाने के प्रयोगों के लिए, मायलोमा लाइन्स MPC11, J558 और S194 का उपयोग किया गया। एमडीआर के साथ सबलाइन प्राप्त करने के लिए, डॉक्सोरूबिसिन के प्रतिरोध के लिए एमपीसी11 कोशिकाओं का चरणबद्ध चयन किया गया था। स्वतंत्र MPC1 सुबल्स lDoxlO-1 और MPClDoxlO-2 100 nM डॉक्सोरूबिक एसिड की उपस्थिति में प्रवर्धित हुए।

एमडीआर अध्ययन: एमडीआरआई जीन आरएनए, पीजीपी मात्रा और कार्य।

एमडीआर को सक्रिय करने के लिए, हमने लिगोसिन-1पी-अरेबिनोफ्यूरानोसाइड (साइटोसार, आरा सी), डॉक्सोरूबिसिन, विन्क्रिस्टाइन, नोकोडाजोल, ब्लसोमाइसिन, स्फिंगोमाइलीनेज, सीए2+ आयनोफोर ए23187, थैप्सीगार्गिन, 2-डीऑक्सीग्लूकोज, ट्राइकोस्टैटिन ए और फोर्बोल एस्टर 12-0-टेट्राडेकैनोयलमिरिस्टेट का उपयोग किया। 13 -एसीटेट (टीपीए)। एमडीआर की सक्रियता को रोकने के लिए, एक्टिनोमाइसिन डी, α-एमैनिटिन, एक्टाइनासिडिन 743 (ईटी743), चेलेरीथ्रिन, बीआईएस-इंडोलिलमेलीमाइड I, कैलफोस्टिन सी, बार्टा/एएम, टीएमबी-8, पाइरोलिडइंडप्टियोकार्बामेट (पीडीटीसी), टॉसिल-एल-फेनिलक्लोरोमिथाइल कीटोन ( टीपीसीएमके), सोडियम सैलिसिलेट, सैलिसिलिक एसिड, पीडी98095। 30 मिनट में कोशिकाओं में अवरोधक जोड़ दिए गए। एक्टिवेटर्स जोड़ने से पहले. कोशिकाओं में एमडीआर\ एमआरएनए के स्तर का अध्ययन रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) (नूनान एट अल., 1990; श्टिल एट अल., 2000) द्वारा प्राइमर: एमडीआरवी का उपयोग करके किया गया था। सीधा: 5"-ССС एटीएस एटीटी जीसीए एटीए जीसीए जीजी-3"; रिवर्स: 5"-जीटीटी सीएए एक्ट टीसीटी जीसीटी एससीटी जीए-3"। उत्पाद की लंबाई 167 बीपी. पी2-माइक्रोग्लोबुलिन: प्रत्यक्ष: 5"-एएसएस सीसीसी एक्ट जीएए एएए गैट जीए-3"; रिवर्स: 5"-एटीसी टीटीसी एएए सीसीटी सीसीए टीजीए टीजी-3"। उत्पाद की लंबाई 120 बीपी।

पीजीपी की मात्रा और इसके परिवहन कार्य को एकाधिकार एंटीबॉडी यूआईसी2 (मेचेतनर एट अल., 1997) के साथ फ्लो साइटोमेट्री द्वारा निर्धारित किया गया था। फ़्लुओरेसिन आइसोथियोसाइनेट (FITC)-संयुग्मित एंटी-माउस IgG एंटीबॉडी का उपयोग द्वितीयक एंटीबॉडी के रूप में किया गया था। पीजीपी पढ़ाने के लिए-

आश्रित परिवहन, फ्लोरोसेंट सब्सट्रेट्स पीजीपी-रोडामाइन 123 (एमडीआर इंडक्शन पर प्रयोगों में) (नेफख, 1988) और कैल्सीन एसिटोक्सिमिथाइल एस्टर (मायलोमा कोशिकाओं के साथ प्रयोगों में) (होलो एट अल।, 1996; शटू एट अल।, 1999) का उपयोग किया गया था।

कोशिका मृत्यु परख. विषाक्त पदार्थों की उपस्थिति में कोशिका अस्तित्व का अध्ययन 3-(4,5-डाइमिथाइलथियाज़ोल-2-वाईएल)-5-(3-कार्बोक्सिमेथॉक्सीफेनिल)-2-(4-सल्फोफेनिल)-2पी-टेट्राजोलियम (एमटीटी परीक्षण) की कमी से किया गया था। (मॉसमैन, 1983; सिदोरोवा एट अल., 2002)। एपोप्टोटिक कोशिकाओं की संख्या निर्धारित करने के लिए वी-एफआईटीसी अनुलग्नकों का उपयोग किया गया था; प्रोपीडियम आयोडाइड (पीआई) के साथ नेक्रोटिक कोशिकाओं का पता लगाया गया। माइटोकॉन्ड्रिया की ट्रांसमेम्ब्रेन विद्युत क्षमता जेसी-1 जांच (ज़मज़ेयर एट अल।, 1997) की प्रतिदीप्ति द्वारा निर्धारित की गई थी। जीनोमिक डीएनए विखंडन का निर्धारण करने के लिए, कोशिकाओं को सोडियम साइट्रेट, एनपी-40, आरएनएएस ए और पीआई युक्त बफर में रखा गया था; निलंबन का विश्लेषण फ्लो साइटोमीटर (श्टिल एट अल., 1999) पर किया गया था; उप-जीएल क्षेत्र में खंडित डीएनए का पता लगाया गया था। कोशिकाओं में ऑक्सीजन के मुक्त रूपों के गठन का अध्ययन करने के लिए, डाइक्लोरोफ्लोरेसिन डायसेटेट एस्टर (डीसीएफडीए) का उपयोग किया गया था, जो प्रवेश करता है इंट्रासेल्युलर मेटाबोलाइट्स द्वारा ऑक्सीकरण के बाद साइटोप्लाज्म और फ्लोरोसिस।

साइटोसोल और कण अंशों में पीकेसी गतिविधि रेडियोधर्मी विधि द्वारा कोशिका विश्लेषण के बाद माइलिन मूल प्रोटीन के फॉस्फोराइलेशन और सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा अंशों को अलग करके निर्धारित की गई थी (श्टिल एट अल। 2000)।

माइटोजेन-सक्रिय प्रोटीन किनेसेस ईआरके1/2 और जेएनके1 की गतिविधि किनेसेस के सेल लसीका और इम्यूनोप्रेसेपिटेशन (एट अल., 1996) के बाद विशिष्ट सब्सट्रेट्स (माइलिन बेसिक प्रोटीन और सी-जून) के फॉस्फोराइलेशन द्वारा निर्धारित की गई थी।

रिपोर्टर प्लास्मिड, अभिव्यक्ति वैक्टर, अभिकर्मक।

K562 और B\Y620 कोशिकाओं को MOL 1 जीन -1202/+118 nt के ट्रॉक्सिमल प्रमोटर के एक क्षेत्र को ले जाने वाले प्लास्मिड के साथ ट्राइफ़ेक्ट किया गया था। प्रतिलेखन आरंभ स्थल के सापेक्ष, pOB2b वेक्टर में क्लोन किया गया। रिपोर्टर प्रोटीन Pge/1y लूसिफ़ेरेज़ था। NaκB के लेन-देन के भोलेपन का परीक्षण करने के लिए, कोशिकाओं को OTkB (5xNκB-lgocyferase) के लिए बाइंडिंग साइटों वाले एक प्रमोटर-रिपोर्टर निर्माण के साथ ट्राइफ़ेक्ट किया गया था। लूसिफ़ेरेज़ गतिविधि को दबाने के लिए, कोशिकाओं को एक साथ SIV40 प्रमोटर के नियंत्रण में रेंटल ल्यूसिफ़ेरेज़ ले जाने वाले सैकमिड के साथ इंजेक्ट किया गया था। कुछ प्रयोगों में, लूसिफ़ेरेज़ Pne]\y की गतिविधि ट्रांसफ़ेक्ट कोशिकाओं में कुल SEL की सांद्रता से संबंधित थी। अभिकर्मक के लिए, हमने स्पोफेक्नश या लिपोफ़ेक्टामाइन, साथ ही "जीन गन" (माइलोमा कोशिकाओं के लिए) नबिलेविच एट अल।, 1996) का उपयोग किया। बीयू40 प्रमोटर के नियंत्रण में पी50 और पी65 आईκबी सबयूनिट को व्यक्त करने वाले वेक्टर का उपयोग सहसंक्रमण के लिए किया गया था। परजीवी - 1202/+118-ल्यूसिफ़ेरेज़ सेल 1 कोशिकाओं में ल्यूसिफ़रेज़ की गतिविधि का अध्ययन कीमो-पॉमिनसेंट विधि द्वारा किया गया था।

चूहों का टीकाकरण. एमडीआर के साथ एमपीसी11 कोशिकाओं और सबलाइनों को विकिरणित (40 ~आर) किया गया, ग्रैनुलोसाइट-मैक्रोफेज-लवणता-उत्तेजक कारक (जीएम-सीएसएफ) सीडीएनए ले जाने वाले प्लास्मिड के साथ ट्राइफ़ेक्ट किया गया और चूहों में सूक्ष्म रूप से इंजेक्ट किया गया (प्रति जानवर 1.5 x 105 वर्ष)। नियंत्रण चूहों को बिना सम्मिलित किए वेक्टर के साथ ट्रांसफ़ेक्ट की गई समान संख्या में विकिरणित कोशिकाओं के साथ इंजेक्ट किया गया था। 7 दिनों के बाद, ताजा कोशिकाओं को इंटरल्यूकिन -12 (आईएल -12) डीएनए ले जाने वाले प्लास्मिड के साथ विकिरणित और ट्राइफ़ेक्ट किया गया या विकिरणित कोशिकाओं को बिना सम्मिलित (नियंत्रण) के चैस्मिड के साथ ट्रांसफ़ेक्ट किया गया। अगले 7 दिनों (पहले टीकाकरण के बाद कुल 14 दिन) के बाद, जानवरों को चमड़े के नीचे ताजी कोशिकाओं का टीका लगाया गया (प्रति सप्ताह 10वां) (टीशर एट अल., 1998)।

मायलोमा कोशिकाओं के साथ मिश्रित संस्कृति में सीटीएल गतिविधि। चूहों में आईएल-2-ट्रांसफ़ेक्ट मायलोमा कोशिकाओं के इंजेक्शन के 11 दिन बाद तिल्ली को हटा दिया गया। स्प्लेनोसाइट्स को 5 दिनों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस, 5% पर सुसंस्कृत किया गया

टीकाकरण के लिए उपयोग की जाने वाली लाइन की ताजा विकिरणित कोशिकाओं के साथ सीओजी। फिर ताज़ा मायलोमा कोशिकाओं को 51Cr (CTL लक्ष्य कोशिकाओं) से लोड किया गया। सीटीएल गतिविधि का मूल्यांकन लक्ष्यों के साथ ऊष्मायन के बाद माध्यम में एमएसजी की रिहाई से किया गया था। पेर्फोरिन प्रसंस्करण को बाधित करने के लिए, स्प्लेनोसाइट्स को कॉन्कैनामाइसिन ए और फिर लक्ष्य (काटोक एट अल।, 1996) के साथ ऊष्मायन किया गया था।

शोध का परिणाम

पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर का तत्काल सक्रियण।

एमडीआरआई एमआरएनए एंटीट्यूमर दवाओं की प्रतिक्रिया में कोशिकाओं में जमा हो जाता है (चौधरी और रोनिन्सन, 1993)। यह स्पष्ट करने के लिए कि क्या यह प्रभाव पीजीपी-पॉजिटिव कोशिकाओं के चयन से जुड़ा है या एमडीआर के प्रेरण के साथ, एमईएस/पीजीपी-नकारात्मक एच9 कोशिकाओं पर प्रयोग किए गए। कोशिकाओं का उपचार एरा सी से किया गया, जो एक गैर-पीजीपी परिवहनित दवा है जिसका उपयोग स्तन कैंसर और हेमटोलॉजिकल विकृतियों वाले रोगियों में किया जाता है। पीसीआर के 25 चक्रों के बाद अनुपचारित कोशिकाओं में एमडीआर की अभिव्यक्ति का पता नहीं चलता है, जबकि आरा सी-उपचारित कोशिकाओं में एमडीआरआई एमआरएनए में वृद्धि 3-6 घंटों के बाद देखी जाती है। प्रभाव (चित्र 1, ए)। एमडीआरआई एमआरएनए में वृद्धि और भी तेजी से देखी जा सकती है - एक्सपोज़र के केवल 1 घंटे के बाद, यदि साइटोसार एकाग्रता 75 µM तक बढ़ जाती है। एमडीआरआई एमआरएनए में वृद्धि उन कोशिकाओं में बनी रहती है जो आरा सी के एक बार संपर्क में आने से कम से कम 6 सप्ताह तक जीवित रहती हैं।

हमने अगली जांच की कि क्या पीजीपी की मात्रा एमडीआरआई एमआरएनए के संचय के समानांतर बढ़ती है। चित्र में. चित्र 1 बी से पता चलता है कि आरा सी-उपचारित कोशिकाएं पीजीपी व्यक्त करती हैं। यह महत्वपूर्ण है कि आरा सी के संपर्क से पूरी आबादी दाहिनी ओर स्थानांतरित हो जाती है, जो इंगित करता है कि संस्कृति में लगभग कोई भी कोशिका पीजीपी जमा करने में सक्षम है। आरा सी-उपचारित कोशिकाएं कार्यात्मक रूप से सक्रिय पीजीपी व्यक्त करती हैं: इन कोशिकाओं में, उन्मूलन

रोडामाइन 123 अक्षुण्ण कोशिकाओं की तुलना में अधिक शक्तिशाली है; पीजीपी-निर्भर परिवहन के अवरोधक वेरापामिल द्वारा प्रभाव को हटा दिया जाता है।

ओ 1 3 6 10 16 24 घंटे।

प्रतिदीप्ति (आईजी) -

चित्र .1। आरा सी के एकल संपर्क के बाद एमडीआरएक्स और पीजीपी एमआरएनए में वृद्धि। ए: एच9 कोशिकाओं को 10 μM आरा सी के साथ इलाज किया गया। एमडीआर1 और पी2-माइक्रोग्लोबुलिन (बी2एम) एमआरएनए को रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के बाद पीसीआर द्वारा निर्धारित किया गया था। बी: कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए 10 µM आरा सी से उपचारित किया गया (संख्या)।<яя панель). Контроль - необработанные клетки (верхняя панель). Таким образом, накопление иРНК MDR\ наблюдается в течение первых

पीजीपी द्वारा परिवहन न किए गए एजेंट के संपर्क में आना। यह मतलब है कि

इस प्रभाव के लिए सबसे संभावित तंत्र एक फेनोटाइप का प्रेरण है

"पहले से मौजूद" प्रतिरोधी कोशिकाओं का चयन नहीं।

चित्र में. चित्र 2 पीजीपी द्वारा परिवहन की जाने वाली कीमोथेरेपी दवा विन्क्रिस्टाइन की सांद्रता पर कोशिका अस्तित्व की निर्भरता को दर्शाता है। कोशिकाएँ जो जीवित रहीं

चावल। 2. सीपीटोज़ार के एक बार संपर्क से एक स्थिर पीजीपी-परिवहन दवा का निर्माण होता है।

H9 कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए 10 µM आरा सी के साथ इलाज किया गया, ताजा माध्यम में फिर से निलंबित किया गया और 12 दिनों के लिए ऊष्मायन किया गया। लॉगरिदमिक कोशिका वृद्धि की बहाली के बाद, साइटोसार (नियंत्रण) से उपचारित नहीं की गई कोशिकाओं की तुलना में विन्क्रिस्टाइन के प्रति उनकी संवेदनशीलता का अध्ययन किया गया। 4 प्रयोगों के परिणाम (एमटीटी परीक्षण)

इस प्रकार, गैर-पीजीपी-परिवहन कीमोथेरेपी दवा के लिए पीजीपी-नकारात्मक कोशिकाओं के एक बार संपर्क से तेजी से - एक कोशिका चक्र के भीतर - एमडीआरआई जीन के एमआरएनए का संचय, कार्यात्मक रूप से सक्षम पीजीपी और, सबसे महत्वपूर्ण बात, प्रतिरोध का विकास होता है। पीजीपी-परिवहन एजेंट। प्राथमिक संवेदनशील कोशिकाएं पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर प्राप्त करती हैं। इस घटना का तंत्र पीजीपी पॉजिटिव कोशिकाओं का चयन नहीं है, बल्कि डे नोवो फेनोटाइप का सक्रियण है। पीजीपी-मध्यस्थता का गठन कैसे होता है? एमडीआर: एमडीआरएक्स जीन प्रतिलेखन की सक्रियता या एमआरएनए के स्थिरीकरण के कारण, क्या दोनों तंत्र कार्य करते हैं?

चित्र 3 में प्रस्तुत प्रयोगों में, H9 कोशिकाओं को Ara C की उपस्थिति में उपचारित किया गया! प्रतिलेखन अवरोधक - एक्टिनोमाइसिन डी, ए-एमैनिटिन और एक्टाइनासिडिन 743 (ईटी743)। परीक्षण किए गए सभी अवरोधकों ने एमडीआरआई एमआरएनए स्तरों में आरा सी-प्रेरित वृद्धि को रोका।

चावल। 3. प्रतिलेखन अवरोधक एमडीआर1 आरएनए के संचय को रोकते हैं। H9 कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए 10 μM आरा सी से उपचारित किया गया। एक्टिनोमाइसिन डी, α-एमैनिटिन या ईटी743 के बिना या उपस्थिति में। 3 प्रयोगों के परिणामों का सारांश दिया गया है।

एमआरएनए के आधे जीवन (स्थिरता) का अध्ययन करने के लिए, कोशिकाओं को 10 घंटे तक आरा सी से उपचारित किया गया। और एक्टिनोमाइसिन डी के साथ ताजा माध्यम या मध्यम में स्थानांतरित किया गया और अगले 36 घंटों के लिए ऊष्मायन किया गया। अनुपचारित कोशिकाओं में, एमडीआरआई एमआरएनए अल्पकालिक निकला: इसका आधा जीवन ~30 मिनट था। आरा सी के साथ उपचार से एमआरएनए का आधा जीवन 6 घंटे तक बढ़ गया। इस प्रकार, एमडीआरआई एमआरएनए का संचय, और, परिणामस्वरूप, साइटोटॉक्सिक तनाव के जवाब में पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर का विकास, न केवल एमडीआर 1 प्रतिलेखन के सक्रियण के कारण होता है, बल्कि इस जीन के एमआरएनए के स्थिरीकरण के कारण भी होता है।

एमडीआर सक्रियण में इंट्रासेल्युलर सिग्नल ट्रांसमिशन के तंत्र चित्र 4 से पता चलता है कि टीएफए, एक पीकेसी एगोनिस्ट के साथ एच9 कोशिकाओं के एक एकल उपचार से एमडीआरआई जीन को शामिल किया गया। विशिष्ट पीकेसी अवरोधक - चेलरीथ्रिन, कैलफोस्टिन सी और बीआईएस-इंडोलिलमेलीमाइड I - फोर्बोल एस्टर और कीमोथेरेपी द्वारा एमडीआर सक्रियण को रोकते हैं। समान

संकेतित पीकेसी अवरोधकों की उपस्थिति में आरा सी, डॉक्सोरूबिसिन या टीएफए से उपचारित K562 कोशिकाओं पर डेटा प्राप्त किया गया था।

चावल। 4. पीकेसी अवरोधक एमडीआरआई प्रेरण को रोकते हैं। H9 कोशिकाओं को 16 घंटे के लिए 10 μM आरा C से उपचारित किया गया। पीकेसी अवरोधकों के बिना या उनकी उपस्थिति में। 3 प्रयोगों के परिणामों का सारांश दिया गया है।

संक्षेप में, पीकेसी एमडीआरआई (और इसलिए एमजेआई फेनोटाइप) के विनियमन के लिए महत्वपूर्ण है; इस जीन को पीकेसी एगोनिस्ट द्वारा प्रेरित किया जा सकता है, और पीकेसी अवरोधक कैंसर विरोधी दवाओं द्वारा एमडीआरआई के सक्रियण को रोकते हैं।

पीकेसी का शारीरिक एगोनिस्ट डायसाइलग्लिसरॉल (डीएटी) है, जो फॉस्फेटिडिलिनोसिटॉल-4,5-डिफॉस्फेट (पीआईजी) के हाइड्रोलिसिस के दौरान फॉस्फेटिडिलिनोसिटॉल-विशिष्ट फॉस्फोलिपेज़ सी और/या फॉस्फोलिपेज़ सी की क्रिया के तहत फॉस्फेटिडिलकोलाइन के टूटने के दौरान बनता है। इस फॉस्फोलिपिड के लिए (बेरिज, इरविन, 1984)। आरा सी या डॉक्सोरूबिसिन द्वारा प्रेरित एमडीआरआई के सक्रियण को नियोमाइसिन सल्फेट और यू73122 द्वारा अवरुद्ध किया जा सकता है, जो फॉस्फेटिडिलिनोसिटोल-विशिष्ट फॉस्फोलिपेज़ सी के अवरोधक हैं (चित्र 5)। फोर्बोल एस्टर द्वारा एमडीआरआई का सक्रियण नियोमाइसिन सल्फेट और यू73122 के प्रति असंवेदनशील है क्योंकि टीएफए एक प्रत्यक्ष पीकेसी एगोनिस्ट है, और यह काइनेज फॉस्फोलिपेज़ सी के लिए डिस्टल कार्य करता है। फॉस्फेटिडिलकोलाइन-विशिष्ट का निषेध

युसफोलिपेज़ सी (दवा बी609) से एमवायआर 1 चित्र 5 की अभिव्यक्ति में कोई बदलाव नहीं आया। ये परिणाम एमवाईए 1 के सक्रियण में युस्फेटिडिलिनोसेनगोल-विशिष्ट फॉस्फोलिपाज़ोन सी के पीआई 2 हाइड्रोलिसिस के महत्व को दर्शाते हैं।

चावल। 5. एमडीआर के प्रेरण में फॉस्फोलिपेज़ सी अवरोधक।

H9 कोशिकाओं को 16 घंटे के लिए 10 μM आरा C से उपचारित किया गया। नियोमाइसिन सल्फेट, U73122 या D609 के बिना या उसकी उपस्थिति में। 3 प्रयोगों के परिणामों का सारांश दिया गया है।

फॉस्फोलिपेज़ सी पीआई2 को डीएटी और एफआई में तोड़ देता है। पहला उत्पाद पीकेसी को सक्रिय करता है, दूसरा एक्टोप्लाज्मिक रेटिकुलम से जुटाकर इंट्रासेल्युलर Ca2+ के स्तर को बढ़ाता है। एमडीआरआई के प्रेरण में इंट्रासेल्युलर Ca2+ की भूमिका इस जीन को सक्रिय करने के लिए Ca2+-विशिष्ट आयनोफोर A23187 और Ca2+-ATPase अवरोधक, thapsigargin की क्षमता से सिद्ध होती है; विशिष्ट Ca2+ chelator BARTA/AM ने कीमोथेरेपी और TFA दोनों द्वारा MDR\ को शामिल होने से रोका (चित्र 6)।

1 2 3 4 5 इन 7 8 ई 10 11 12 14 14 15 1617 18 19 आरएनएस। बी। A) R1 के प्रेरण में इंट्रासेल्युलर Ca2+ की भूमिका।

H9 कोशिकाओं को 16 घंटे तक MOI इंड्यूसर से उपचारित किया गया। अकेले या कैल्शियम चेलेटर BARTA/AM की उपस्थिति में। ट्रैक: 1-अनुपचारित कोशिकाएं, 2,3-ए23187; 4.5-

tapsigargin; 6,7-AgaC; 8,9-डॉक्सोरूबिसिन; 10,11-ब्लोमाइसिन; 12,13-2-डीऑक्सी-ग्लूकोज; 14,15-नोकोडाज़ोल; 16,17-स्फिंगोमाइलीनेज; 18,19-टीएफए। सम ट्रैक: प्रारंभ करनेवाला विषम (1 को छोड़कर): प्रारंभ करनेवाला -5 µM VARTA/AM।

एमडीआर के सक्रियण में इंट्रा- और बाह्यकोशिकीय Ca2+ की भागीदारी को स्पष्ट करने के लिए, प्रयोगों की दो श्रृंखलाएँ की गईं। सबसे पहले, जीन सक्रियण का अध्ययन Ca2+ के बिना एक माध्यम में कोशिका ऊष्मायन की स्थितियों के तहत किया गया था। बाह्यकोशिकीय Ca2+ को हटाने से कीमोथेरेपी और टीपीए द्वारा एमडीआरआई की सक्रियता ख़राब नहीं हुई। दूसरे, एजेंट TMB-8, जो कोशिकाओं में Ca2+ के प्रवेश को रोकता है और इंट्रासेल्युलर Ca2+ की सांद्रता को नहीं बदलता है, ने MDRI के प्रेरण को प्रभावित नहीं किया। इस प्रकार, एमडीआरएक्स सक्रियण के लिए इंट्रासेल्युलर नहीं बल्कि बाह्य सेल कैल्शियम की आवश्यकता होती है। उपरोक्त प्रयोग कीमोथेरेपी सहित विभिन्न पदार्थों द्वारा एमडीआरएक्स जीन के सक्रियण में फॉस्फोलिपेज़ सी->डीएजी-*पीकेएस और पीआई3->सीए2+ सिग्नलिंग मार्गों की मौलिक भूमिका साबित करते हैं।

हालाँकि, पीकेसी एमडीआर को सक्रिय करने के लिए एक सार्वभौमिक तंत्र नहीं है। पीकेसी गतिविधि अलग-अलग एमडीआरएक्स इंड्यूसर्स से उपचारित कोशिकाओं में भिन्न होती है। टी< активирует ПКС, Ara С не оказывает существенного влияния на активность этой киназы, а церамид - вторичный мессенджер, накапливающийся в обработанных химиопрепаратами клетках (Bose et al., 1995), ингибирует ее (табл. 1).

"तालिका 1. पीकेसी गतिविधि पर एमडीआरआई जीन प्रेरकों का प्रभाव।

उपचार पीकेसी गतिविधि, पीएमओएल/मिलीग्राम प्रोटीन/मिनट।

साइटोसोल कण अंश

नियंत्रण 119±13 59+9

टीएफए, यूओएनएम 47+10* 153+14*

आरा सी, 25 µM 143+16 65+10

सेरामाइड, 1 µM 138+15 27+8*

सेरामाइड, यमकेएम 83+15* 15+7*

*आर<0,05 в сравнении с контролем (необработанные клетки). Данные 6 опытов.

पीकेसी अवरोधक चेलेरीग्रीन और बीआईएस-इंडोल-मेलीमाइड I ने एमडीआर\आरा सी, डोसेरूबिसिन और टीएफए की सक्रियता को रोका, लेकिन सेरामाइड को नहीं (चित्र 7)। इसलिए, एमडीआरएक्स जीन को शामिल करने के लिए पीकेसी का सक्रियण कोई पूर्वापेक्षा नहीं है। कुछ एजेंट (उदाहरण के लिए, सेरामवीडी) एसीएल-स्वतंत्र सिग्नलिंग तंत्र को सक्रिय करते हैं या एसीएल से दूर कार्य करते हैं।

चावल। 7. एसीएल हस्तक्षेप की परवाह किए बिना सेरामंड एमडीआर को सक्रिय करता है।

H9 कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए 25 μM C2-सेरामाइड से उपचारित किया गया। अकेले या पीकेसी अवरोधकों की उपस्थिति में। अवरोधकों की प्रभावशीलता का नियंत्रण 10 µM साइटोसार के संपर्क में आने पर एमडीआर सक्रियण को अवरुद्ध करना है।

ऐसे मैकेंगम्स माइटोजेन-सक्रिय प्रोटीन किनेसेस हो सकते हैं। एमडीआर को सक्रिय करने वाली सांद्रता पर डॉक्सोरूबिसिन और आरा सी ने जेएनके1 की गतिविधि को बढ़ाया, लेकिन ईआरके1/2 को नहीं, जबकि टीएफए ने ईआरके1/2 को सक्रिय किया, लेकिन जेएनके1 की गतिविधि में कोई बदलाव नहीं आया (चित्र 8)। इन आंकड़ों के अनुरूप, ERKI/2 अवरोधक PD98059 ने TFA द्वारा MDRI सक्रियण को समाप्त कर दिया, लेकिन कीमोथेरेपी द्वारा नहीं। इस प्रकार, माइटोजेन-सक्रिय प्रोटीन किनेसेस विभिन्न पदार्थों द्वारा उत्पन्न एमडीआर1-सक्रिय संकेतों के विचलन के स्तर के रूप में कार्य करते हैं।

डॉक्सोरूबिसिन और टीपीए द्वारा एमएपी किनेसेस का सक्रियण

चावल। 8. एमडीआर1 इंड्यूसर्स द्वारा एमएपी किनेसेस का विभेदक सक्रियण। H9 कोशिकाओं का उपचार डॉक्सोरूबिसिन और TFA से किया गया। ईआरके1/2 और जेएनके1 गतिविधियां सब्सट्रेट्स के इम्युनोप्रेवेरेशन और फॉस्फोराइलेशन के बाद निर्धारित की गईं। प्रेरकों के प्रभाव को अनुपचारित कोशिकाओं की तुलना में प्रत्येक किनेज़ के सक्रियण के स्तर के रूप में व्यक्त किया जाता है, जिसमें गतिविधि 1 पर सेट होती है। 3 प्रयोगों के डेटा को संक्षेप में प्रस्तुत किया गया है।

प्रतिलेखन कारक एनएफकेबी बाहरी उत्तेजनाओं के प्रति कोशिकाओं की तीव्र प्रतिक्रिया के लिए एक तंत्र है (कैरिन, 1995)। आराम करने वाली कोशिका में, यह प्रोटीन निरोधात्मक सबयूनिट के साथ जटिल रूप से साइटोप्लाज्म में स्थित होता है; एक्सपोज़र के जवाब में, एनएफकेबी कॉम्प्लेक्स से अलग हो जाता है, नाभिक में ले जाया जाता है और जीन नियामक क्षेत्रों को सक्रिय करता है जिनमें एनएफकेबी बाध्यकारी साइटें होती हैं। एनएफकेबी अवरोधक पीडीटीसी, टीपीसीएमसी और सैलिसिलेट्स ने साइटोसार, डॉक्सोरूबिसिन और टीएफए द्वारा एमडीआरएक्स सक्रियण को रोका (चित्र 9)। यह विशेष रूप से महत्वपूर्ण है कि क्लिनिक में व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली दवा सैलिसिलेप, तत्काल एमडीआरआई सक्रियण का एक प्रभावी अवरोधक बन जाती है। इसके अलावा, सोडियम सैलिसिलेट ने साइटोसार (छवि 10) द्वारा एमडीआरएक्स के दीर्घकालिक (7 दिनों तक) सक्रियण को रद्द कर दिया, इसकी पुष्टि की; एमडीआर सक्रियण के एक तंत्र के रूप में एनएफकेबी का महत्व।

चावल। 9. एनएफकेबी अवरोधकों द्वारा एमडीआर1 प्रेरण की रोकथाम। H9 कोशिकाओं को 16 घंटे के लिए 10 μM आरा C, 5 μM डॉक्सोरूबिसिन, या 10 nM TFA से उपचारित किया गया। अकेले या एनएफकेबी सक्रियण के अवरोधकों की उपस्थिति में। 4 प्रयोगों के परिणाम संक्षेप में प्रस्तुत किये गये हैं।

4, धो लें

एल हा एस - + +----

सैलिसिलेट - - + \ s 5 7

AGAS के बिना दिन

चावल। 10. एमडीआरआई प्रेरण के अवरोधक के रूप में सोडियम सैल्सिनलेट का दीर्घकालिक प्रभाव।

H9 कोशिकाओं को 48 घंटों तक 10 μM आरा सी से उपचारित किया गया। अकेले या सोडियम सैलिसिलेट की उपस्थिति में, ताजा माध्यम में पुनः निलंबित किया जाता है और अगले 1-7 दिनों के लिए ऊष्मायन किया जाता है।

NκB की भूमिका स्थापित करने का महत्व इस तथ्य में भी है कि यह तंत्र MYR 1 जीन के सक्रियण में साइटोप्लाज्मिक और परमाणु घटनाओं को "एकजुट" करता है। इस संबंध की पुष्टि जीन प्रमोटर के सक्रियण पर प्रयोगों से होती है; आयुष बहिर्जात नं.के.वी. ओटीकेवी सबयूनिट्स पी50 और पी65 के सहसंक्रमण के परिणामस्वरूप क्षेत्र -1202/+118 एनटी सक्रिय हो गया। प्रमोटर आयुष (चित्र 11)। हालाँकि, संकेतित क्षेत्र में, NaκB या समजात अनुक्रमों के साथ अंतःक्रिया के लिए विहित अनुक्रम 5"-COOIM^YUSS-3" (R-कोई भी प्यूरीन आधार, aL-कोई भी पाइरीमिडीन आधार) नहीं मिला। निम्नलिखित धारणाएँ संभव हैं: 1) NokV क्षेत्र -1202/+118 i.i. में अभी तक अज्ञात अनुक्रम के साथ इंटरैक्ट करता है; 2) एनकेबी एक मध्यवर्ती जीन (जीन) को सक्रिय करता है, जिसका उत्पाद -1202/+118 एनटी क्षेत्र से जुड़ता है। और MDR1 प्रमोटर को प्रेरित करता है।

चावल। 11. एनएफकेबी - एमडीआर प्रमोटर का एक्टिवेटर।

K562 कोशिकाओं को संकेतित निर्माणों और SV40 प्रमोटर के तहत रेनिला ल्यूसिफरेज़ रीई ले जाने वाले प्लास्मिड के साथ ट्रांसफ़ेक्ट किया गया था। जुगनू लूसिफ़ेरेज़ गतिविधि एमडीआरएक्स प्रमोटर के -1202/+118 एनटी क्षेत्र के प्रेरण को दर्शाती है (रेनिला ल्यूसिफ़ेरेज़ गतिविधि के लिए सामान्यीकृत एमडीएफ के रूप में चिह्नित)।

एमडीआर1 जीन प्रमोटर का विनियमन।

एल1-सक्रिय संकेतों को प्रसारित करने के मार्गों में एक सामान्य "अभिसरण बिंदु" होना चाहिए - जीन और एमआरएनए का नियामक क्षेत्र। एमडीआरआई प्रमोटर का अध्ययन करने के लिए, हमने ऐसी दवाओं का उपयोग किया जो क्रोमैटिन की भौतिक रासायनिक स्थिति को नियंत्रित करती हैं - हिस्टोन डीएसेटाइलेज़ अवरोधक ट्राइकोस्टैटिन ए और सोडियम ब्यूटायरेट, कीमोथेरेपी दवाओं के वर्गों के प्रतिनिधि जो सीधे जीन प्रतिलेखन को नियंत्रित करते हैं। इन एजेंटों द्वारा एमडीआर सक्रियण के तंत्र की तुलना एरा सी और डॉक्सोरूबिसिन से करना महत्वपूर्ण है, ऐसी दवाएं जिनके लिए क्रोमैटिन प्रत्यक्ष लक्ष्य नहीं है। ट्राइकोस्टैटिन ए और सोडियम ब्यूटिरेट H9, K562 और SW620 कोशिकाओं में अंतर्जात MDRX जीन को सक्रिय करते हैं। एमआरएनए में वृद्धि (चित्र 12, बायां पैनल) -1202M18 एनटी साइट से लिखित लूसिफ़ेरेज़ के सक्रियण के साथ हुई थी। एमडीआरआई प्रमोटर (चित्र 12, दायां पैनल)।

चावल। 12. हिस्टोन डीएसेटाइलेज़ अवरोधक अंतर्जात एमडीआरएक्स जीन और प्रमोटर (क्षणिक अभिकर्मक) को प्रेरित करते हैं।

स्लैश, H9, K562 और SW620 कोशिकाओं का 24 घंटे तक संकेतित दवाओं से उपचार किया गया। जीटीसीआर में एमडीआरएक्स एमआरएनए के स्तर का अध्ययन किया गया। दाएं: K562 कोशिकाओं को -1202/+P8 n.o.-luciferase निर्माण के साथ ट्रांसफ़ेक्ट किया गया था। 24 घंटे में. कोशिकाओं को 16 घंटे तक संकेतित दवाओं से उत्तेजित किया गया। 3 प्रयोगों के परिणाम प्रस्तुत हैं.

यह स्थापित किया गया है कि ट्राइकोस्टैटिन ए और ब्यूटायरेट उल्टे एचएएटी बॉक्स (जिन और स्कोल्टो, 1998) के साथ प्रतिलेखन कारक एनएफ-वाई की बातचीत के कारण एमडीआरआई को सक्रिय करते हैं, जो घटनाओं की श्रृंखला की पुष्टि करता है "प्रेरक-क्रोमैटिन संशोधन -> सक्रियण एमडीआरआई प्रमोटर” हालाँकि, बेल्ट ट्रांसफ़ेक्शन की शर्तों के तहत, प्लास्मिड पर क्रोमैटिन "अपूर्ण" रहता है।

एमडीआरआई प्रेरण में क्रोमैटिन की भूमिका का अध्ययन करने के लिए, SW620 कोशिकाओं को -1202/+118 एनटी फ़ायरफ़्लाई ल्यूसिफ़रेज़ निर्माण और नियो जीन ले जाने वाले प्लास्मिड के साथ ट्रांसफ़ेक्ट किया गया था; फिर कोशिकाओं को नियोमाइसिन की उपस्थिति में जीवित रहने के लिए चुना गया। चयनकर्ताओं में, साथ ही अस्थायी अभिकर्मक के दौरान, ट्राइकोस्टैटिन ए और सोडियम ब्यूटायरेट ने अंतर्जात एमडीआरआई एमआरएनए के संचय और क्षेत्र -1202/+118 i.i से प्रेरित प्रतिलेखन का कारण बना। इस जीन के प्रवर्तक. हिस्टोन डीएसेटाइलेज़ अवरोधकों द्वारा एमडीआरआई के सक्रियण को एक प्रतिलेखन अवरोधक ईटी743 द्वारा समाप्त कर दिया गया था। यह एमडीआरआई एमआरएनए की मात्रा में वृद्धि और क्रोमैटिन एसिटिलेशन के माध्यम से इस जीन के प्रमोटर की सक्रियता के बीच सीधा संबंध दिखाता है।

ये डेटा तब प्राप्त हुए जब कोशिकाओं को ऐसे एजेंटों के संपर्क में लाया गया जिन्होंने सीधे क्रोमैटिन की भौतिक रासायनिक स्थिति को बदल दिया। क्या तंत्र की हमेशा पहचान की जाती है, क्योंकि सभी कीमोथेरेपी दवाएं (और अन्य बाहरी उत्तेजनाएं) क्रोमैटिन के प्रत्यक्ष नियामक नहीं हैं? हमने देखा कि आरा सी और टीएफए से उपचारित कोशिकाओं में आधा जीवन: एमडीआरआई एमआरएनए बढ़ जाता है। चित्र 1 से पता चलता है कि टीएफए और ट्राइकोस्टैटिन ए एमडीआरआई प्रमोटर गतिविधि (प्रतिलेखन) के शक्तिशाली प्रेरक हैं, जबकि न तो आरा सी, न ही डॉक्सोरूबिसिन, न ही सेरामाइड ने प्रमोटर को सक्रिय किया या केवल कमजोर प्रभाव डाला।

चावल। 13. एमडीआरआई प्रमोटर इंडक्शन पर एमडीआर एक्टिवेटर्स का प्रभाव। K562 कोशिकाओं को -1202/+118 एनटी फ़ायरफ़्लाई ल्यूसिफ़रेज़ निर्माण के साथ ट्रांसफ़ेक्ट किया गया, समान भागों में विभाजित किया गया और 16 घंटों के लिए उत्तेजित किया गया। संकेतित औषधियाँ.

अनुपचारित कोशिकाओं में लूसिफ़ेरेज़ गतिविधि, सेल लाइसेट्स में कुल प्रोटीन सामग्री के लिए सामान्यीकृत, 1 पर सेट की गई थी। परिणाम 3 प्रयोगों में पुन: प्रस्तुत किए गए थे।

इन परिणामों से पता चलता है कि ए/III1 एमआरएनए के स्तर में वृद्धि प्रतिलेखन सक्रियण (टीएफए, ट्राइकोस्टैटिन ए) के परिणामस्वरूप और प्रमोटर (साइटोसार, डॉक्सोरूबिसिन, सेरामाइड) के प्रत्यक्ष प्रेरण के बिना होती है। बाद के मामले में, किसी को या तो एमआरएनए स्थिरीकरण के तंत्र, या एक मध्यवर्ती जीन के सक्रियण को पहचानना चाहिए, जिसका उत्पाद एमआईईएक्स प्रमोटर को प्रेरित करता है या प्रतिलेख को स्थिर करता है (बहिर्जात NaκB के साथ प्रयोग देखें)।

तालिका 2. सिग्नलिंग तंत्र के अवरोधक जो MF1 जीन tsntozprom के तत्काल सक्रियण को रोकते हैं।

ड्रग इंट्रासेल्युलर लक्ष्य निरोधात्मक एकाग्रता

चेलरीथ्रिन पीकेएस 10 µM

कैलफोस्टिन एस पीकेएस 1 µM

बीआईएस-इंडोलिल-

मेलीमाइड I पीकेएस 5 µM

VARTA/AM Ca2+ 5 µM

पीडीटीके संख्या केवी 5 µएम

जीएफकेएचएमके नं.केवी 25 μM

सोडियम सैलिसिलेट नंबर केवी 20 एमएम

युतिरिन №kV 10 मिमी

ज़िएस्टर उच्चतर प्लाज़्मैटिक

फैटी एसिड झिल्ली? यमकिग्रा/एमएल

1KTSHGOMISHSH B प्रतिलेख बढ़ाव? 500-1000 एनजी/एमएल

एक्स-एमैनिटिन आरएनए पोलीमरेज़ II 9 μg/एमएल

zhgeinascschsh 743 100 nM स्थापित नहीं है

तालिका 2 सिग्नल ट्रांसडक्शन अवरोधकों के समूहों का प्रतिनिधित्व करने वाली औषधीय दवाओं को दिखाती है जो H9 और K562 ल्यूकेमिया कोशिकाओं में साइगोसार या डॉक्सोरूबिसिन द्वारा एमडीआर सक्रियण को रोकती हैं।

पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर पर काबू पाना: प्लाज्मा झिल्ली लक्ष्य

साइटोटॉक्सिक क्रिया.

इस प्रकार, पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर एक कोशिका विभाजन के दौरान काफी तेजी से बन सकता है, और जीवित कोशिकाओं की पीढ़ियों तक बना रहता है। कई उत्तेजनाएं एमडीआर के प्रेरक हैं, जिनमें विभिन्न रासायनिक समूहों की एंटीट्यूमर दवाओं का नैदानिक ​​​​उपयोग भी शामिल है। पीजीपी उन तंत्रों की पहचान है जो क्रमादेशित मृत्यु (एपोप्टो) की सक्रियता को रोकते हैं (जॉनस्टोन एट अल।, 1999)। इसलिए, एक ट्यूमर जो मुख्य रूप से एपोप्टोजेनिक उत्तेजनाओं के लिए प्रतिरोधी है और उपचार के जवाब में तेजी से एमडीआर प्राप्त करता है, चिकित्सा के लिए एक विशेष चुनौती बन जाता है .बहुक्रियात्मक प्रतिरोध पर काबू पाने के लिए क्या रणनीतियाँ हैं?

प्रतिरक्षा प्रभावकों के प्रभाव में ऐसी कोशिकाओं की मृत्यु का अध्ययन किया गया है। इस दृष्टिकोण के लिए पूर्वापेक्षा चूहों के टीकाकरण के दौरान जमा होने वाले स्प्लेनोसाइट्स द्वारा टीका लगाए गए मायलोमा की अस्वीकृति पर डेटा थी; वही ट्यूमर, साइटोकिन्स को व्यक्त करने के लिए संशोधित (टर्नर एट अल।, 1996)। चूँकि MPC1 IDoxlO-l और MPC1 1Dox10-2 सबलाइन के गुण समान निकले, MPCllDoxlO-1 कोशिकाओं का विश्लेषण नीचे किया गया है।

चयनकर्ताओं में एमडीआर फेनोटाइप को एमडीआरवीओ जीन की अतिअभिव्यक्ति, कैल्सीन परिवहन में कमी, और डॉक्सोरूबिसिन और विन्क्रिस्टिन, पीजीपी सबस्ट्रेट्स के प्रतिरोध की विशेषता थी। मायलोल टीकाकरण के प्रति प्रतिरक्षा बनाने के लिए, MPC11 और MPCI IDoxlO-l कोशिकाओं को GM-KS IL-12 साइटोकिन्स के सीडीएनए के साथ ट्रांसफ़ेक्ट किया गया। टीका लगाए गए कोशिकाओं की संख्या न्यूनतम 100% ट्यूमर-नाशक खुराक से पांच गुना अधिक थी।

तालिका 3. नियंत्रण में ट्यूमर अस्वीकृति दर और

प्रतिरक्षित जानवर.

चूहे ग्राफ्टिंग

MPC11 MPClDoxlO-1

बरकरार 0/15* 0/10

MPC11 कोशिकाओं के साथ टीकाकरण:

विकिरणित कोशिकाएँ 1/15 0/10

■एम-सीएसएफ/आईएल-12-ट्रांसफ़ेक्ट कोशिकाएं 15/15** 9/10**

MPC1 Xox10-1 कोशिकाओं के साथ टीकाकरण:

विकिरणित कोशिकाएँ 0/15 0/10

"एम-सीएसएफ/आईएल-12-ट्रांसफ़ेक्ट कोशिकाएं 9/10** 10/10**

ट्यूमर अस्वीकृति दर: अंश में - उन चूहों की संख्या जिनमें ट्यूमर विकसित नहीं हुआ; 1 प्रतिस्थापन में - टीका लगाए गए चूहों की कुल संख्या, **पी<0,001 по критерию х2 в сравнении с еиммунизированными (интактными и вакцинированными только облученными клетками) ивотными.

तालिका 3 से पता चलता है कि MPC11 और MPC1 IDoxIO कोशिकाएं ट्यूमर पैदा करने वाली हैं: 100% गैर-प्रतिरक्षित जानवरों में, ट्यूमर संबंधित कोशिकाओं के टीकाकरण के 8-10 दिनों के बाद दिखाई देते हैं। हालाँकि, साइटोकिन-व्यक्त कोशिकाओं से प्रतिरक्षित चूहों में, ट्यूमर दिखाई नहीं दिए (एमपीसी11 के साथ टीकाकरण) या दुर्लभ थे (प्रतिरोधी सबलाइन के साथ टीकाकरण)। एंटीट्यूमर प्रतिरक्षा लंबे समय तक चलने वाली थी: ताजा कोशिकाओं के टीकाकरण के बाद 5 सप्ताह के भीतर ट्यूमर प्रकट नहीं हुआ। एमपीसी 11 कोशिकाओं और प्रतिरोधी सबलाइन से प्रतिरक्षित समूहों के बीच ग्राफ्ट अस्वीकृति की घटना समान थी। ये परिणाम विवो प्रयोगों में पाए गए कारकों के संपर्क में आने पर घातक प्रतिरोधी कोशिकाओं की मृत्यु की संभावना का संकेत देते हैं।

ऐसा कारक साइटोलिटिक व्यक्त कोशिकाओं के साथ टीकाकरण के जवाब में प्लीहा में उत्पन्न सीटीएल है। चित्र में. चित्र 14 से पता चलता है कि जीएम-सीएसएफ- और आईएल-12-व्यक्त एमपीसी 11 कोशिकाओं से प्रतिरक्षित चूहों से स्प्लेनोसाइट्स ने एमपीसी 11 और एमपीसीएलडीओएक्सएलओ-1 लक्ष्य कोशिकाओं को लगभग समान दक्षता (चित्रा 14) के साथ लाइस किया।

-er-MPCU/MPCJlDoilO

एमआरएस11/एमआरएसआई

प्रभावकारक.लक्ष्य

चावल। 14. पैतृक और पीजीपी पॉजिटिव कोशिकाओं का सीटीएल लसीका।

अंश: टीकाकरण के लिए कोशिकाएँ, हर: ग्राफ्ट की जाने वाली कोशिकाएँ।

नतीजतन, साइटोकाइन-एक्सप्रेसिंग सेल वैक्सीन से टीका लगाए गए जानवरों में एंटीट्यूमर प्रतिरक्षा सीटीएल की तार्किक कार्रवाई के लिए एमडीआर कोशिकाओं की संवेदनशीलता से जुड़ी होती है।

सीटीएल की हत्या की गतिविधि इन कोशिकाओं द्वारा सीडी95/फास लिगैंड और/या ग्रैनजाइम बी-पेरफोरिन टेंडेम (वेटके, 1994) के स्राव के कारण होती है। अध्ययन के तहत प्रणाली में इनमें से कौन सा तंत्र कार्य करता है, इस प्रश्न को हल करने के लिए, फास लिगैंड की उपस्थिति में कोशिका अस्तित्व का अध्ययन किया गया। एमपीसी11 और एमपीसी1 शॉक्सवाई-1 कोशिकाएं फास लिगैंड की अपेक्षाकृत उच्च सांद्रता के लिए भी प्रतिरोधी साबित हुईं। इस प्रकार, ग्रैनजाइम बी/पेरफोरिन को प्रतिरक्षा यूटीजे की साइटोटॉक्सिक कार्रवाई के लिए एक उम्मीदवार तंत्र माना जाना चाहिए। दरअसल, पेर्फोरिन प्रोसेसिंग के अवरोधक कॉन्कैनामाइसिन ए के साथ इम्यूनो-सीटीएल के प्रीइंक्यूबेशन ने लक्ष्य कोशिकाओं एमपीसीएलडीओएक्सएल 0-1 (छवि 15) के लसीका को कम कर दिया।

एमडीआर पर काबू पाने के तरीके खोजने के लिए, यह महत्वपूर्ण है कि एमजेबी के साथ सबलाइन्स पेर्फोरिन द्वारा प्लाज्मा झिल्ली की अखंडता में व्यवधान के कारण साइटोटॉक्सिक प्रभावों के प्रति संवेदनशीलता बनाए रखें। पेर्फोरिन द्वारा निर्मित प्लाज्मा झिल्ली में छिद्रों के माध्यम से ग्रैनजाइम बी के कोशिका में प्रवेश से एफेग्रिन कैस्पैसेस सक्रिय हो जाएगा। Dachshund

हत्यारा अग्रानुक्रम - एक एजेंट की एक साथ कार्रवाई जो बाहरी झिल्ली और प्रोटीज में छिद्र बनाती है - उन कोशिकाओं की मृत्यु का कारण बनना संभव बनाती है जो कई बाहरी प्रभावों के प्रति प्रतिरोधी हैं। इसलिए, प्लाज्मा झिल्ली प्रतिरोधी कोशिकाओं को खत्म करने के उद्देश्य से चिकित्सा के लिए एक महत्वपूर्ण लक्ष्य है।

टी; के के साथ) ओ ओ ओ

एन (ओ एन ii) ओ ओ

प्रभावकारक: लक्ष्य

चावल। 15. ग्रैन्ज़एनएम बी/पीएसआरएफओरिन - सीटीएल-मध्यस्थता मृत्यु का तंत्र। कॉनकैनामाइसिन ए (खुली पट्टियाँ) एमपीसी1 एक्सओएक्सआई-1 कोशिकाओं के सीटीएल-मध्यस्थता लसीका को कम करती है। डार्क कॉलम कॉनकैनामाइसिन ए के साथ प्रीइंक्यूबेशन के बिना सीटीएल लक्ष्यों के विश्लेषण का संकेत देते हैं। 3 प्रतिनिधि प्रयोगों में से एक दिखाया गया है।

एमडीआर पर काबू पाने में ज़र्सचिड और मुक्त ऑक्सीजन रेडिकल। यदि प्लाज़्मा झिल्ली वांछित लक्ष्य है, तो इसकी क्षति कैसे हो? यह विशेष रूप से वांछनीय है कि ऐसा प्रभाव कई कैंसर रोधी दवाओं के लिए सामान्य अभिनेता द्वारा डाला जाएगा। इन "मध्यस्थों" में से एक ceramvd है। एमडीआर के थ्रियोडोलाइजेशन के लिए सेरामाइड को प्रभावी बनाने के लिए, इसे कम से कम दो आवश्यकताओं को पूरा करना होगा: ;) पीजीपी द्वारा सेल से बाहर नहीं ले जाया जाना चाहिए; 2) मृत्यु मार्गों को ट्रिगर करें जो प्रतिरोधी कोशिकाओं में कार्य करते हैं। क्या एमडीआर के प्रमुख तंत्र, झिल्ली ट्रांसपोर्टर को "बायपास" करना उन कोशिकाओं की मृत्यु का कारण बनने के लिए पर्याप्त है जो कई प्रभावों के प्रति प्रतिरोधी हैं?

सेरामाइड का परिवहन P-gpicoprotein द्वारा नहीं किया जाता है।

चूंकि सेरामाइड विभिन्न प्रकार की कीमोथेरेपी दवाओं की प्रतिक्रिया में जमा होता है, इसलिए हमने जांच की कि क्या यह मेटाबोलाइट इन स्थितियों को पूरा करता है। यह पता चला कि पैतृक K562 कोशिकाओं और उनके Pgp-पॉजिटिव सबलाइन K5621/89 में सेरामाइड संचय की गतिशीलता लगभग समान है (चित्र 16)। उसी समय, K562^B9 कोशिकाओं ने K562 कोशिकाओं (पीजीपी-मध्यस्थता परिवहन का नियंत्रण) की तुलना में काफी कम रोडामाइन 123 जमा किया। नतीजतन, सेरामाइड पीजीपी के लिए एक परिवहन सब्सट्रेट नहीं है।

8000 6000 4000 2000 0

0 0.05 0.2 1 5 C5-BOO!RU-सेरामाइड

चावल। 16. पीजीपी शॉर्ट-चेन सेरामाइड का परिवहन नहीं करता है। K562 और K5621/59 कोशिकाओं को 30 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया गया। C5-सेरामाइड के साथ फ्लोरोक्रोम VSY1RU (शीर्ष पैनल) या रोडामाइन (III)123 (निचला पैनल) के साथ संयुग्मित। फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग करके सेल ल्यूमिनसेंस का अध्ययन किया गया। 3 प्रयोगों से डेटा.

K562 और K5621/89 कोशिकाओं के साथ-साथ जोड़े के लिए सिंथेटिक (C2) और प्राकृतिक (Ci) सेरामाइड्स की साइटोटॉक्सिसिटी में कोई अंतर नहीं था।

पैतृक कोशिकाएँ और चयनकर्ता: MCP-7 और MCP-7Ac1g, KV-3-1 और KV-8-5-11। इस प्रकार, सेरामाइड समान दक्षता के साथ पीजीपी-नकारात्मक और पीजीपी-पॉजिटिव कोशिकाओं की मृत्यु का कारण बनता है।

प्लाज्मा झिल्ली की अखंडता के विघटन को नहीं रोकता है।

सेरामाइड के प्रभाव में K5621/59 कोशिकाओं की मृत्यु के तंत्र की पहचान करने के लिए, निम्नलिखित मापदंडों का अध्ययन किया गया: कैसपेज़ 9 और 3 की सक्रियता, पॉली-एडीपी-राइबोस पोलीमरेज़ (PAKP) का दरार, इंटरन्यूक्लियोसोमल डीएनए गिरावट, फॉस्फेटिडिलसेरिन का इंट्रामेम्ब्रेन ट्रांसलोकेशन (एनेक्सिन वी बाइंडिंग द्वारा), ट्रांसमेम्ब्रेन इलेक्ट्रिकल माइटोकॉन्ड्रियल क्षमता और प्लाज्मा झिल्ली की अखंडता (कोशिकाओं में पीआई को शामिल करके)। चित्र में. 17 दिखाता है कि 24 घंटे तक। सेरामाइड के संपर्क में आने से मरने वाली कोशिकाओं का प्रतिशत 37+4% तक पहुंच गया। विशेष रूप से महत्वपूर्ण "डबल पॉजिटिव" (एनेक्सिन-पीआई 4) कोशिकाओं की उपस्थिति थी, जिसका अर्थ है कि K562LB9 कोशिकाओं में, सेरामाइड काफी पहले प्लाज्मा झिल्ली (नेक्रोसिस या देर से एपोप्टोसिस) की पारगम्यता में व्यवधान का कारण बनता है। उसी समय, शास्त्रीय एपोप्टोसिस की विशेषता, कैसपेज़ 3 की सक्रियता का पता नहीं चला; पीएएस प्रोटियोलिसिस एक देर से होने वाली घटना (एक्सपोज़र के 48 घंटे) के रूप में सामने आई।

K5621/B9 कोशिकाओं पर सेरामाइड का प्रभाव व्यावहारिक रूप से माइटोकॉन्ड्रिया की ट्रांसमेम्ब्रेन क्षमता में बदलाव के साथ नहीं था: मरने वाली कोशिकाओं में यह संकेतक अनुपचारित कोशिकाओं के संबंधित मूल्य से भिन्न नहीं था। इंटरन्यूक्लियोसोमल डीएनए विखंडन भी मृत्यु का एक प्रमुख संकेत नहीं था: केवल 11% घटनाएं उप-01 क्षेत्र (हाइपोडिप्लोइड कोशिकाओं) में हुईं, जबकि मरने वाली कोशिकाओं का प्रतिशत (एनेक्सिन+/पीआई, एनेक्सिन7पीआई+ और डबल पॉजिटिव का योग) समान अवधि का एक्सपोज़र 64 + 4% था। इस प्रकार, सेरामाइड के प्रभाव में K562LB9 कोशिकाओं की मृत्यु का सबसे महत्वपूर्ण संकेत प्लाज्मा झिल्ली की अखंडता का प्रारंभिक उल्लंघन है - नेक्रोसिस।

सेरामाइड के साथ समय (घंटे)।

■ K562, एनेक्सिन+ □ K562, एनेक्सिन+PI+ BK562i/S9,nH+

IK562.PI+ V K562i/S9,AHHeKCHH+ ■ K562|789,Annexin+PI+

चावल। 17. सेरामाइड के प्रभाव में K562 और K562L/S9 कोशिकाओं की मृत्यु के संकेतक। संकेतित अवधि के लिए कोशिकाओं को 25 μM C2-सेरामाइड के साथ इलाज किया गया था। वी-पॉजिटिव, प्रोपीडियम आयोडाइड (पीआई +) पॉजिटिव और "डबल पॉजिटिव" (एनेक्सिन + पीआई +) कोशिकाओं के एनेक्सेशन का प्रतिशत फ्लो साइटोमेट्री द्वारा निर्धारित किया गया था।

K562 कोशिकाओं में, p53 कार्य नहीं करता है, और काइमेरिक प्रोटीन काइनेज Br/Ab1 व्यक्त किया जाता है, अर्थात। इन कोशिकाओं में एपोप्टोसिस के प्रतिरोध के आणविक निर्धारक होते हैं। इसलिए, K562i/S9 सबलाइन को प्लियोट्रोपिक प्रतिरोध का एक मॉडल माना जा सकता है, जहां पीजीपी तंत्रों में से एक है। सेरामाइड की मृत्यु का कारण बनने की क्षमता पर डेटा और भी अधिक महत्वपूर्ण है! ऐसी कोशिकाओं का परिगलन तंत्र द्वारा।

मेटाबोलाइट्स जो नेक्रोसिस का कारण बन सकते हैं वे मुक्त ऑक्सीजन रेडिकल हो सकते हैं। K562/iS9 कोशिकाओं की सेरामाइड-प्रेरित मृत्यु में उनकी भूमिका स्थापित करने के लिए, एक ऑक्सीजन रेडिकल चेलेटर, एन एसिटाइलसिस्टीन (एनएसी) की उपस्थिति में सेरामाइड की साइटोटॉक्सिसिटी का अध्ययन किया गया और उपचारित कोशिकाओं में ऑक्सीजन रेडिकल्स के गठन की दर का अध्ययन किया गया। सेरामाइड का अध्ययन किया गया। बी चित्र 18 से पता चलता है कि एनएसी ने सेरामाइड की साइटोटोक्सिसिटी को समाप्त कर दिया है। इस प्रकार, सेरामाइड के संपर्क में आने पर मुक्त ऑक्सीजन प्रतिरोधी कोशिकाओं की मृत्यु में निर्णायक भूमिका निभाती है। चित्र 19 निर्भरता दर्शाता है

सेरामाइड की क्रिया के समय के आधार पर ओसीपीओए से भरी कोशिकाओं की प्रतिदीप्ति और

"नियंत्रण एजेंट - हाइड्रोजन पेरोक्साइड, O2 दाता।" H2O2 तेजी से पैदा हुआ

20 मिनट बाद वही. - कोशिका प्रतिदीप्ति में वृद्धि. सेरामाइड के कारण

विपरीत प्रभाव: 15 मिनट बाद. प्रभाव तीव्र देखा गया - 1.5 तक

रो - चमक में कमी. केवल 24 घंटे तक. प्रसंस्करण तीव्रता

सेल प्रतिदीप्ति इस सूचक के स्तर पर वापस आ गई

उपचारित कोशिकाएं और 48-72 घंटे तक बढ़ गईं। प्रभाव जब राशि

वहां पहले से ही बहुत सारी बढ़ती हुई कोशिकाएं मौजूद थीं (चित्र 17)। इसलिए, संसाधित में

रैमाइड कोशिकाएं शुरू में कमी और ऑक्सीकरण से गुजरती हैं

बाद में होता है, संभवतः यूट्रीसेलुलर सब्सट्रेट्स की बहाली के लिए संसाधनों की कमी के परिणामस्वरूप।

चित्र 18. NAC K562i/S9 कोशिका मृत्यु को रोकता है। कोशिकाओं को 5 एमएम एनएसी के बिना या उसके साथ सीआर-सेरामाइड के साथ इलाज किया गया था। अकेले एनएसी का सेल व्यवहार्यता पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा।

चावल। 19. सेरामाइड के प्रभाव में K562|/89 कोशिकाओं में ऑक्सीकरण। संकेतित समय अंतराल के लिए कोशिकाओं को 25 μM C2-सेरामाइड से उपचारित किया गया। ई>एसजीओए से भरी कोशिकाओं के प्रतिदीप्ति में परिवर्तन द्वारा इंट्रासेल्युलर ऑक्सीकरण का अध्ययन किया गया था। H2Og का उपयोग "ऑक्सीजन विस्फोट" नियंत्रण के रूप में किया गया था। 3 प्रयोगों के परिणामों का सारांश दिया गया है।

नतीजों की चर्चा

MOI1 जीन के सक्रियण के तंत्र का विश्लेषण हमें निम्नलिखित बताने की अनुमति देता है: 1) AUM जीन और MDR फेनोटाइप कई पदार्थों के लिए कोशिकाओं के अल्पकालिक जोखिम से प्रेरित हो सकते हैं। एमबीजे\ की अतिअभिव्यक्ति और पीजीपी का संचय उन कोशिकाओं में पाया जाता है जो समाप्ति के बाद जीवित रहती हैं! ज़ेनोबायोटिक प्रभाव. इस प्रकार, MYR\ जीन का एपिजेनेटिक सक्रियण एक स्थिर एमडीआर फेनोटाइप प्रदान करता है।

2) एमडीआर का तत्काल गठन सामान्य सेल सिग्नलिंग तंत्र द्वारा नियंत्रित किया जाता है। दरअसल, फॉस्फोलिपेज़ की सक्रियता, इंट्रासेल्युलर Ca2+ का एकत्रीकरण, NaκB का प्रेरण और तनाव-सक्रिय प्रोटीन किनेसेस का कैस्केड ऐसे तंत्र हैं जो तनाव के प्रति कोशिका प्रतिक्रिया सुनिश्चित करते हैं। इसके अलावा, प्रतिलेखन कारक और कार्यात्मक रूप से सक्रिय साइटें

MDR1 जीन का ipoMOTope, MDR के सक्रियण के लिए महत्वपूर्ण है, इस जीन के लिए अद्वितीय नहीं है: ■JF-Y, CCAAT बॉक्स और क्रोमैटिन-मॉड्यूलेटिंग सिग्नल अधिकांश यूकेरियोटिक जीन के प्रतिलेखन के नियमन के लिए महत्वपूर्ण हैं। यह, जाहिरा तौर पर, एमडीआरएक्स जीन की उच्च प्रेरकता की व्याख्या करता है: यह जीन विभिन्न हिस्टोजेनेसिस की कोशिकाओं में पैर उत्तेजनाओं द्वारा सक्रिय होता है। बदले में, सामान्य तनाव-कार्यान्वयन तंत्र द्वारा एमडीआरएक्स का विनियमन बाहरी प्रभावों के लिए कोशिका की अन्य प्रतिक्रियाओं के साथ-साथ एमडीआर सक्रियण के इवियोलॉजिकल महत्व पर जोर देता है।

3) एमडीआर एसएचएस 20) के सक्रियण तंत्र की बहुलता और विनिमेयता इस फेनोटाइप के विनियमन की बहु-स्तरीय प्रकृति द्वारा निर्धारित की जाती है। और इनमें से प्रत्येक स्तर सेल को "चुनने" का अवसर देता है कि एमडीआर को सक्रिय करना है या नहीं। सबसे पहले, चुनाव उत्तेजना की प्रकृति से तय होता है (विभिन्न तत्व विभिन्न तंत्रों के माध्यम से कार्य करते हैं)। दूसरे, विशिष्ट तंत्र कुछ सिग्नलिंग अणुओं की उपस्थिति और इस प्रकार के नेटवर्क में उनकी बातचीत पर निर्भर करता है। तीसरा, चुनाव वास्तविक अनुलेखन तंत्र (डीआरआई प्रमोटर क्षेत्र में क्रोमैटिन की स्थिति) के स्तर पर होता है। इन विचारों से , एमडीआरएक्स पर उच्च प्रेरकता के कारण (सिग्नलिंग और ट्रांसक्रिप्शनल तंत्र की व्यापक विनिमेयता और ओवरलैप कई उत्तेजनाओं और विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं में प्रेरण सुनिश्चित करता है), और प्रेरण की कमी के मामले हर उत्तेजना से प्रेरित नहीं होते हैं और हर प्रयोगात्मक में नहीं होते हैं प्रणाली)।

एमडीआरएक्स जीन (साइटोसार और टीएफए के उदाहरण का उपयोग करके) के तत्काल सक्रियण की योजना चित्र 20 में दिखाई गई है।

विलंबित घटना के रूप में एमडीआरएक्स प्रेरण की अवधारणा, जिसमें पहले टोरो एमडीआरएक्स के प्रेरण के लिए आवश्यक प्रोटीन की सक्रियता शामिल है, एमडीआर के एपिजेनेटिक सक्रियण की तस्वीर को और जटिल बनाती है।<ой каскадный механизм может быть главным или дополнительным,

कीमोथेरेपी और टीपीए द्वारा MY1 का विनियमन

नियोमाइसिन, 1173122

प्रतिलेखन की सक्रियता, एमआरएनए का स्थिरीकरण

चावल। 20. MY 1 जीन के तत्काल सक्रियण के तंत्र।

प्रतिलेखन की दर को तीव्र करना या बनाए रखना। किसी कोशिका द्वारा एमडीआर को प्रेरित करने के विभिन्न तरीकों को चुनने की संभावना - प्रत्यक्ष (मध्यवर्ती जीनों की सक्रियता के बिना) और/या अन्य जीनों के प्रेरण द्वारा मध्यस्थता - एमडीआर के विकास को रोकना और भी कठिन बना देती है।

जीन एल के प्रतिलेखन का सक्रियण)/? 1 एमडीआर के विकास के लिए एकमात्र तंत्र नहीं है। एपिजेनेटिक विनियमन का एक अन्य महत्वपूर्ण घटक MOK 1 nRNA का स्थिरीकरण हो सकता है। यह संभव है कि, प्रतिलेखन प्रेरण और MOK 1 mRNA के स्थिरीकरण के बीच संतुलन के संबंध में, विभिन्न प्रेरकों के प्रभाव में और विभिन्न कोशिकाओं में एमडीआर सक्रियण के तंत्र प्रकार भी भिन्न-भिन्न हैं। यह धारणा MyACh जीन की अभिव्यक्ति के बहु-स्तरीय विनियमन की अवधारणा के अनुरूप है (चित्र 19)।

4) एम)एल1-सक्रिय संकेतों के संचरण के तंत्र स्थापित करके एमडीआर की लक्षित रोकथाम संभव है। क्लिनिक में एमडीआर के विकास को रोकने की आवश्यकता की पुष्टि एमडीआर के विकास और दवाओं की साइटोटोक्सिसिटी के बीच संबंध से होती है। दरअसल, विषाक्त पदार्थों से उपचारित कोशिकाओं में एमआरएनए/εγ1 का स्तर विषाक्त पदार्थों की बढ़ती सांद्रता के साथ बढ़ता है। नतीजतन, उच्च-खुराक कीमोथेरेपी आहार (उपचार की प्रभावशीलता बढ़ाने के लिए उचित) के उपयोग से जीवित कोशिकाओं में एमडीआर का विकास हो सकता है। ट्यूमर के पूर्ण पुनर्जीवन के लिए आवश्यक दवाओं की सांद्रता रोगी के लिए स्वीकार्य से अधिक हो सकती है, जो कीमोथेरेपी में खुराक वृद्धि की सीमा निर्धारित करती है। ऊपर पहचाने गए इंट्रासेल्युलर सिग्नलिंग विरोधी पारंपरिक एंटीकैंसर दवाओं के साथ संयोजन में उपयोग किए जाने वाले भविष्य के ड्रग एमडीआर ब्लॉकर्स के लिए प्रोटोटाइप के रूप में काम कर सकते हैं। इस प्रकार, एमडीआर के तत्काल विकास को रोकने से इस चिकित्सकीय प्रतिकूल घटना पर काबू पाने की संभावनाओं का विस्तार होता है।

स्थापित एमडीआर पर काबू पाने के लिए क्या उपाय हैं? प्रतिरोधी कोशिकाओं में "असुरक्षित" लक्ष्यों में से एक प्लाज्मा झिल्ली हो सकता है। इसकी अखंडता का उल्लंघन प्रतिरोधी कोशिकाओं की मृत्यु का कारण बनता है: पीजीपी नेक्रोसिस को प्रेरित करने वाले प्रभावों से मृत्यु को नहीं रोकता है। एक चिकित्सीय रूप से महत्वपूर्ण सेलुलर संरचना की पहचान की गई है जिसे लक्षित किया जाना चाहिए। जाहिर है, मेम्ब्रेनोलिटिक एजेंट गैर-ट्यूमर सहित ऊतकों में अनियंत्रित विषाक्तता के कारण अनुपयुक्त हैं। ऐसे एजेंटों को ढूंढना आवश्यक है जो पीजीपी बाधा को दूर करते हैं और प्लाज्मा झिल्ली को नुकसान पहुंचाते हैं, यानी। नेक्रोसिस को सक्रिय करने के लिए पर्याप्त दवा की इंट्रासेल्युलर सांद्रता बनाएं। एक पदार्थ जो इस स्थिति को संतुष्ट करता है वह सेरामाइड हो सकता है, एक स्फिंगोलिपिड जो एंटीट्यूमर दवाओं सहित कई उत्तेजनाओं के जवाब में कोशिका में जमा होता है। सेरामाइड को पीजीपी द्वारा परिवहन नहीं किया जाता है, जो यह सुनिश्चित करता है कि प्रतिरोधी कोशिकाओं में इस मेटाबोलाइट की एकाग्रता मृत्यु को प्रेरित करने के लिए पर्याप्त है।

प्रतिरोधी कोशिकाओं में सेरामाइड की विषाक्तता का मतलब है कि इन कोशिकाओं में सेरामाइड संचय के दूरस्थ सिग्नलिंग मार्ग पीजीपी या एमडीआर चयन से जुड़े अन्य तंत्रों द्वारा अवरुद्ध नहीं होते हैं। इसलिए, प्रतिरोध पर काबू पाने में प्रतिरोधी कोशिकाओं में सेरामाइड (और संभवतः अन्य विषाक्त मेटाबोलाइट्स) को जमा करने के तरीके ढूंढना शामिल होना चाहिए। सेरामाइड की साइटोटोक्सिसिटी के लिए केवोले या उनके एनालॉग्स की आवश्यकता होती है - फॉस्फोलिपिड्स और प्रोटीन से भरपूर सबमब्रेनर संरचनाएं और एमडीआर के लिए चयन के दौरान जमा होती हैं (ला\ एट अल।, 1998)। महत्वपूर्ण रूप से, एमडीआर के लिए चयन के साथ-साथ कैंसररोधी चिकित्सा के लिए कोशिका आणविक लक्ष्यों में वृद्धि भी हो सकती है।

ऑक्सीजन के मुक्त रूप सेरामाइड-प्रेरित मृत्यु का एक आवश्यक तंत्र प्रतीत होते हैं। यह एमडीआर कोशिकाओं के अस्तित्व में माइटोकॉन्ड्रिया के महत्व पर सवाल उठाता है। माइटोकॉन्ड्रियल मार्ग

इफ़ेक्टर कैसपेज़ को सक्रिय करने के लिए अतिरिक्त सिग्नल प्रसारित करता है। ■ लिटोकॉन्ड्रियल "लूप" ऐसे संकेतों की क्षमता में एक शक्तिशाली कारक है; "माइटोकॉन्ड्रिया की विद्युत क्षमता में गिरावट और विशेष रूप से प्लाज्मा में साइटोक्रोम सी की रिहाई मृत्यु प्रक्रिया की अपरिवर्तनीयता सुनिश्चित करती है। चूँकि यह अनुमान लगाना संभव नहीं है कि प्रतिरोध के लिए चयन एक या किसी अन्य मृत्यु पथ को निष्क्रिय करने से जुड़ा होगा या नहीं, यह महत्वपूर्ण है कि एमडीआर कोशिकाओं में केवल एक "विश्वसनीय" कैस्केड ही क्रियाशील रहे।

हमारे परिणाम पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर के साथ सेल लाइनों में ऑक्सीजन एडिकल्स के प्रति संवेदनशीलता का संकेत देते हैं। यह माना जा सकता है कि, हालांकि दवा प्रतिरोध के लिए प्राथमिक प्रतिरोध और चयन कई तंत्रों द्वारा निर्धारित किया जाता है, फिर भी इंट्रासेल्युलर ऑक्सीकरण को बढ़ाकर बहुक्रियात्मक प्रतिरोध पर काबू पाना संभव है। मुक्त ऑक्सीजन तुरंत कई ऑक्सीकरण प्रतिक्रियाओं में प्रवेश करती है, जिससे कोशिका के जीवन के लिए महत्वपूर्ण संरचनाओं - डीएनए और झिल्ली को नुकसान होता है। उपरोक्त प्रयोगों में, ऑक्सीजन रेडिकल्स के संपर्क में आने पर नेक्रोसिस सफ़ेद होने की प्रमुख विधि बन गई। इसका मतलब यह नहीं है कि नेक्रोसिस ऑक्सीजन के मुक्त रूपों से प्रेरित मृत्यु का एकमात्र तरीका है। किसी विशिष्ट स्थिति में, इस या किसी अन्य प्रकार की मृत्यु की प्रबलता स्थापित की जानी चाहिए; एपोप्टोसिस और नेक्रोसिस के बीच मानक अंतर मृत्यु के विभिन्न तंत्रों की विशेषता नहीं बताता है। यह मूल्यांकन यह निर्धारित करने के लिए उपयोगी है कि क्या झिल्ली को क्षति प्राथमिक है या क्या इस प्रक्रिया में देरी हो रही है। हालाँकि, किसी भी स्थिति में प्लाज्मा झिल्ली की पारगम्यता का आकलन करना महत्वपूर्ण लगता है: झिल्ली की अखंडता का उल्लंघन अपरिवर्तनीयता का कारण बनता है। इसलिए, मृत्यु का नेक्रोटिक घटक एमडीआर कोशिकाओं की पीढ़ी के लिए महत्वपूर्ण है, क्योंकि पीजीपी एजेंटों से कोशिकाओं की रक्षा कर सकता है जो एपोप्टोसिस को प्रेरित करते हैं, लेकिन उन पदार्थों से नहीं जो एपोप्टोसिस को प्रेरित करते हैं। परिगलन का कारण बनता है।

आखिरी परिस्थिति आश्चर्यजनक नहीं है. प्लाज्मा झिल्ली के इस प्रोटीन के कामकाज के लिए, इसकी अखंडता के कारण इसे एक निश्चित भौतिक-रासायनिक अवस्था की आवश्यकता होती है। परिगलन के साथ, कोशिका को गंभीर क्षति होगी, मुख्य रूप से पानी और आयनों के परिवहन में व्यवधान के कारण। एपोप्टोटिक कैस्केड के विपरीत, ये क्षति लगभग किसी भी सेलुलर संरचना को प्रभावित करेगी, जो सब्सट्रेट्स के अनुक्रमिक दरार में व्यक्त की जाती है - एक ऊर्जा-निर्भर प्रक्रिया जिसमें सेल में मल्टीकंपोनेंट प्रोटीन-लिपिड कॉम्प्लेक्स का गठन और इंटरैक्शन की सख्त विशिष्टता शामिल है सबस्ट्रेट्स के साथ कैसपेज़ का। ऐसे कैस्केड के एक या अधिक लिंक को अवरुद्ध करना (उदाहरण के लिए, एमएनए एमएस के साथ कोशिकाओं में बिगड़ा हुआ लिपिड परिवहन के परिणामस्वरूप, "सही ढंग से" स्थानीय सिग्नलिंग कॉम्प्लेक्स नहीं बनते हैं) अंतर्निहित तंत्र में संकेतों के संचरण को बाधित करेगा, जिसके परिणामस्वरूप सेल मृत्यु से बचना और, अंततः, प्रतिरोध का गठन। इस कारण से, एमडीआर से निपटने के लिए, यह वांछनीय है कि मृत्यु तंत्र एकाधिक हों और इसमें न केवल कैसपेस की सक्रियता शामिल हो, बल्कि: प्रोटीज के अन्य परिवार (लाइसोसोमल, प्रोटीसोमल, परमाणु), साथ ही सिग्नल पोटेंशिएशन (माइटोकॉन्ड्रियल मार्ग) और प्लाज्मा झिल्ली की पारगम्यता में व्यवधान। प्रतिरोधी कोशिकाओं में जितना अधिक मृत्यु तंत्र सक्रिय किया जा सकता है, एमडीआर पर काबू पाने का अंतिम परिणाम उतना ही अधिक विश्वसनीय होगा।

1. एमवायआर\ जीन और पी-ग्लाइकोप्रोटीन-मध्यस्थ एमडीआर फेनोटाइप को एमएन कोशिकाओं के एकल अल्पकालिक जोखिम से प्रेरित किया जा सकता है< веществ, в том числе противоопухолевых препаратов. МЛУ закрепляется в

कोशिकाओं के वे अंश जो एक्सपोज़र के बाद बच गए। एमओटी पर एपिजेनेटिक सक्रियण एक स्थिर एमडीआर फेनोटाइप उत्पन्न करता है।

2) एमडीआर का तत्काल गठन ईआर1 जीन की अभिव्यक्ति के सक्रियण द्वारा सुनिश्चित किया जाता है: इसके प्रतिलेखन की प्रेरण और एमआरएनए का स्थिरीकरण।

3) एमडीआर के सक्रियण में तनाव के प्रति कोशिका की प्रतिक्रिया के सामान्य मेकोसोम शामिल होते हैं: स्पैटिडाइलिनोसिटोल मार्ग, प्रोटीन काइनेज सी, इंट्रासेल्युलर 2+ का जुटाना, NaκB का सक्रियण, माइटोजेन-सक्रिय प्रोटीन किनेसेस और क्रोमैटिन की भौतिक स्थिति का विनियमन। इन तंत्रों का निषेध उन कोशिकाओं में एमडीआर के विकास को रोकता है जो इन ट्यूमर दवाओं के उपचार से बच जाती हैं।

4) पीजीपी बाधा पर काबू पाना और एमडीआर वाली कोशिकाओं में काम करने वाले मृत्यु तंत्र को प्रेरित करना ऐसी कोशिकाओं के विनाश के लिए आवश्यक और पर्याप्त स्थितियां हैं।

5) व्यक्तिगत रूप से पीजीपी और समग्र रूप से एमडीआर फेनोटाइप उन प्रभावों के तहत पीजीपी के अस्तित्व को सुनिश्चित नहीं करता है जो ओमैटिक झिल्ली की अखंडता के प्राथमिक उल्लंघन का कारण बनते हैं। इस प्रकार, प्लाज्मा झिल्ली एक एप्यूटिक लक्ष्य है, और नेक्रोसिस को शामिल करना धमनी प्रतिरोध को दूर करने की रणनीतियों में से एक है।

6) एमडीआर के साथ कोशिकाओं की मृत्यु, जाइमैटिक झिल्ली (वेध-मध्यस्थ लसीका) की अखंडता के उल्लंघन के कारण होती है, साइटोकिन्स को व्यक्त करने के लिए संशोधित कोले कोशिकाओं के साथ टीकाकरण के जवाब में उत्पन्न ओटॉक्सिक टी-लिम्फोसाइटों के कारण होती है।

7) इंट्रासेल्युलर मेटाबोलाइट्स जो जाइमैटिक झिल्ली को नुकसान पहुंचा सकते हैं और एमडीआर के साथ कोशिकाओं की मृत्यु का कारण बन सकते हैं, मुक्त ऑक्सीजन अणु हैं। एंटीट्यूमर गरेट्स के प्रभाव में उनकी पीढ़ी एमडीआर पर काबू पाने के लिए एक प्रभावी तंत्र है।

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राज्य वैज्ञानिक अनुसंधान केंद्र की प्रतिलिपि उपकरण सेवा का नाम रखा गया। एच.एच. ब्लोखिन RAMS ने प्रकाशन 14 के लिए हस्ताक्षर किए। द्वितीय .03 आदेश संख्या 24"/. प्रसार 100 प्रतियाँ।

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श्टिल, अलेक्जेंडर अल्बर्टोविच। पी-ग्लाइकोप्रोटीन द्वारा मध्यस्थ ट्यूमर कोशिकाओं की दवा प्रतिरोध: तत्काल गठन के तंत्र और काबू पाने के दृष्टिकोण: थीसिस का सार। ... डॉक्टर ऑफ मेडिकल साइंसेज: 14.00.14.- मॉस्को, 2003.- 46 पी.: बीमार।

कार्य का परिचय

विषय की प्रासंगिकता

I. ट्यूमर कोशिकाओं का बहुऔषध प्रतिरोध:

ऑन्कोलॉजी में जैविक तंत्र और महत्व।

फार्माकोलॉजी में महत्वपूर्ण प्रगति के बावजूद, जिसमें अपेक्षित गुणों वाली दवाएं बनाने की तकनीक का विकास भी शामिल है, ट्यूमर के लिए कीमोथेरेपी की सफलता जीवित प्रणालियों की सबसे महत्वपूर्ण विशेषता - बाहरी वातावरण में परिवर्तनों पर प्रतिक्रिया करने की क्षमता तक सीमित है। इस तरह की कठोरता की अभिव्यक्तियों में से एक दवाओं के लिए ट्यूमर कोशिकाओं के प्रतिरोध का विकास है [कीमोथेरेपी में उपयोग किया जाता है। व्यापक वितरण और बाहरी प्रभावों के प्रति कोशिका अनुकूलन की दीर्घकालिक, निरंतर प्रकृति से पता चलता है कि दवा प्रतिरोध पर काबू पाना न केवल अधिक प्रभावी दवाओं की खोज से जुड़ा हो सकता है: संभवतः ऐसी कोई दवा नहीं है जिसके प्रति कोशिकाएं प्रतिरोध विकसित करने में सक्षम नहीं होंगी। विभिन्न प्रकार के तनाव के प्रतिरोध के वैज्ञानिक तंत्र की व्याख्या ही दवा प्रतिरोध पर काबू पाने के लिए रणनीतियों के विकास के आधार के रूप में काम करेगी, जो कैंसर रोगियों के उपचार की प्रभावशीलता बढ़ाने के लिए एक आवश्यक शर्त है।

नियोप्लाज्म का मल्टीड्रग प्रतिरोध (एमडीआर) - विभिन्न दवाओं के प्रभाव के जवाब में ट्यूमर कोशिकाओं द्वारा व्यवहार्यता का संरक्षण - प्रगति के मुख्य कारणों में से एक है! रोग: उपयोग की जाने वाली दवाओं के संयोजन की परवाह किए बिना, ट्यूमर कीमोथेरेपी के प्रति असंवेदनशील है। एमडीआर घटना का एक दीर्घकालिक और स्थिर चरित्र है: प्रतिरोध तंत्र कोशिकाओं की पीढ़ियों से विरासत में मिले हैं। इस प्रकार, एमडीआर ट्यूमर के बढ़ने के प्रमुख कारकों में से एक है।

विषाक्त पदार्थों के प्रति कोशिका प्रतिरोध के दो मुख्य प्रकार हैं। प्राथमिक जी.ई. कीमोथेरेपी दवाओं के संपर्क में आने से पहले देखा गया प्रतिरोध ट्यूमर की प्रगति के दौरान रक्षा तंत्र की अभिव्यक्ति के कारण होता है। हाँ, सक्रियण

प्रतिरक्षा प्रभावकों को प्रतिरोध प्रदान करने वाले एपोप्टोटिक विरोधी तंत्र दवा प्रतिरोध से संबंधित हो सकते हैं। द्वितीयक (अधिग्रहीत) प्रतिरोध तनाव के संपर्क में आने वाली कोशिकाओं में होता है। इन प्रभावों से पहले, ऐसी कोशिकाओं में सुरक्षात्मक तंत्र खराब रूप से व्यक्त या अनुपस्थित होते हैं; एक विष के उपचार के बाद जीवित रहने पर, कोशिकाएं कई पदार्थों के प्रति प्रतिरोध प्राप्त कर लेती हैं - एमडीआर (रिओर्डन, लिंग, 1985)। आगे का चयन कोशिकाओं की पीढ़ियों पर प्राप्त फेनोटाइप को समेकित करता है।

एमडीआर का सबसे महत्वपूर्ण तंत्र अंतरकोशिकीय वातावरण में पदार्थों के उत्सर्जन के कारण कोशिका में विषाक्त पदार्थों का कम संचय है। ऐसा परिवहन एटीपी हाइड्रोलिसिस (जूलियानो, लिंग, 1984) की ऊर्जा के कारण प्लाज्मा झिल्ली पी-ग्लाइकोप्रोटीन (पीजीपी) के अभिन्न प्रोटीन द्वारा किया जाता है।"! मानव पीजीपी जीन द्वारा एन्कोड किया गया है एमडीआरआई(मल्टीड्रग प्रतिरोध 1), गुणसूत्र 7 पर स्थानीयकृत (चेन एट अल., 1986)। कई डेटा से संकेत मिलता है कि एमआरएनए में वृद्धि हुई है एमडीआरआईऔर पीजीपी अक्सर उपचार के लिए कई प्रकार के ट्यूमर के प्रतिरोध में एक कारक के रूप में कार्य करता है (लिन एट अल., 1995; स्टावरोव्स्काया एट अल., 1998)।

द्वितीय. ट्यूमर कोशिकाओं में एमडीआर का विकास: जैविक लक्ष्य के रूप में तंत्रके लिए रोकथाम

यह मान लेना उचित है कि एमआरएनए की मात्रा में वृद्धि होगी एमडीआरआईइस जीन के प्रवर्धन के कारण होता है। इस एमडीआर तंत्र की पहचान विषाक्त पदार्थों की उपस्थिति में जीवित रहने के लिए चुनी गई सुसंस्कृत कोशिका रेखाओं में की गई है (रोनिंसन, 1991)। हालाँकि, मानव ट्यूमर का विश्लेषण करते समय, जीन प्रवर्धन एमडीआर1उपचार के बाद प्राथमिक ट्यूमर या नियोप्लाज्म में इसका पता नहीं चला। क्लिनिकल एमडीआर का एक संभावित कारण अतिअभिव्यक्ति है एमडीआरआईऔर अपरिवर्तित जीन संरचना (प्रतिलिपि संख्या और न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम का संरक्षण) के साथ पीजीपी, यानी। फेनोटाइप की एपिजेनेटिक गतिविधि। मानव ट्यूमर कोशिकाओं की संस्कृतियों में, एमआरएनए के स्तर में वृद्धि एमडीआरआईऔर कीमोथेरेपी के एकल उपचार के दौरान नोट की गई पीजीपी की मात्रा

रासायनिक संरचना और क्रिया के तंत्र में विशिष्ट (चौधरी, एनिंसन, 1993)। एमआरएनए संचय के साक्ष्य प्राप्त किये गये हैं एमडीआर\फेफड़ों के ऊतकों में कैंसर के मेटास्टेसिस में, डॉक्सोरूबिसिन (एबोलहोडा एट अल., 1999) के इंट्राऑपरेटिव फेफड़े के जलसेक की शुरुआत के 20-50 मिनट बाद ही। ये परिणाम (प्रयोग और अन्य स्थितियों में एमडीआर के एपिजेनेटिक सक्रियण की संभावना की पुष्टि करते हैं: एमआरएनए में वृद्धि एमडीआर\और ट्यूमर में पीजीपी जीन प्रवर्धन के बिना हो सकता है एमडीआरआई.

इस प्रकार के जैविक विनियमन - फेनोटाइप का तत्काल सक्रियण - संबंधित फेनोटाइप को एन्कोडिंग करने वाले जीन (जीन) के प्रतिलेखन को शामिल करना, और/या पोस्ट-ट्रांसक्रिप्शनल नियंत्रण (एनके का स्थिरीकरण, प्रोटीन संश्लेषण और कार्यप्रणाली का विनियमन) शामिल है। एमडीआर के लिए, इस प्रकार के विनियमन का मतलब जीन प्रेरण की संभावना है एमडीआर\सेलुलर उत्तेजनाएं और तनाव के जवाब में आर/कोलेस्ट्रॉल कोशिकाओं में प्रतिरोध का अपेक्षाकृत तेजी से विकास। जीन प्रेरकता एमडीआरआईकोशिका परिधि से केंद्रक तक सिग्नलिंग मार्गों के विकास का सुझाव देता है। ऐसे मार्गों में तनाव-कार्यान्वयन सिग्नलिंग तंत्र शामिल हो सकते हैं: प्रोटीन काइनेज सी ІКС), फॉस्फोलिपेज़ और इंट्रासेल्युलर सीए 2+, माइटोजेन-सक्रिय मूत्र किनेसेस, परमाणु कारक कप्पा बी (एनएफकेबी)। जीन के नियामक क्षेत्र को संकेत देना एमडीआरआईऔर प्रतिलेख जीन संपीड़न की सक्रियता सुनिश्चित करता है।

एमडीआर विनियमन के अध्ययन का एक मौलिक व्यावहारिक पहलू भी है। औषधीय और/या आनुवंशिक प्रभावों का उपयोग करके इन तंत्रों का निषेध इस प्रक्रिया में एमडीआर के विकास को रोक देगा [मायोटेरागैश।

तृतीय. ट्यूमर कोशिकाओं के गठित एमडीआर पर काबू पाना।

यदि किसी सक्रिय जीन को अवरुद्ध किया जा रहा है एमडीआर\सिग्नल प्राथमिक संवेदी कोशिकाओं में एमडीआर के गठन को रोक सकते हैं, फिर ऐसा

यह दृष्टिकोण पहले से बने प्रतिरोध पर काबू पाने के लिए लागू नहीं है। द्वितीयक एमडीआर से निपटने का पारंपरिक तरीका साइटोस्टैटिक्स (लेहने, 2000) के साथ संयोजन में पीजीपी मॉड्यूलेटर का उपयोग है। हालाँकि, पीजीपी अवरोधकों का उपयोग साइड इफेक्ट्स (हृदय ताल गड़बड़ी, प्रतिरक्षाविज्ञानी असंतुलन) द्वारा सीमित है। यह भी उतना ही महत्वपूर्ण है कि एमडीआर के चयन के दौरान कम से कम कुछ कोशिका मृत्यु तंत्रों को अवरुद्ध करने के कारण मॉड्यूलेटर + हार्मोन-स्थैतिक संयोजनों की प्रभावशीलता कम हो सकती है।

यदि दो शर्तें पूरी होती हैं तो गठित एमडीआर पर काबू पाना संभव है: 1) दवा की सांद्रता कोशिका मृत्यु के प्रभावकारी तंत्र को सक्रिय करने के लिए पर्याप्त होनी चाहिए, 2) इन तंत्रों के कार्यों को एमडीआर वाली कोशिकाओं में संरक्षित किया जाना चाहिए। पहली शर्त तब पूरी होती है जब दवा पीजीपी बाधा पर काबू पा लेती है। हालाँकि, यह साबित करना आवश्यक है कि एजेंट की एक महत्वपूर्ण इंट्रासेल्युलर एकाग्रता प्राप्त करना एक कोशिका की मृत्यु को सक्रिय करने के लिए पर्याप्त है जो कई प्रभावों के लिए प्रतिरोधी है। प्रतिरोधी कोशिकाओं में सक्रिय जीवन रक्षा तंत्र को प्रतिरोधी कोशिकाओं के उन्मूलन के लक्ष्य के रूप में काम करना चाहिए।

दूसरी शर्त को लागू करने के लिए, प्रतिरोधी कोशिकाओं की मृत्यु को प्रेरित करने के तंत्र के रूप में उनका विश्लेषण करने के उद्देश्य से दृष्टिकोण आशाजनक प्रतीत होते हैं। कुछ साइटोकिन्स के सीडीएनए के साथ ट्रांसफ़ेक्ट सिन्जेनिक मायलोमा कोशिकाओं वाले चूहों के टीकाकरण से साइटोटॉक्सिक टी-लिम्फोसाइट (सीटीएल)-मध्यस्थ प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का विकास होता है और प्रतिरक्षित जानवरों में ग्राफ्टेड ट्यूमर की अस्वीकृति होती है (ड्रैनॉफ़ एट अल।, 1993; लेवित्स्की एट अल)। ., 1996)। सीटीएल ग्रैनजाइम बी और पेर्फोरिन का उपयोग करके कोशिकाओं को नष्ट करते हैं। चूंकि ग्रैनजाइम बी एपोप्टोसिस के डिस्टल प्रभावकों में से एक कैस्पेज़ 3 को सक्रिय करता है, और पेर्फोरिन प्लाज्मा झिल्ली (नेक्रोसिस) को प्राथमिक क्षति पहुंचाता है, कोई उम्मीद कर सकता है कि यदि समीपस्थ मृत्यु तंत्र अवरुद्ध हो जाते हैं तो एसएल प्रभावी होगा; नेक्रोसिस के साथ संयोजन में एपोप्टोसिस के डिस्टल लिंक को ट्रिगर करना

एंटीट्यूमर दवाओं के प्रति प्रतिरोधी कोशिकाओं की मृत्यु की ओर जाता है - क्रमादेशित कोशिका मृत्यु के प्रवर्तक।

समस्या का निरूपण

एमडीआर एक चिकित्सकीय रूप से प्रतिकूल घटना है, जिस पर काबू पाने के लिए इसके विकास के तंत्र और कोशिका मृत्यु के तरीकों का ज्ञान आवश्यक है; समस्या के दोनों पहलुओं का अध्ययन करना आवश्यक है। सबसे पहले, एमडी/ में एमडीआर के विकास के तंत्र का अध्ययन करना आवश्यक है? एल/पीजीपी-नकारात्मक मानव कोशिकाएं, इन तंत्रों का अध्ययन मुख्य रूप से संवेदनशील कोशिकाओं में प्रतिरोध के विकास को रोकने में मदद करेगा। दूसरे, एमडीआर के साथ कोशिकाओं में चल रही मृत्यु प्रक्रियाओं का विश्लेषण उन स्थितियों में प्रतिरोध पर काबू पाने का आधार तैयार करेगा जहां माध्यमिक एमडीआर का गठन हुआ है।

अध्ययन का उद्देश्य मानव ट्यूमर कोशिकाओं में लिम्फ नोड्स के तत्काल गठन के तंत्र को स्थापित करना और इस प्रतिरोध को दूर करने के लिए दृष्टिकोण विकसित करना है।

कीमोथेरेपी और प्रायोगिक एगोनिस्ट और सिग्नलिंग तंत्र के विरोधी के प्रभावों के जवाब में मानव ट्यूमर सेल संस्कृतियों में एमडीआर के विकास के लिए मॉडल का अनुकूलन करना।

मुख्य निर्धारित करें! जब कोशिकाओं को एंटीट्यूमर एजेंटों के साथ इलाज किया जाता है तो एमडीआर के तत्काल विकास का तंत्र: जीन प्रवर्धन एमडीआरआई,पीजीपी पॉजिटिव कोशिकाओं का चयन या डे नोवो एमडीआर दमन।

इंट्रासेल्युलर सिग्नल ट्रांसमिशन के मार्गों की जांच करें जो एमडीआर के सक्रियण को नियंत्रित करते हैं - प्रोटीन काइनेज सी, फॉस्फोलिपेज़ सी, सेलुलर सीए +, माइटोजेन-सक्रिय प्रोटीन किनेसेस, एनएफकेबी)।

जीन अभिव्यक्ति के ट्रांसग्रेसिव सक्रियण और पोस्टट्रांसग्रेसनल विनियमन (एमआरएनए स्थिरता) की भूमिका की पहचान करना एमडीआरआईकीमोथेरेपी के संपर्क में आने पर एमडीआर के तत्काल विकास में।

ब्लॉकर्स के साथ कीमोथेरेपी दवाओं के संयोजन से ट्यूमर कोशिकाओं में एमडीआर के विकास को रोकने के तरीके विकसित करना एमडीआर\-सिग्नलिंग मार्ग और जीन प्रतिलेखन अवरोधकों को सक्रिय करना

स्रावी और प्रभावक कैस्प्स के सक्रियण की गतिकी का अध्ययन करने के लिए, माइटोकॉन्ड्रिया की ट्रांसमेम्ब्रेन क्षमता में परिवर्तन, पॉली (एडीपी) राइबोस पोलीमरेज़ के प्रोटियोलिटिक क्लीवेज, इंटरन्यूक्लियोसोमल डीएनए विखंडन और माता-पिता की कोशिकाओं में प्लाज्मा झिल्ली की अखंडता और एमडीआर के साथ इलाज किए जाने पर एमडीआर के साथ वेरिएंट का अध्ययन करना। पी-ग्लाइकोप्रोटीन द्वारा दवा का परिवहन नहीं किया जाता है।

एमडीआर कोशिकाओं के खिलाफ प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया उत्पन्न करने के लिए साइटोकिन-व्यक्त ट्यूमर कोशिकाओं के साथ टीकाकरण का उपयोग करें।

बचाव के लिए प्रावधान प्रस्तुत किये गये।

पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर का गठन - कई प्रभावों के लिए एक तत्काल कोशिका प्रतिक्रिया - जीन के एपिजेनेटिक सक्रियण द्वारा मध्यस्थ होता है एमडीआरआई.यह सक्रियण इंट्रासेल्युलर सिग्नलिंग, जीन प्रमोटर इंडक्शन और एमआरएनए स्थिरीकरण के कई तंत्रों के कारण होता है और इन संकेतों के अवरोधकों द्वारा इसे रोका जा सकता है।

पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर पर काबू पाना प्रतिरोधी कोशिकाओं के प्लाज्मा झिल्ली को लक्षित करने से जुड़ा हो सकता है। पीजीपी कोशिकाओं को प्लाज्मा झिल्ली की अखंडता - नेक्रोसिस के विघटन से नहीं बचाता है।

वैज्ञानिक पृष्ठभूमि पहली बार, किसी बाह्य उत्तेजना के प्रति कोशिका की तत्काल प्रतिक्रिया के रूप में एमडीआर के गठन के विचार की पुष्टि की गई है;

पहली बार, एक विशिष्ट दवा प्रतिरोध फेनोटाइप - पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर - के विकास के तंत्र का विस्तार से अध्ययन किया गया है: इस प्रोटीन को एन्कोडिंग करने वाले जीन का एपिजेनेटिक सक्रियण एमडीआरआई.

3. पहली बार तत्काल जीन सक्रियण का एक मॉडल विकसित किया गया एमडीआरआई,

सुसंस्कृत मानव ट्यूमर कोशिकाओं में पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर के एक स्थिर फेनोटाइप के अधिग्रहण के साथ; \. सिग्नल ट्रांसडक्शन मार्ग, ट्रांसक्रिप्शन सक्रियण के तंत्र और पोस्ट-ट्रांसक्रिप्शनल जीन विनियमन की पहचान की गई है एमडीआरएक्सएंटीट्यूमर दवाओं के संपर्क में आने वाली कोशिकाओं में। 5. पहली बार, ट्यूमर कोशिकाओं में पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर के गठन को रोकने के लिए औषधीय पदार्थों के वर्गों - इंट्रासेल्युलर सिग्नल ट्रांसमिशन के अवरोधकों की विशेषता बताई गई है। 5. पहली बार, पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर के साथ कोशिकाओं में सक्रिय मृत्यु तंत्र का अध्ययन किया गया, और प्रतिरोध पर काबू पाने के लिए एक दृष्टिकोण विकसित किया गया, जिसमें प्लाज्मा झिल्ली की अखंडता को प्राथमिक क्षति शामिल थी।

व्यावहारिक मूल्य।

कीमोथेराप्यूटिक दवाओं के संपर्क में आने पर सुसंस्कृत ट्यूमर कोशिकाओं में पीजीपी-मध्यस्थता एमडीआर के तत्काल विकास को रोकने के तरीकों का विकास।

एमडीआर पर काबू पाने के लिए संशोधित आनुवंशिक रूप से इंजीनियर टीकों का प्रीक्लिनिकल परीक्षण।

कार्य की स्वीकृति.

इस शोध प्रबंध पर 30 जून 2003 को आणविक आनुवंशिकी, वायरल और सेलुलर ऑन्कोजीन, आणविक एंडोक्राइनोलॉजी, एंटी-ट्यूमर प्रतिरक्षा, जैव रासायनिक फार्माकोलॉजी, चिकित्सा अनुसंधान, प्रयोगात्मक निदान और के एक समूह के साथ ट्यूमर सेल आनुवंशिकी, साइटोजेनेटिक्स की प्रयोगशालाओं के एक संयुक्त सम्मेलन में चर्चा की गई थी। ट्यूमर की बायोथेरेपी; रूसी कैंसर अनुसंधान केंद्र के श्मुनोलॉजी, हेमेटोलॉजी, कीमोथेरेपी, क्लिनिकल फार्माकोलॉजी, उन्नत उपचार विधियों के विभाग का नाम रखा गया है। एन.एन. ब्लोखिन RAMS।

शोध प्रबंध की मुख्य सामग्री निम्नलिखित सम्मेलनों में प्रस्तुत की गई: द्वितीय अंतर्राष्ट्रीय संगोष्ठी "साइटोस्टैटिक ड्रग रेजिस्टेंस", (यू जर्मनी, 1991); गॉर्डन सम्मेलन "कीमोथेरेपी में प्रगति" (न्यूयॉर्क, लंदन, यूएसए, 1994); "आणविक विष विज्ञान" (कॉप्लर माउंटेन, यूएसए, 1995); "इंड्यूसिबल जीनोमिक रिस्पॉन्स" (स्टीवेन्सन, यूएसए, 1996); "न्यूक्लिक एसिड - एकीकृत आणविक निदान और थेरेपी" (सैन डिएगो, यूएसए, 1996); अमेरिकन एसोसिएशन ऑफ कैंसर रिसर्च का वार्षिक सम्मेलन (1994-2001): 6वां और 7वीं कांग्रेस "ऑन्कोलॉजी में प्रगति", (हर्सनिसोस, ग्रीस, 2001,2002); "सेल न्यूक्लियस की संरचना और कार्य" (सेंट पीटर्सबर्ग, 2002), साथ ही ओन्कोटेक, इंक. के सेमिनारों में भी। (इरविन, यूएसए, 1996), साल्क इंस्टीट्यूट (लाजोला, यूएसए, 1997), ली मोफिट कैंसर सेंटर (टाम्पा, यूएसए, 1997), द जैक्सन लेबोरेटरी (बार हार्बर, यूएसए, 1997), स्लोअन-केटरिंग कैंसर सेंटर, न्यू यो ] यूएसए, 1999), कोपेनहेगन (2002), इंसब्रुक (2002) और ग्रोनिंगी (2003), मॉस्को स्टेट यूनिवर्सिटी के विश्वविद्यालय। एम.वी. लोमोनोसोव (2002), रिसर्च इंस्टीट्यूट ऑफ एक्सपेरिमेंटल पैथोलॉजी, ऑन्कोलॉजी और रेडियोबायोलॉजी के नाम पर रखा गया। आर.ई. कावेत्स्की (कीव, 2002)।

प्रकाशन.

शोध प्रबंध की संरचना और दायरा.

क्रमादेशित कोशिका मृत्यु का अध्ययन - एपोप्टोसिस (ग्रीक से। αποπτωσις - पत्ते गिरना) - पिछले दशक में कई महत्वपूर्ण वैज्ञानिक खोजें हुईं: इस घटना के कार्यान्वयन के लिए एक समग्र प्रणाली की खोज की गई - इसे नियंत्रित करने वाले जीन, साथ ही सतह कोशिका रिसेप्टर्स और उनके लिगेंड जो कोशिका मृत्यु में मध्यस्थता करते हैं, की पहचान की गई।
कई प्रयोगों में, वैज्ञानिकों ने साबित किया है: क्रमादेशित मृत्यु किसी भी बहुकोशिकीय प्रणाली की किसी भी कोशिका की एक अनिवार्य और अभिन्न संपत्ति है। (हर दिन, शरीर की लगभग 5% कोशिकाएं एपोप्टोसिस से गुजरती हैं, और नई कोशिकाएं उनकी जगह ले लेती हैं। एक कोशिका को बिना किसी निशान के गायब होने में 15 मिनट से 2 घंटे तक का समय लगता है)।
2002 में, आणविक जीवविज्ञानी सिडनी ब्रेनर ( सिडनी ब्रेनर, रॉबर्ट होर्विट्ज़ ( एच. रॉबर्ट होर्विट्ज़) और जॉन सुलस्टन ( जॉन एडवर्ड सुलस्टन) "जीव विकास के आनुवंशिक विनियमन और क्रमादेशित कोशिका मृत्यु" के क्षेत्र में खोजों के लिए फिजियोलॉजी या मेडिसिन में नोबेल पुरस्कार से सम्मानित किया गया था।
विशेषज्ञों का मानना ​​है कि एपोप्टोसिस पर आगे का शोध कैंसर, स्ट्रोक, दिल का दौरा, अल्जाइमर रोग, पार्किंसंस रोग और कुछ अन्य जैसी खतरनाक बीमारियों के खिलाफ दवाओं के विकास में योगदान दे सकता है।

अलेक्जेंडर अल्बर्टोविच स्टिहल- चिकित्सा विज्ञान के डॉक्टर, ट्यूमर कोशिका मृत्यु के तंत्र की प्रयोगशाला के प्रमुख, कार्सिनोजेनेसिस अनुसंधान संस्थान, रूसी कैंसर अनुसंधान केंद्र के नाम पर। एन.एन. ब्लोखिन रूसी चिकित्सा विज्ञान अकादमी।

सेलुलर और आणविक ऑन्कोलॉजी के क्षेत्र में विशेषज्ञ।

वैज्ञानिक रुचियाँ: क्रमादेशित कोशिका मृत्यु के तंत्र (बैक्टीरिया और यूकेरियोट्स, विशेष रूप से ट्यूमर कोशिकाएं)।

प्रश्न_ऐलेना वेट्रोवा
मार्च अप्रैल
मॉस्को, 2009

अलेक्जेंडर अल्बर्टोविच के अनुसार, एपोप्टोसिस शरीर में जीवन भर होने वाली प्रमुख जैविक प्रक्रियाओं में से एक है। यह शरीर के भ्रूणीय विकास (मॉर्फोजेनेसिस), और अंगों और ऊतकों (होमियोस्टैसिस) में गतिशील संतुलन बनाए रखने और ट्यूमर की शुरुआत और विकास की प्रक्रिया में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है।(कार्सिनोजेनेसिस)।
अन्य किन मामलों में शरीर में कोशिका आत्महत्या कार्यक्रम चालू होता है? और यह प्रोग्राम कैसे "जानता" है कि शरीर के लिए क्या अच्छा है और क्या बुरा है?

क्रमादेशित मृत्यु शारीरिक प्रक्रियाओं के दौरान सक्रिय होती है - सबसे सरल जीवों में, उदाहरण के लिए, बैक्टीरिया, कोशिका आबादी के आकार को बनाए रखने के लिए जो दी गई पर्यावरणीय परिस्थितियों (पोषक तत्व, तापमान) के लिए इष्टतम है। यह प्रभाव बायोफिल्म्स, स्व-विनियमन जीवाणु समुदायों में देखा जाता है।
उच्च जीवों के ऊतकों और अंगों के भ्रूणीय विकास में और वयस्क जीव में, क्रमादेशित मृत्यु कोशिका आबादी - उम्र बढ़ने और कार्यों को खोने - को युवा लोगों के साथ बदलने का काम करती है।
कार्यक्रम यह नहीं जानता कि शरीर के लिए क्या अच्छा है और क्या बुरा है, यह बस जीवन कैसे काम करता है - मृत्यु जीवन का एक पक्ष है...

अर्थात विकास का एक दुष्परिणाम यह हैऑगस्ट वीसमैन किस बारे में बात कर रहे हैं?जर्मन प्राणीविज्ञानी और विकासवादी, ने 19वीं सदी के अंत में लिखा...

...इसलिए, कीमोथेरेपी के दौरान गैर-ट्यूमर कोशिकाओं की मृत्यु खराब है: सामान्य कोशिकाओं का एपोप्टोसिस यहां अवांछनीय है, लेकिन कार्यक्रम "बुरे और अच्छे" के बीच वितरित नहीं करता है, बल्कि जो जीवित रह सकते हैं उन्हें जीवित रहने की अनुमति देता है, और अधिक को नष्ट कर देता है कमज़ोर, अधिक संवेदनशील... मानवीय समझ में न्याय यहाँ काम नहीं करता है, और आपको इस निराशा और "असैद्धांतिकता" के लिए भुगतान करना होगा।

वैज्ञानिकों को एपोप्टोसिस के अस्तित्व के बारे में बहुत पहले नहीं, लगभग आधी सदी पहले पता चला था। इस खोज ने विज्ञान के विकास को कैसे प्रभावित किया?

इस खोज ने कम समय में - लगभग 15 वर्षों में - सबसे महत्वपूर्ण जैविक प्रक्रियाओं के बारे में विचार बनाना संभव बना दिया - इंट्रासेल्युलर संकेतों का संचरण, प्रोटियोलिसिस का विनियमन - शरीर में प्रोटीन और पेप्टाइड्स के टूटने की प्रक्रिया, विनियमन केन्द्रक, अंगक और झिल्लियों के आकार का।

जीन अभिव्यक्ति में क्रोमैटिन प्रोटीन की भूमिका का अध्ययन तेज हो गया है।

ट्यूमर और सामान्य कोशिकाओं पर साइटोस्टैटिक एजेंटों, मुख्य रूप से एंटीट्यूमर दवाओं और आयनीकृत विकिरण की कार्रवाई के तंत्र के बारे में विचार प्रमाणित होते हैं।

कोशिका मृत्यु के तंत्र की खोज ने आज कई वैज्ञानिक दिशाओं पर ध्यान केंद्रित किया है - जीव विज्ञान और रसायन विज्ञान से लेकर मानव, पशु और पौधों की बीमारियों की चिकित्सा तक।

हाँ, इस दिशा को आणविक जीव विज्ञान में सबसे आशाजनक में से एक माना जाता है। यह अभी भी असाध्य अपक्षयी रोगों, कैंसर और यहां तक ​​कि बुढ़ापे को हराने की संभावना के इलाज के लिए मौलिक रूप से नई दवाओं के विकास से आशावादी रूप से जुड़ा हुआ है।
कुछ रिपोर्टों के अनुसार आज विश्व में चार सौ से अधिक प्रयोगशालाएँ किसी न किसी तरह इस विषय से जुड़ी हुई हैं।

आणविक जीव विज्ञान के लिए एपोप्टोसिस के अध्ययन का वादा इस तथ्य के कारण है कि यह घटना (और, अधिक व्यापक रूप से, कोशिका मृत्यु) कई वैज्ञानिक विचारों और दिशाओं के संयोजन को कवर करती है। एक कोशिका, चाहे सरल हो या जटिल, हमेशा एक जटिल प्रणाली होती है, और मृत्यु जीवित चीजों की एक अभिन्न संपत्ति है। इसलिए, मृत्यु का अध्ययन आम तौर पर जीवन के सार को समझने के लिए आशाजनक है।
और, वास्तव में, व्यावहारिक रूप से, मृत्यु के तंत्र का अध्ययन करने से कई दवाओं के प्रभाव को निर्दिष्ट करना संभव हो जाएगा।

अपेक्षाकृत हाल ही में, इस घटना की खोज की गई थी दर्शक प्रभाव (« दर्शक प्रभाव"): जब कोशिकाएं किसी भी कारण से मर जाती हैं, तो वे अपने निकटवर्ती स्वस्थ कोशिकाओं को एक निश्चित संकेत भेजती हैं, और वे स्वयं नष्ट हो जाती हैं। उन्हें क्या प्रेरित करता है? क्या इस बारे में कोई परिकल्पना है?

यह एक जटिल प्रणाली में जैविक विनियमन का एक उदाहरण है: इस तरह, कोशिकाएं अपने पड़ोसियों को संकेत भेजकर एक-दूसरे को मार देती हैं। संकेत (आमतौर पर एक पानी में घुलनशील प्रोटीन) अपनी कोशिकाओं के लिए हानिकारक नहीं है, लेकिन एक ही आबादी में स्थित एक अलग मूल की कोशिकाओं के लिए विनाशकारी है - खेल संवेदनशीलता में इस अंतर पर आधारित है।

एपोप्टोसिस की प्रक्रिया में ऑक्सीजन और हाइड्रोजन पेरोक्साइड की क्या भूमिका है?

बहुत महत्वपूर्ण - ऑक्सीजन रेडिकल्स रासायनिक रूप से बहुत सक्रिय हैं। वे ऐसी प्रतिक्रियाएं शुरू करते हैं जो प्रोटीन, न्यूक्लिक एसिड और लिपिड को नुकसान पहुंचाती हैं।

आयनकारी विकिरण और एंथ्रासाइक्लिन एंटीबायोटिक दवाओं का चिकित्सीय प्रभाव इसी गुण पर आधारित है। प्रकाश द्वारा विशेष रासायनिक यौगिकों - फोटोसेंसिटाइज़र - के उत्तेजना से ऑक्सीजन विस्फोट होता है और गंभीर कोशिका क्षति होती है। यदि ऐसा फोटोसेंसिटाइज़र ट्यूमर में जमा हो जाता है और बाद में प्रकाशित हो जाता है, तो ट्यूमर कोशिकाएं मर जाती हैं। ऑन्कोलॉजी में, ऐसी थेरेपी को फोटोडायनामिक कहा जाता है और इसका व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, हालांकि, ऐसे ट्यूमर के लिए जो प्रकाश तक पहुंच योग्य हैं और आकार में बहुत बड़े नहीं हैं।

एपोप्टोसिस का सिद्धांत सेलुलर और उपसेलुलर दोनों स्तरों पर, ऊतकों और अंगों में देखा जाता है। रूसी विज्ञान अकादमी के शिक्षाविद व्लादिमीर स्कुलचेव ने इस घटना को फेनोप्टोसिस कहने का प्रस्ताव रखा। प्रकृति में कुछ पौधे और जानवर (फूल आने के बाद बांस, अंडे देने के बाद सैल्मन) अपने जीवन के शुरुआती दिनों में आत्म-विनाश कार्यक्रम क्यों शुरू कर देते हैं? यह अपरिवर्तनीय जीन उत्परिवर्तन के कारण होने की संभावना नहीं है।

संभवतः संबंधित नहीं है, लेकिन यह प्रकृति का तंत्र है - वह भाषा जिसमें वे कहते हैं कि फीका बांस मर जाएगा... तंत्र एपिजेनेटिक है - कोई उत्परिवर्तन नहीं होता है, लेकिन क्रोमैटिन के भौतिक-रासायनिक गुणों में तेजी से परिवर्तन होते हैं , और एक महत्वपूर्ण जीन (जीन) काम करने से शांत हो जाता है। ऐसी भाषा को किसी भी विनाश की आवश्यकता नहीं होती है - यह एक रासायनिक समूह - मिथाइल, फॉस्फेट, एसिटाइल - को एक प्रोटीन से दूसरे प्रोटीन में जोड़ने या अलग करने के लिए पर्याप्त है।
बहुत हो गया इशारा...

एक परिकल्पना है कि कैंसर आनुवंशिक रूप से अस्थिर जीव की एक क्रमादेशित मृत्यु है जिसमें अपूरणीय क्षति होती है (और इसलिए विकास के लिए खतरनाक है)। तेजी से, ऑन्कोलॉजिस्ट को यह कहते हुए सुना जा सकता है कि पूरी तरह से परिवर्तित कोशिका की उपस्थिति केवल समय की बात है। यदि हां, तो कैंसर बुढ़ापे की तरह कोई बीमारी नहीं है, बल्कि जीवित प्रणाली के विकास का एक निश्चित परिणाम है। लेकिन वैज्ञानिक मानते हैं, और भविष्य विज्ञानी भविष्यवाणी करते हैं कि भविष्य में कैंसर पर विजय मिलेगी। और वास्तव में, अंततः, मनुष्य ने विकास से दया की अपेक्षा करना बहुत पहले ही बंद कर दिया है। क्या कैंसर को हराना संभव है?

शायद इसे हराया नहीं जा सकता - कैंसर अन्य विशिष्ट रोग प्रक्रियाओं - सूजन, एलर्जी के साथ-साथ एक गैर-व्यवहार्य व्यक्ति को हटाने के तंत्रों में से एक है। जैविक जीवन जीवों के संचलन पर बना है - मृत्यु अपरिहार्य है, और इसके कार्यान्वयन के लिए तंत्र आवश्यक हैं। कैंसर एक ऐसा तंत्र है। वैज्ञानिकों का काम मौत को टालना नहीं, टालना है।

यदि उम्र बढ़ने और कैंसर के विकास के बीच एक मजबूत संबंध है, और जाहिर तौर पर इस पर किसी को संदेह नहीं है, तो शायद इसके खिलाफ लड़ाई के मोर्चे को उम्र बढ़ने के खिलाफ लड़ाई के पैमाने तक विस्तारित करना आवश्यक है?

उम्र बढ़ने के खिलाफ लड़ाई ट्यूमर के खिलाफ लड़ाई के हिस्से के रूप में और अन्य पहलुओं में आवश्यक है - यह संदेह से परे है।

शरीर की कैंसर-विरोधी सुरक्षा एपोप्टोसिस पर आधारित है। उत्परिवर्तनों की एक श्रृंखला के बाद एपोप्टोसिस काम करना क्यों बंद कर देता है? क्यों, कुछ बिंदु पर, शरीर विरोध करना बंद कर देता है और ट्यूमर की मदद करना शुरू कर देता है (उदाहरण के लिए, प्रतिरक्षा प्रणाली)?

क्योंकि एपोप्टोसिस, किसी भी जैविक प्रक्रिया की तरह, उत्परिवर्तन द्वारा बाधित होता है, और इसलिए भी कि एपोप्टोसिस को उत्परिवर्तन के बिना आसानी से बाधित किया जा सकता है।

कार्सिनोजेनेसिस की प्रक्रिया में साइटोक्रोम P450 एंजाइमों के समूह की क्या भूमिका है?

3.सर जॉन सुलस्टन- ब्रिटिश जीवविज्ञानी, ग्रेट ब्रिटेन की रॉयल सोसाइटी के सदस्य। उनकी प्रयोगशाला ने नेमाटोड कैनोर्हाडाइटिस एलिगेंस की भ्रूण कोशिकाओं के विभाजन के क्रम का पूरा विवरण संकलित किया और विकास के दौरान इसकी सभी 959 कोशिकाओं के भाग्य का पता लगाया।

बिना किसी संशय के। ऐसे प्रोटीन का अस्तित्व जीव विज्ञान में एपोप्टोसिस के आवश्यक महत्व की पुष्टि करता है - इस घटना के तंत्र यादृच्छिक नहीं हैं, वे कोशिका के डीएनए में एन्कोडेड होते हैं और उचित संकेत मिलने पर क्रिया में आते हैं। उनके बिना कोई मृत्यु नहीं है.

हाल ही में, अल्बर्ट आइंस्टीन इंस्टीट्यूट ऑफ मेडिसिन के अमेरिकी शोधकर्ताओं ने पाया कि इंट्रासेल्युलर प्रोटीन पी115 का एक छोटा सा टुकड़ा एपोप्टोसिस को सक्रिय करता है।
एपोप्टोसिस से पहले, पी115 दो टुकड़ों में टूट जाता है, जिनमें से छोटे में 205 अमीनो एसिड होते हैं। वैज्ञानिकों के अनुसार, यह कोशिका मृत्यु की प्रक्रिया में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, क्योंकि इसकी अभिव्यक्ति माइटोकॉन्ड्रिया से साइटोक्रोम सी को कोशिकाओं के साइटोप्लाज्म में छोड़ने की ओर ले जाती है, जिससे उनकी मृत्यु हो जाती है। वैज्ञानिकों को उम्मीद है कि इस खोज से कैंसर और अत्यधिक कोशिका प्रसार की विशेषता वाली अन्य विकृतियों से निपटने के लिए नई दवाओं के विकास में मदद मिल सकती है।
आपकी राय में, एपोप्टोसिस के क्षेत्र में कौन सी नवीनतम खोजें चिकित्सा और जीव विज्ञान के लिए महत्वपूर्ण हैं?

प्रोलिफ़ेरेटिव रोगों के उपचार के नए दृष्टिकोण एक समान घटना पर आधारित हैं - ऐसी स्थितियाँ बनाने के लिए जिसके तहत कोशिका के अपने प्रोटीन हत्यारों के रूप में काम करेंगे। इस प्रकार, प्रोटीन पॉली (एडीपी-राइबोस) पोलीमरेज़ का प्रोटियोलिटिक दरार, जो एपोप्टोसिस के प्रेरण के दौरान होता है, इसका टुकड़ा बनाता है जो डीएनए से जुड़ता है और इसकी क्षति की मरम्मत को रोकता है। डीएनए क्षति को ठीक करने के लिए आवश्यक सामान्य प्रोटीन पॉली (एडीपी-राइबोस) पोलीमरेज़, कोशिका के लिए विनाशकारी बन जाता है।

नवीनतम खोजें जो अब कोशिका मृत्यु के नियमन के लिए महत्वपूर्ण व्यावहारिक अनुप्रयोग प्राप्त कर रही हैं, उनमें तथाकथित शॉर्ट हेयरपिन एंटीसेंस आरएनए की शुरूआत के माध्यम से कोशिका और पूरे जीव में एक विशिष्ट जीन को दबाने की संभावना के प्रमाण शामिल हैं।

मूक जीन प्रौद्योगिकी ( गुप्तताजीन), जब छोटे डबल-स्ट्रैंडेड आरएनए अणुओं को लक्ष्य जीन के नियामक अनुक्रम से बांधने से इस जीन में संश्लेषण प्रक्रिया को रोकना संभव हो जाता है।
आशाजनक वेक्टर (वायरल) जीन थेरेपी।

ये उपकरण, रसायनज्ञों और जीवविज्ञानियों के बीच वर्षों के सहयोग का परिणाम है, जो दीर्घकालिक जीन शटडाउन को प्राप्त करना संभव बनाता है। यदि ऐसे जीन के उत्पाद कोशिका व्यवहार्यता के लिए महत्वपूर्ण हैं, तो हम न्यूनतम दुष्प्रभावों के साथ मृत्यु को प्रेरित करते हैं। उत्तरार्द्ध ऑन्कोलॉजी क्लिनिक में विशेष रूप से महत्वपूर्ण है - अक्सर कीमोरेडियोथेरेपी को रोगियों द्वारा बीमारी की तुलना में अधिक गंभीर रूप से सहन किया जाता है... मानक दवाओं को अभी भी कम समझा जाता है कि किन कोशिकाओं को नष्ट करना है और किस तरीके से। जीन थेरेपी अधिक प्रभावी हो सकती है, और उपचार के दुष्प्रभाव कम हो सकते हैं।

निस्संदेह, फलदायी, हालांकि कई कठिनाइयों का सामना करते हुए, लक्ष्य-निर्देशित - लक्षित - (अंग्रेजी से) की अवधारणा है लक्ष्य - लक्ष्य, लक्ष्य) ट्यूमर थेरेपी.

चित्र में. डी हर्सेप्टिन दवा का प्रभाव - (रोशे/स्विट्जरलैंड द्वारा निर्मित)। एंटीबॉडी के आधार पर बनाया गया जो HER2 रिसेप्टर प्रोटीन को अवरुद्ध कर सकता है।
ट्यूमर के विकास को रोकता है।
रोगी की स्थिति को स्थिर करता है।
कीमोथेरेपी की अवधि को छोटा कर देता है।

(जब आप कर्सर से उस पर क्लिक करते हैं तो चित्र बड़ा हो जाता है)

ट्यूमर कोशिका में एक विशिष्ट लक्ष्य (प्रोटीन) को निष्क्रिय करने के लिए बनाई गई व्यक्तिगत दवाएं उपचार के लंबे पाठ्यक्रमों में अत्यधिक प्रभावी और अच्छी तरह से सहन की जाती हैं (उदाहरण - ग्लीवेक, इरेसा)।

आपकी प्रयोगशाला ट्यूमर कोशिका मृत्यु की शुरुआत और कार्यान्वयन के मार्गों को लक्षित करने के लिए रणनीतियों पर शोध में लगी हुई है। आप इन समस्याओं को हल करने में कितना आगे आए हैं?

हमारी प्रयोगशाला के विशेषज्ञों ने रूस में बनाई गई नई दवाओं के प्रभाव में ट्यूमर कोशिका मृत्यु के तंत्र की स्थापना की है। विशेष रूप से, एक तंत्र की पहचान की गई है जिसमें ट्यूमर कोशिकाओं के दवा प्रतिरोध को बायपास करना संभव है: नए रासायनिक यौगिक उस बाधा को दूर करते हैं जो अन्यथा दवाओं को कोशिका में प्रवेश करने से रोकती है।

कैंसर कोशिकाओं में कोशिकाओं के पुन:प्रोग्रामिंग और कैंसर कोशिकाओं की मृत्यु में रासायनिक यौगिकों की भूमिका पर शोध करने के अलावा, आप कोशिका मृत्यु के आणविक तंत्र को स्पष्ट करने में लगे हुए हैं। इन तंत्रों के बारे में क्या अस्पष्ट है? वैज्ञानिकों को अभी भी किन प्रश्नों का उत्तर देना है?

यह पता लगाना महत्वपूर्ण है कि गैर-ट्यूमर कोशिकाओं में एपोप्टोसिस उत्प्रेरण से कैसे बचा जाए। किसी कोशिका को मारना कोई समस्या नहीं है, समस्या यह है कि स्वस्थ कोशिका की रक्षा कैसे की जाए...

क्या आपकी प्रयोगशाला कैंसर कोशिकाओं के हत्यारा कार्य के तंत्र का अध्ययन करने पर काम कर रही है? क्या सैद्धांतिक रूप से, कैंसर कोशिका की शरीर-विनाशकारी गतिविधि और सामान्य ऊतकों पर इसके प्रभाव को रोकना संभव है?

संभव और आवश्यक. ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर को निष्क्रिय करने के साधन दिखाई दिए हैं, जो कैंसर कोशिका द्वारा स्रावित एक विष है और सामान्य कोशिकाओं के विनाश का कारण बनता है, जो एक प्रकार का दर्शक प्रभाव है। ये उत्पाद प्रारंभिक नैदानिक ​​​​परीक्षणों से गुजर रहे हैं।

आपने आठ साल तक अमेरिका में काम किया। कैंसर से लड़ने के रूसी और पश्चिमी दृष्टिकोण में क्या अंतर है? यह ज्ञात है कि संयुक्त राज्य अमेरिका में इससे निपटने और कैंसर की रोकथाम के लिए महत्वपूर्ण धनराशि आवंटित की जाती है। और इन उपायों का सबसे महत्वपूर्ण परिणाम यह है कि कैंसर से मृत्यु दर धीरे-धीरे कम हो रही है।
रूस में कैंसर की घटनाओं को लेकर स्थिति कठिन बनी हुई है। कौन से उपाय प्रतिकूल स्थिति को उलट सकते हैं?

पश्चिमी वैज्ञानिक शैली की विशेषता तंत्र के गहन अध्ययन की इच्छा है, न कि केवल घटनाएं, प्रतिनिधित्व की पूर्णता, व्यापक अंतःविषय कनेक्शन के लिए धन्यवाद, और महत्वपूर्ण वैज्ञानिक जानकारी के निर्माण के लिए उच्च प्रतिस्पर्धा।

कैंसर से मृत्यु दर एक वैश्विक समस्या बनी हुई है, लेकिन कुछ स्थानों पर स्थिति में सुधार हुआ है। उदाहरण के लिए, पेट के कैंसर के कम मामले सामने आए हैं - आहार की स्थिति बदल गई है, प्रशीतन उद्योग के विकास के साथ भोजन का दीर्घकालिक भंडारण सुरक्षित हो गया है, तंबाकू विरोधी प्रचार का आयोजन किया गया है - ये सार्वजनिक उपाय वास्तव में सकारात्मक परिणाम ला रहे हैं .
में नवाचार पर स्वास्थ्य देखभाल(मुख्यतः कैंसर उपचार के क्षेत्र में) योजना बनाई गई $10 बिलियन- चालू वित्तीय वर्ष में प्रावधान से दोगुना।

और रूस में स्थिति को कई सामाजिक स्तरों के संयुक्त प्रयासों को एकजुट करके और निश्चित रूप से, ऐसे जटिल और महत्वपूर्ण कार्यों के लिए पर्याप्त धन के साथ सुधारा जा सकता है।