Промени в ДНК поради преход. Какво е ДНК - дезоксирибонуклеинова киселина? Структурата на нуклеотидите в молекулата на ДНК

МОСКВА, 25 април - РИА Новости, Татяна Пичугина.Точно преди 65 години британските учени Джеймс Уотсън и Франсис Крик публикуват статия за дешифрирането на структурата на ДНК, поставяйки основите на една нова наука – молекулярната биология. Това откритие промени много в живота на човечеството. РИА Новости говори за свойствата на молекулата на ДНК и защо е толкова важна.

През втората половина на 19 век биологията е много млада наука. Учените току-що започваха да изучават клетката и идеите за наследствеността, макар и вече формулирани от Грегор Мендел, не бяха широко приети.

През пролетта на 1868 г. млад швейцарски лекар Фридрих Мишер пристига в университета в Тюбинген (Германия), за да се занимава с научна работа. Той възнамеряваше да разбере от какви вещества е изградена една клетка. За опитите избрах левкоцити, които лесно се получават от гной.

Отделяйки ядрото от протоплазмата, протеините и мазнините, Miescher открива съединение с високо съдържание на фосфор. Той нарече тази молекула нуклеин ("нуклеус" на латински - ядро).

Това съединение проявява киселинни свойства, поради което възниква терминът "нуклеинова киселина". Неговият префикс "дезоксирибо" означава, че молекулата съдържа Н-групи и захари. После се оказа, че всъщност е сол, но не смениха името.

В началото на 20 век учените вече знаеха, че нуклеинът е полимер (т.е. много дълга гъвкава молекула от повтарящи се единици), единиците са съставени от четири азотни бази (аденин, тимин, гуанин и цитозин) и нуклеин се съдържа в хромозомите - компактни структури, които се срещат в делящите се клетки. Тяхната способност да предават наследствени характеристики е демонстрирана от американския генетик Томас Морган в експерименти с плодови мушици.

Моделът, който обяснява гените

Но какво прави дезоксирибонуклеиновата киселина, или накратко ДНК, в клетъчното ядро, не беше разбрано дълго време. Смята се, че играе някаква структурна роля в хромозомите. Единиците на наследствеността - гените - се приписват на протеинова природа. Пробивът е направен от американския изследовател Осуалд ​​Ейвъри, който експериментално доказва, че генетичният материал се прехвърля от бактерии на бактерии чрез ДНК.

Стана ясно, че трябва да се изследва ДНК. Но как? По това време на разположение на учените са били само рентгенови лъчи. За да се осветяват с него биологични молекули, те трябваше да кристализират, а това е трудно. Структурата на протеиновите молекули беше дешифрирана от модели на рентгенова дифракция в лабораторията Кавендиш (Кеймбридж, Обединеното кралство). Младите изследователи, които работеха там, Джеймс Уотсън и Франсис Крик, не разполагаха със собствени експериментални данни за ДНК, затова използваха рентгенови снимки на колеги от Кралския колеж Морис Уилкинс и Розалинд Франклин.

Уотсън и Крик предложиха модел на ДНК структура, който точно съвпадаше с рентгеновите модели: две успоредни нишки, усукани в дясна спирала. Всяка верига е съставена от произволен набор от азотни бази, нанизани върху гръбнака на техните захари и фосфати, и се държи заедно чрез водородни връзки между базите. Освен това аденинът се свързва само с тимин, а гуанинът - с цитозин. Това правило се нарича принцип на допълване.

Моделът на Уотсън и Крик обяснява четирите основни функции на ДНК: репликацията на генетичния материал, неговата специфичност, съхранението на информация в молекулата и способността му да мутира.

Учените публикуват откритието си в списание Nature на 25 април 1953 г. Десет години по-късно, заедно с Морис Уилкинс, те получават Нобелова награда за биология (Розалинд Франклин умира през 1958 г. от рак на 37 години).

"Сега, повече от половин век по-късно, можем да заявим, че откриването на структурата на ДНК изигра същата роля в развитието на биологията, както откриването на атомното ядро ​​във физиката. Изясняването на структурата на атома доведе до раждането на нова, квантова физика и откриването на структурата на ДНК доведоха до раждането на нова, молекулярна биология“, пише Максим Франк-Каменецки, изключителен генетик, изследовател на ДНК и автор на книгата „The Най-важната молекула.

Генетичен код

Сега оставаше само да разберем как работи тази молекула. Беше известно, че ДНК съдържа инструкции за синтеза на клетъчни протеини, които вършат цялата работа в клетката. Протеините са полимери, съставени от повтарящи се набори (последователности) от аминокиселини. Освен това има само двадесет аминокиселини. Животинските видове се различават един от друг по набора от протеини в техните клетки, тоест по различни аминокиселинни последователности. Генетиката твърди, че тези последователности се определят от гени, за които тогава се смяташе, че служат като градивни елементи на живота. Но никой не знаеше какво точно са гените.

Яснота внесе авторът на теорията за Големия взрив, физикът Георгий Гъмов, служител на университета Джордж Вашингтон (САЩ). Въз основа на модела на Уотсън и Крик за двуверижна ДНК спирала, той предположи, че генът е участък от ДНК, тоест определена последователност от връзки - нуклеотиди. Тъй като всеки нуклеотид е една от четирите азотни бази, просто трябва да разберем как четири елемента кодират двадесет. Това беше идеята за генетичния код.

В началото на 60-те години на миналия век беше установено, че протеините се синтезират от аминокиселини в рибозомите, нещо като „фабрика“ вътре в клетката. За да започне протеиновия синтез, ензимът се доближава до ДНК, разпознава определен регион в началото на гена, синтезира копие на гена под формата на малка РНК (нарича се шаблон), след което протеинът се отглежда в рибозомата от аминокиселини.

Те също така установиха, че генетичният код е трибуквен. Това означава, че една аминокиселина съответства на три нуклеотида. Кодовата единица се нарича кодон. В рибозомата информацията от иРНК се чете кодон по кодон, последователно. И всеки от тях отговаря на няколко аминокиселини. Как изглежда шифърът?

На този въпрос отговориха Маршал Ниренберг и Хайнрих Матеи от САЩ. През 1961 г. те за първи път докладват своите резултати на биохимичния конгрес в Москва. До 1967 г. генетичният код е напълно дешифриран. Оказа се, че е универсален за всички клетки на всички организми, което има далечни последици за науката.

Откриването на структурата на ДНК и генетичния код напълно пренасочи биологичните изследвания. Фактът, че всеки индивид има уникална ДНК последователност, революционизира съдебната медицина. Дешифрирането на човешкия геном даде на антрополозите изцяло нов метод за изследване на еволюцията на нашия вид. Наскоро изобретеният ДНК редактор CRISPR-Cas напредна значително в генното инженерство. Очевидно тази молекула съдържа решението на най-належащите проблеми на човечеството: рак, генетични заболявания, стареене.

УотсънИ Викпоказа това ДНКсе състои от две полинуклеотидни вериги. Всяка верига е усукана в спирала надясно и двете са усукани заедно, тоест усукани надясно около една и съща ос, образувайки двойна спирала.

Веригите са антипаралелни, тоест насочени в противоположни посоки. Всяка верига на ДНКсе състои от захарно-фосфатен скелет, по протежение на който основите са разположени перпендикулярно на дългата ос на двойната спирала; Противоположните основи на две противоположни нишки на двойна спирала са свързани с водородни връзки.

Захарно-фосфатни гръбнаци две нишки с двойна спираласа ясно видими на пространствения ДНК модел. Разстоянието между захарно-фосфатните гръбнаци на двете вериги е постоянно и равно на разстоянието, заето от двойка бази, т.е. една пуринова и една пиримидинова. Два пурина биха заели твърде много място, а два пиримидина биха заели твърде малко място, за да запълнят празнините между двете вериги.

По оста на молекулата съседни базови двойки са разположени на разстояние 0,34 nm една от друга, което обяснява периодичността, открита в рентгеновите дифракционни модели. Пълен оборот на спиралатапредставлява 3,4 nm, т.е. 10 базови двойки. Няма ограничения по отношение на последователността на нуклеотидите в една верига, но поради правилото за сдвояване на основите тази последователност в едната верига определя последователността на нуклеотидите в другата верига. Затова казваме, че двете нишки на двойната спирала се допълват една на друга.

УотсънИ Викпубликува съобщение за вашият ДНК моделв списание "" през 1953 г., а през 1962 г. те, заедно с Морис Уилкинс, получават Нобелова награда за тази работа. През същата година Кендрю и Перуц получават Нобелова награда за работата си по определяне на триизмерната структура на протеините, също извършена чрез рентгенов дифракционен анализ. Розалинд Франклин, която почина от рак преди връчването на наградите, не беше включена като носител, тъй като Нобеловата награда не се присъжда посмъртно.

За да се разпознае предложената структура като генетичен материал, беше необходимо да се покаже, че тя е способна: 1) да носи кодирана информация и 2) точно да възпроизвежда (репликира). Уотсън и Крик са били наясно, че техният модел отговаря на тези изисквания. В края на първия си документ те предпазливо отбелязват: „Не е убягнало от вниманието ни, че специфичното базово сдвояване, което постулирахме, веднага ни позволява да постулираме възможен механизъм за копиране на генетичен материал.“

Във втора статия, публикувана през 1953 г., те обсъждат генетичните последици от техния модел. Това откритие показа как изрична структураможе да се свърже с функция вече на молекулярно ниво, давайки мощен тласък на развитието на молекулярната биология.

Според химичната си структура ДНК ( Дезоксирибонуклеинова киселина) е биополимер, чиито мономери са нуклеотиди. Тоест ДНК е полинуклеотид. Освен това, ДНК молекулата обикновено се състои от две вериги, усукани една спрямо друга по спирална линия (често наричана „спирално усукана“) и свързани една с друга чрез водородни връзки.

Веригите могат да бъдат усукани както наляво, така и на дясната (най-често) страна.

Някои вируси имат едноверижна ДНК.

Всеки ДНК нуклеотид се състои от 1) азотна основа, 2) дезоксирибоза, 3) остатък от фосфорна киселина.

Двойна дясна спирала на ДНК

Съставът на ДНК включва следното: аденин, гуанин, тиминИ цитозин. Аденин и гуанин са пурини, а тимин и цитозин - към пиримидини. Понякога ДНК съдържа урацил, който обикновено е характерен за РНК, където замества тимина.

Азотните бази на една верига на ДНК молекула са свързани с азотните бази на друга строго в съответствие с принципа на комплементарност: аденин само с тимин (образуват две водородни връзки помежду си) и гуанин само с цитозин (три връзки).

Азотната основа в самия нуклеотид е свързана с първия въглероден атом на цикличната форма дезоксирибоза, което е пентоза (въглехидрат с пет въглеродни атома). Връзката е ковалентна, гликозидна (C-N). За разлика от рибозата, дезоксирибозата няма една от своите хидроксилни групи. Дезоксирибозният пръстен се образува от четири въглеродни атома и един кислороден атом. Петият въглероден атом е извън пръстена и е свързан чрез кислороден атом с остатък от фосфорна киселина. Също така чрез кислородния атом при третия въглероден атом се прикрепя остатъкът от фосфорна киселина на съседния нуклеотид.

Така в една верига на ДНК съседните нуклеотиди са свързани помежду си чрез ковалентни връзки между дезоксирибозата и фосфорната киселина (фосфодиестерна връзка). Образува се фосфатно-дезоксирибозен скелет. Насочени перпендикулярно на нея, към другата верига на ДНК, са азотните бази, които са свързани с основите на втората верига чрез водородни връзки.

Структурата на ДНК е такава, че гръбнаците на веригите, свързани с водородни връзки, са насочени в различни посоки (те казват „многопосочни“, „антипаралелни“). От страната, където единият завършва с фосфорна киселина, свързана с петия въглероден атом на дезоксирибозата, другият завършва със „свободен“ трети въглероден атом. Тоест скелетът на едната верига е обърнат с главата надолу спрямо другата. Така в структурата на ДНК веригите се разграничават 5" краища и 3" краища.

По време на репликация (удвояване) на ДНК, синтезът на нови вериги винаги протича от техния 5-ти край към третия, тъй като нови нуклеотиди могат да бъдат добавени само към свободния трети край.

В крайна сметка (индиректно чрез РНК), всеки три последователни нуклеотида в ДНК веригата кодират една протеинова аминокиселина.

Откриването на структурата на ДНК молекулата се случи през 1953 г. благодарение на работата на Ф. Крик и Д. Уотсън (което също беше улеснено от ранната работа на други учени). Въпреки че ДНК е била известна като химично вещество още през 19 век. През 40-те години на 20 век става ясно, че ДНК е носител на генетична информация.

Двойната спирала се счита за вторична структура на ДНК молекулата. В еукариотните клетки огромното количество ДНК се намира в хромозомите, където е свързано с протеини и други вещества, а също така е по-плътно опаковано.

Планът за раждане на човек е готов, когато репродуктивните клетки на майката и бащата се слеят в една. Тази формация се нарича зигота или оплодена яйцеклетка. Самият план за развитие на организма се съдържа в ДНК молекулата, разположена в ядрото на тази единична клетка. Именно в него са закодирани цветът на косата, височината, формата на носа и всичко останало, което прави човек индивидуален.

Разбира се, съдбата на човек зависи не само от молекулата, но и от много други фактори. Но гените, заложени при раждането, също влияят до голяма степен на съдбовния път. И те представляват последователност от нуклеотиди.

Всеки път, когато една клетка се дели, ДНК се удвоява. Следователно всяка клетка носи информация за структурата на целия организъм. Сякаш, когато се строи тухлена сграда, всяка тухла има архитектурен план за цялата конструкция. Гледате само една тухла и вече знаете от коя строителна конструкция е част.

Истинската структура на ДНК молекулата е демонстрирана за първи път от британския биолог Джон Гърдън през 1962 г. Той взе клетъчно ядро ​​от червата на жаба и с помощта на микрохирургични техники го трансплантира в яйцеклетка на жаба. Освен това в това яйце собственото му ядро ​​е било убито преди това чрез ултравиолетово облъчване.

От хибридното яйце израсна нормална жаба. Освен това той беше абсолютно идентичен с този, чието клетъчно ядро ​​беше взето. Това бележи началото на ерата на клонирането. И първият успешен резултат от клонирането сред бозайниците беше овцата Доли. Тя живя 6 години и след това почина.

Самата природа обаче също създава двойници. Това се случва, когато след първото делене на зиготата две нови клетки не остават заедно, а се раздалечават и всяка произвежда свой собствен организъм. Така се раждат еднояйчни близнаци. Техните ДНК молекули са абсолютно еднакви, затова близнаците си приличат толкова много.

На външен вид ДНК прилича на въжена стълба, усукана в дясна спирала. И се състои от полимерни вериги, всяка от които е образувана от 4 вида единици: аденин (A), гуанин (G), тимин (T) и цитозин (C).

Именно в тяхната последователност се съдържа генетичната програма на всеки жив организъм. Фигурата по-долу, например, показва нуклеотид Т. Неговият горен пръстен се нарича азотна основа, петчленният пръстен в долната част е захар, а отляво е фосфатна група.

Фигурата показва тиминов нуклеотид, който е част от ДНК. Останалите 3 нуклеотида имат подобна структура, но се различават по своята азотна основа. Горният десен пръстен е азотна основа. Долният петчленен пръстен е захар. Лява група PO - фосфат

Размери на ДНК молекула

Диаметърът на двойната спирала е 2 nm (nm е нанометър, равен на 10 -9 метра). Разстоянието между съседни базови двойки по спиралата е 0,34 nm. Двойната спирала прави пълен оборот на всеки 10 чифта. Но дължината зависи от организма, към който принадлежи молекулата. Най-простите вируси имат само няколко хиляди връзки. Бактериите имат няколко милиона от тях. А висшите организми имат милиарди от тях.

Ако разтегнете цялата ДНК, съдържаща се в една човешка клетка, в една линия, ще получите нишка с дължина приблизително 2 м. Това показва, че дължината на нишката е милиарди пъти по-голяма от нейната дебелина. За да си представите по-добре размера на една ДНК молекула, можете да си представите, че нейната дебелина е 4 см. Такава нишка, взета от една човешка клетка, може да обгърне земното кълбо по екватора. В този мащаб човек ще съответства на размера на Земята, а клетъчното ядро ​​ще нарасне до размера на стадион.

Правилен ли е моделът на Уотсън и Крик?

Като се има предвид структурата на ДНК молекулата, възниква въпросът как тя, имайки такава огромна дължина, се намира в ядрото. Тя трябва да лежи така, че да е достъпна по цялата си дължина за РНК полимераза, която чете желаните гени.

Как се извършва репликацията? В крайна сметка, след удвояване, двете допълващи се вериги трябва да се разделят. Това е доста трудно, тъй като веригите първоначално са усукани в спирала.

Такива въпроси първоначално породиха съмнения относно валидността на модела на Уотсън и Крик. Но този модел беше твърде специфичен и просто дразнеше специалистите със своята неприкосновеност. Затова всички се втурнаха да търсят недостатъци и противоречия.

Някои експерти предположиха, че ако злополучната молекула се състои от 2 полимерни вериги, свързани чрез слаби нековалентни връзки, тогава те трябва да се разминават при нагряване на разтвора, което може лесно да се провери експериментално.

Вторите специалисти се интересуват от азотни основи, които образуват водородни връзки помежду си. Това може да се провери чрез измерване на спектрите на молекулата в инфрачервената област.

Трети смятат, че ако азотните основи наистина са скрити вътре в двойната спирала, тогава би било възможно да се установи дали молекулата е засегната от тези вещества, които могат да реагират само с тези скрити групи.

Проведени са много експерименти и в края на 50-те години на 20 век става ясно, че моделът, предложен от Уотсън и Крик, е издържал всички тестове. Опитите да се опровергае не успяха.

Чиито мономерни единици са нуклиатиди.

Какво е ДНК?

Цялата информация за устройството и функционирането на всеки жив организъм се съдържа в кодирана форма в неговия генетичен материал. Основата на генетичния материал на организма е дезоксирибонуклеинова киселина (ДНК).

ДНКв повечето организми това е дълга двуверижна полимерна молекула. Последователност мономерни единици (дезоксирибонуклеотиди) в една от своите вериги съответства на ( допълващи се) дезоксирибонуклеотидни последователности в друга. Принцип на допълванеосигурява синтеза на нови ДНК молекули, идентични на оригиналните, когато се удвоят ( репликация).

Част от ДНК молекула, която кодира специфична черта - ген.

Гени– това са отделни генетични елементи, които имат строго определена нуклеотидна последователност и кодират определени характеристики на организма. Някои от тях кодират протеини, други само РНК молекули.

Информацията, съдържаща се в гените, кодиращи протеини (структурни гени), се дешифрира чрез два последователни процеса:

• Синтез на РНК (транскрипция): ДНК се синтезира в определен участък като върху матрица информационна РНК (mRNA).
• протеинов синтез (превод):По време на координираната работа на многокомпонентна система с участието транспортни РНК (тРНК), тРНК, ензимии различни протеинови факториизвършено протеинов синтез.

Всички тези процеси осигуряват правилния превод на генетичната информация, криптирана в ДНК, от езика на нуклеотидите на езика на аминокиселините. Аминокиселинна последователност на протеинова молекулаопределя неговата структура и функции.

ДНК структура

ДНК- Това линеен органичен полимер. неговият - нуклеотиди, които от своя страна се състоят от:

В този случай фосфатната група е прикрепена към 5′ въглероден атоммонозахариден остатък, а органичната основа - до 1′-атом.

Има два вида бази в ДНК:

Структурата на нуклеотидите в ДНК молекулата

IN ДНКпредставен монозахарид 2'-дезоксирибоза, съдържащ само 1 хидроксилна група (ОН), и в РНК - рибозаимайки 2 хидроксилни групи (ОХ).

Нуклеотидите са свързани един с друг фосфодиестерни връзки, докато фосфатната група 5′ въглероден атомедин нуклеотид, свързан с 3'-OH-група на дезоксирибозатасъседен нуклеотид (Фигура 1). В единия край на полинуклеотидната верига има Z'-OH-група (Z'-край),а от друга - 5'-фосфатна група (5' край).

Нива на структурата на ДНК

Прието е да се разграничават 3 нива на ДНК структура:

• първичен;
• втори;
• третичен

Първична структура на ДНКе последователността на подреждането на нуклеотидите в полинуклеотидната верига на ДНК.

Вторична структура на ДНКстабилизира между комплементарни базови двойки и представлява двойна спирала от две антипаралелни вериги, усукани надясно около една и съща ос.

Общият оборот на спиралата е 3.4nm, разстояние между веригите 2nm.

Третична структура на ДНК - свръхспециализация на ДНК.Двойната спирала на ДНК може да претърпи допълнителна спирализация на някои места, за да образува суперспирала или отворена кръгла форма, често причинена от ковалентно свързване на техните отворени краища. Свръхнавитата структура на ДНК осигурява икономичното опаковане на много дълга ДНК молекула в хромозома. Така в удължена форма дължината на ДНК молекулата е 8 см, а под формата на суперспирала се вписва в 5 nm.

Правилото на Чаргаф

Правилото на Е. Чаргафе модел на количественото съдържание на азотни основи в ДНК молекула:

1. В ДНК молни фракциипуриновите и пиримидиновите бази са равни: A+Ж = ° С+ Т или (А +Ж)/(° С + T)=1.
2. В ДНК брой бази с аминогрупи (A +° С) равно на брой бази с кето групи (Ж+ Т):A+° С= Ж+ Т или (А +° С)/(Ж+ T)= 1
3. Правилото за еквивалентност, което е: A=T, G=C; A/T = 1; G/C=1.
4. Нуклеотиден състав на ДНКв организми от различни групи е специфичен и характерен коефициент на специфичност: (G+C)/(A+T).При висшите растения и животни коефициент на специфичностпо-малко от 1 и леко се колебае: от 0,54 преди 0,98 , при микроорганизмите е повече от 1.

ДНК модел на Watson-Crick

B 1953 Джеймс Уотсъни Франсис Вик, въз основа на рентгенов дифракционен анализ на ДНК кристали, стигна до извода, че нативна ДНКсе състои от две полимерни вериги, образуващи двойна спирала (Фигура 3).

Полинуклеотидните вериги, навити една върху друга, се държат заедно водородни връзки, образувани между комплементарните бази на противоположни вериги (Фигура 3). При което аденинобразува двойка само с тимин, А гуанин- С цитозин. Основна двойка А-Тсе стабилизира две водородни връзки, и двойка G-C - три.

Дължината на двойноверижната ДНК обикновено се измерва с броя на комплементарните нуклеотидни двойки ( П.н.). За ДНК молекули, състоящи се от хиляди или милиони нуклеотидни двойки, се вземат единици t.b.s.И т.т.съответно. Например, ДНК на човешка хромозома 1 е една двойна спирала с дължина 263 м.б..

Захарен фосфатен гръбнак на молекулата, който се състои от свързани фосфатни групи и дезоксирибозни остатъци 5'-3'-фосфодиестерни връзки, образува „страничните стени на вита стълба“ и двойките основи А-ТИ G-C- неговите стъпки (Фигура 3).

Фигура 3: ДНК модел на Watson-Crick

Молекулни вериги на ДНК антипаралелен: един от тях има посока 3'→5', друго 5'→3'. В съответствие със принципът на допълване, ако една от веригите съдържа нуклеотидна последователност 5-TAGGCAT-3', тогава в комплементарната верига на това място трябва да има последователност 3′-ATCCGTA-5′. В този случай двуверижната форма ще изглежда така:

• 5′-TAGGCAT-3′
• 3-ATCCGTA-5′.

В такъв запис 5′ край на горната веригавинаги се поставя отляво и 3′ край- на дясно.

Носителят на генетична информация трябва да отговаря на две основни изисквания: възпроизвежда (репликира) с висока точностИ определят (кодират) синтеза на протеинови молекули.

ДНК модел на Watson-Crickнапълно отговаря на тези изисквания, защото:

• Съгласно принципа на комплементарността, всяка ДНК верига може да служи като шаблон за образуване на нова комплементарна верига. Следователно, след един кръг се образуват две дъщерни молекули, всяка от които има същата нуклеотидна последователност като оригиналната ДНК молекула.
• нуклеотидната последователност на структурния ген уникално определя аминокиселинната последователност на протеина, който кодира.

1. Една човешка ДНК молекула съдържа около 1,5 гигабайта информация. В същото време ДНК на всички клетки на човешкото тяло заема 60 милиарда терабайта, които се съхраняват в 150-160 грама ДНК.
2. Международен ден на ДНКчества на 25 април. На този ден през 1953г Джеймс УотсънИ Франсис Крийкпубликувано в списание Природатанеговата статия, озаглавена "Молекулярна структура на нуклеиновите киселини" , където е описана двойната спирала на ДНК молекулата.

Библиография: Молекулярна биотехнология: принципи и приложения, Б. Глик, Дж. Пастернак, 2002 г.