مرگ برنامه ریزی شده سلولی الکساندر شتیل

برای محدود کردن نتایج جستجو، می‌توانید با مشخص کردن فیلدهایی که باید جستجو کنید، درخواست خود را اصلاح کنید. لیست فیلدها در بالا ارائه شده است. مثلا:

می توانید همزمان در چندین زمینه جستجو کنید:

عملگرهای منطقی

عملگر پیش فرض است و.
اپراتور وبه این معنی که سند باید با تمام عناصر گروه مطابقت داشته باشد:

تحقیق و توسعه

اپراتور یابه این معنی که سند باید با یکی از مقادیر موجود در گروه مطابقت داشته باشد:

مطالعه یاتوسعه

اپراتور نهاسناد حاوی این عنصر را مستثنی می کند:

مطالعه نهتوسعه

نوع جستجو

هنگام نوشتن یک پرس و جو، می توانید روش جستجوی عبارت را مشخص کنید. چهار روش پشتیبانی می شود: جستجو با در نظر گرفتن مورفولوژی، بدون مورفولوژی، جستجوی پیشوند، جستجوی عبارت.
به طور پیش فرض، جستجو با در نظر گرفتن مورفولوژی انجام می شود.
برای جستجوی بدون مورفولوژی، فقط یک علامت "دلار" را در مقابل کلمات موجود در عبارت قرار دهید:

$ مطالعه $ توسعه

برای جستجوی پیشوند، باید یک ستاره بعد از پرس و جو قرار دهید:

مطالعه *

برای جستجوی یک عبارت، باید پرس و جو را در دو نقل قول قرار دهید:

" تحقیق و توسعه "

جستجو بر اساس مترادف

برای گنجاندن مترادف یک کلمه در نتایج جستجو، باید یک هش قرار دهید " # قبل از یک کلمه یا قبل از یک عبارت داخل پرانتز.
هنگامی که برای یک کلمه اعمال می شود، حداکثر سه مترادف برای آن پیدا می شود.
هنگامی که به یک عبارت پرانتزی اعمال می شود، در صورت یافتن یک کلمه مترادف به هر کلمه اضافه می شود.
با جستجوی بدون مورفولوژی، جستجوی پیشوند یا جستجوی عبارت سازگار نیست.

# مطالعه

گروه بندی

برای گروه بندی عبارات جستجو باید از براکت استفاده کنید. این به شما امکان می دهد منطق بولی درخواست را کنترل کنید.
به عنوان مثال، شما باید درخواستی ارائه دهید: اسنادی را بیابید که نویسنده آنها ایوانف یا پتروف است و عنوان حاوی کلمات تحقیق یا توسعه است:

جستجوی تقریبی کلمه

برای جستجوی تقریبی باید یک tilde قرار دهید " ~ " در پایان یک کلمه از یک عبارت. به عنوان مثال:

برم ~

هنگام جستجو کلماتی مانند "برم"، "رم"، "صنعتی" و ... یافت می شود.
همچنین می توانید حداکثر تعداد ویرایش های ممکن را مشخص کنید: 0، 1 یا 2. به عنوان مثال:

برم ~1

به طور پیش فرض، 2 ویرایش مجاز است.

معیار نزدیکی

برای جستجو بر اساس معیار مجاورت، باید یک tilde قرار دهید " ~ " در پایان عبارت. به عنوان مثال، برای یافتن اسنادی با کلمات تحقیق و توسعه در 2 کلمه، از عبارت زیر استفاده کنید:

" تحقیق و توسعه "~2

ارتباط عبارات

برای تغییر ارتباط عبارات فردی در جستجو، از علامت " استفاده کنید ^ "در پایان عبارت، و به دنبال آن سطح ارتباط این عبارت با دیگران است.
هر چه سطح بالاتر باشد، عبارت مرتبط تر است.
به عنوان مثال، در این عبارت، کلمه "تحقیق" چهار برابر بیشتر از کلمه "توسعه" مرتبط است:

مطالعه ^4 توسعه

به طور پیش فرض، سطح 1 است. مقادیر معتبر یک عدد واقعی مثبت هستند.

جستجو در یک بازه زمانی

برای نشان دادن فاصله زمانی که مقدار یک فیلد باید در آن قرار گیرد، باید مقادیر مرزی را در پرانتز مشخص کنید که توسط عملگر از هم جدا شده اند. به.
مرتب سازی واژگانی انجام خواهد شد.

چنین پرس و جو نتایجی را با نویسنده ای که از ایوانف شروع شده و با پتروف ختم می شود به دست می دهد، اما ایوانف و پتروف در نتیجه گنجانده نمی شوند.
برای گنجاندن یک مقدار در یک محدوده، از براکت مربع استفاده کنید. برای حذف یک مقدار، از بریس های فرفری استفاده کنید.

چکیده پایان نامهدر پزشکی با موضوع مقاومت دارویی سلول های تومور با واسطه P-گلیکوپروتئین: مکانیسم های تشکیل فوری و رویکردهای غلبه بر

به عنوان نسخه خطی

شتیل الکساندر آلبرتوویچ

مقاومت دارویی سلول‌های تومور با واسطه P-Glycoprotein: مکانیسم‌های اورژانسی و رویکردهایی برای غلبه بر

مسکو 2003

این کار در موسسه دولتی تحقیقات سرطان شناسی روسیه به نام آکادمی علوم پزشکی روسیه N.N

مخالفان رسمی:

دکترای علوم پزشکی، پروفسور ع.م. گارین،

دکترای علوم زیستی، پروفسور، دانشمند ارجمند فدراسیون روسیه A.N.

دکترای علوم زیستی، پروفسور N.S. سرگیوا،

موسسه پیشرو: آکادمی پزشکی روسیه آموزش تحصیلات تکمیلی وزارت بهداشت فدراسیون روسیه.

دفاع از پایان نامه در تاریخ 4 آذر 1382 در جلسه شورای تخصصی علمی D.001.017.01 در

RONC به نام. آکادمی علوم پزشکی روسیه N.N.Blokhin به آدرس: 115478، مسکو، Kashirskoye Shosse، 24.

پایان نامه را می توان در کتابخانه مرکز تحقیقات سرطان روسیه به نام آن یافت. N.N. RAMS بلوخین.

دبیر علمی شورای تخصصی دانشگاه

دکترای علوم پزشکی

Yu.V. شیشکین

ویژگی های کلی کار مرتبط بودن موضوع

I. مقاومت چند دارویی سلول های تومور: مکانیسم های بیولوژیکی و اهمیت در انکولوژی.

علیرغم پیشرفت های قابل توجه در فارماکولوژی، از جمله توسعه فن آوری برای ایجاد داروهایی با خواص مورد انتظار، موفقیت شیمی درمانی برای تومورها توسط مهمترین ویژگی سیستم های زنده - توانایی پاسخ به تغییرات در محیط خارجی محدود شده است. یکی از مظاهر چنین کشسانی، ایجاد مقاومت سلول های تومور در برابر داروهای مورد استفاده در شیمی درمانی است. شیوع گسترده و ماهیت طولانی مدت و پایدار سازگاری سلولی با تأثیرات خارجی نشان می دهد که غلبه بر مقاومت دارویی ممکن است نه تنها با جستجوی داروهای مؤثرتر مرتبط باشد: احتمالاً هیچ دارویی وجود ندارد که سلول ها قادر به ایجاد مقاومت در برابر آن نباشند. تنها روشن کردن مکانیسم‌های بیولوژیکی مقاومت در برابر انواع مختلف استرس، دوباره به توسعه استراتژی‌هایی برای غلبه بر مقاومت دارویی کمک می‌کند، شرط لازم برای افزایش اثربخشی درمان بیماران سرطانی.

مقاومت چند دارویی (MDR) تومورها - حفظ زنده ماندن سلول های تومور در پاسخ به تأثیر داروهای مختلف - یکی از دلایل اصلی پیشرفت بیماری است: تومور بدون توجه به ترکیبی از داروهای مختلف، به شیمی درمانی حساس نیست. مواد مخدر پدیده MDR یک ویژگی طولانی مدت و پایدار دارد: مکانیسم های مقاومت در طول نسل های سلولی به ارث می رسند. بنابراین، MDR یکی از عوامل کلیدی در پیشرفت تومور است.

دو نوع اصلی مقاومت سلولی در برابر سموم وجود دارد. اولیه g.e. مقاومت مشاهده شده قبل از قرار گرفتن در معرض شیمی درمانی) به دلیل بیان مکانیسم های دفاعی در طول پیشرفت تومور است. بله فعال سازی

مکانیسم‌های ضد آپوپتوزی که به عوامل ایمنی ایجاد مقاومت می‌کنند ممکن است با مقاومت دارویی مرتبط باشند. مقاومت ثانویه (اکتسابی) در سلول هایی که در معرض استرس قرار دارند رخ می دهد. قبل از این تأثیرات، مکانیسم‌های محرک در چنین سلول‌هایی ضعیف بیان می‌شوند یا وجود ندارند. سلول ها پس از درمان با یک سم زنده می مانند، در برابر بسیاری از مواد مقاومت می کنند - MDR (Riordan, Ling, 1985). انتخاب بیشتر فنوتیپ اکتسابی را در طول نسل‌های سلولی تثبیت می‌کند.

مهمترین مکانیسم MDR کاهش تجمع سموم در سلول، به دلیل دفع مواد به محیط بین سلولی است. چنین انتقالی توسط پروتئین یکپارچه غشای پلاسمایی P-glycoprotein (Pgp) به دلیل انرژی هیدرولیز ATP انجام می شود (Juliano, Ling, 1984). مقاومت بسیاری از انواع تومورها به درمان (لین و همکاران، 1995؛ استاوروسکایا و همکاران، 1998).

II. توسعه MDR در سلول های تومور: مکانیسم های بیولوژیکی به عنوان اهداف پیشگیری

منطقی است که فرض کنیم افزایش مقدار mRNA MDRI به دلیل تکثیر این ژن است. این مکانیسم MDR در رده های سلولی کشت شده انتخاب شده برای بقا در حضور سموم شناسایی شده است (رونینسون، 1991). با این حال، هنگام تجزیه و تحلیل تومورهای انسانی، تکثیر ژن MDRI در تومورهای اولیه یا در نئوپلاسم‌ها پس از درمان شناسایی نشد. علت احتمالی MDR بالینی، بیان بیش از حد MDRI و Pgp با ساختار ژنی بدون تغییر است (حفظ تعداد کپی و توالی نوکلئوتیدی)، یعنی. دارایی اپی ژنتیکی! فنوتیپ در کشت سلول‌های تومور انسانی، افزایش سطح mRNA MDRI و مقدار Pgp پس از یک درمان با داروی شیمی‌درمانی مشاهده شد.

از نظر ساختار شیمیایی و مکانیسم های عمل متفاوت است (چایلون و اروین، 1993). شواهدی مبنی بر تجمع mRNA ژن MOI 1 در متاستازهای سرطان در بافت ریه، 20-50 دقیقه پس از شروع تزریق ریه حین عمل با دوکسوروبیسین به دست آمد (ابولهدا و همکاران، 1999). این نتایج احتمال فعال‌سازی اپی ژنتیک MDR را در موقعیت‌های تجربی و بالینی نشان می‌دهد: افزایش mRNA MDR1 و Pgp در تومورها می‌تواند بدون تقویت ژن MDR1 رخ دهد.

این نوع تنظیم بیولوژیکی - فعال سازی فوری فنوتیپ - شامل القای رونویسی ژن (ژن ها) کد کننده فنوتیپ مربوطه، و/یا کنترل پس از انتقال (تثبیت NK، تنظیم سنتز پروتئین و عملکرد در رابطه) است از نظر MDR، این نوع تنظیم به معنای امکان القای ژن MYR (همجوشی سلولی و توسعه نسبتاً سریع مقاومت در سلول‌های گوش در پاسخ به استرس است. القاپذیری ژن MYR 1 توسعه مسیرهای سیگنالینگ را از محیط سلولی به سمت هسته چنین مسیرهایی می تواند مکانیسم های سیگنال دهی کننده استرس باشد: پروتئین کیناز C KS)، فسفولیپازها و Ca2+ داخل سلولی، پروتئین کینازهای فعال شده با میتوژن، فاکتور هسته ای کاپا (NkB). ژن و رونوشت KYR فعال شدن فشرده سازی ژن را تضمین می کند.

مطالعه مقررات MDR یک جنبه عملی اساسی نیز دارد. مهار این مکانیسم ها از طریق مداخلات دارویی و/یا درمانی از ایجاد MDR در طول میوتراپی جلوگیری می کند.

III. غلبه بر MDR تشکیل شده سلول های تومور.

اگر مسدود کردن سیگنال‌های فعال‌کننده ژن MYR می‌تواند از تشکیل MDR در سلول‌های حساس اولیه جلوگیری کند، پس

این رویکرد برای غلبه بر مقاومت از قبل شکل گرفته قابل اجرا نیست. روش سنتی مبارزه با MDR ثانویه استفاده از تعدیل کننده های Pgp در ترکیب با سیتواستاتیک است (Lehne, 2000). با این حال، استفاده از مهارکننده های Pgp به دلیل عوارض جانبی (اختلالات ریتم قلب، عدم تعادل ایمنی) محدود می شود. به همان اندازه مهم، اثربخشی ترکیبات تعدیل کننده + سیتواستاتیک ممکن است به دلیل مسدود کردن حداقل برخی مکانیسم های مرگ سلولی در طول انتخاب MDR کاهش یابد.

غلبه بر MDR تشکیل شده در صورت رعایت دو شرط قابل دستیابی است: 1) غلظت دارو باید برای فعال کردن مکانیسم های افکگوری مرگ سلولی کافی باشد، 2) عملکرد این مکانیسم ها باید در سلول های دارای MDR حفظ شود. شرط اول در صورتی انجام می شود که دارو بر سد Pgp غلبه کند. با این حال، لازم است ثابت شود که دستیابی به غلظت بحرانی درون سلولی عامل برای فعال کردن مرگ سلولی که در برابر بسیاری از تأثیرات مقاوم است، کافی است. مکانیسم‌های بقا که در سلول‌های مقاوم عمل می‌کنند باید به عنوان اهدافی برای از بین بردن دومی عمل کنند.

برای اجرای شرط دوم، رویکردهایی با هدف لیز سلول های مقاوم به عنوان مکانیزمی برای القای مرگ آنها امیدوارکننده به نظر می رسد. واکسیناسیون موش‌ها با سلول‌های میلوم سینژنیک ترانسفکت شده با cDNA برخی از سیتوکین‌ها منجر به ایجاد یک پاسخ ایمنی با واسطه لنفوسیت T سیتوتوکسیک (CTL) و رد تومور تلقیح شده در حیوانات ایمن‌شده می‌شود (Dranoff و همکاران، 1993؛ Levitsky et al. .، 1996). CTL ها سلول ها را با استفاده از گرانزیم B و پرفورین لیز می کنند. از آنجایی که گرانزیم B کاسپاز 3 را فعال می کند، یکی از عوامل دیستال آپوپتوز، و پرفورین باعث آسیب اولیه به غشای پلاسمایی (نکروز) می شود، می توان امیدوار بود که CTL ها در صورت مسدود شدن مکانیسم های مرگ پروگزیمال موثر باشند. ایجاد پیوندهای دیستال آپوپتوز در ترکیب با نکروز

منجر به مرگ سلول های مقاوم به داروهای ضد تومور می شود که باعث مرگ برنامه ریزی شده سلولی می شوند.

فرمول بندی مسئله

MDR یک پدیده بالینی نامطلوب است که غلبه بر آن مستلزم آگاهی از مکانیسم های توسعه آن و راه های وقوع مرگ سلولی است. ابتدا، مطالعه مکانیسم‌های تشکیل MDR در سلول‌های انسانی MDR1/Pgp منفی ضروری است. ثانیا، تجزیه و تحلیل فرآیندهای مرگ که در سلول‌های MDR عمل می‌کنند، پایه‌ای را برای غلبه بر مقاومت در شرایطی که MDR ثانویه تشکیل شده است ایجاد می‌کند.

هدف از این مطالعه ایجاد مکانیسم‌های تشکیل فوری غدد لنفاوی در سلول‌های تومور انسانی و ایجاد رویکردهایی برای غلبه بر این جهنم مقاومت است.

1. بهینه سازی مدل ها برای توسعه MDR در کشت سلول های تومور انسانی در پاسخ به اثرات داروهای شیمی درمانی و آگونیست های تجربی و آنتاگونیست های مکانیسم های سیگنالینگ.

2. تعیین مکانیسم اصلی برای توسعه فوری MDR هنگامی که سلول ها با عوامل ضد تومور درمان می شوند: تقویت ژن MDR، انتخاب سلول های Pgp مثبت، یا القای de novo MDR.

3. مسیرهای انتقال سیگنال درون سلولی را که فعال شدن MDR - پروتئین کیناز C، فسفولیپاز C، Ca2+ داخل سلولی، پروتئین کینازهای فعال شده با میتوژن، NFkB را تنظیم می کند، کاوش کنید.

4. شناسایی نقش فعال سازی رونویسی و تنظیم پس از رونویسی (پایداری mRNA) بیان ژن MDR در توسعه حاد MDR در پاسخ به اثرات شیمی درمانی.

5. با ترکیب داروهای شیمی درمانی با مسدود کننده های مسیرهای سیگنالینگ فعال کننده CR و مهارکننده های رونویسی ژن، راه هایی برای جلوگیری از ایجاد MDR در سلول های تومور ایجاد کنید.

6. برای مطالعه سینتیک فعال‌سازی کاسپ‌های آغازگر و عامل، تغییرات پتانسیل گذرنده میتوکندری، برش پروتئولیتیک پلی (ADP) ریبوز پلیمراز، تکه تکه شدن DNA بین هسته‌ای و یکپارچگی غشای پلاسمایی در سلول‌های والدین و انواع با MDR هنگام درمان. با دارویی که توسط P-گلیکوپروتئین منتقل نمی شود.

7. از واکسیناسیون با بیان سلول های تومور استفاده کنید

سیتوکین ها برای ایجاد یک پاسخ ایمنی در برابر سلول های MDR. »

مقررات ارائه شده برای دفاع.

1. تشکیل MDR با واسطه Pgp - یک پاسخ فوری سلولی به بسیاری از تأثیرات - با فعال سازی اپی ژنتیکی ژن MDR 1 انجام می شود. و با مهار کننده های این سیگنال ها قابل پیشگیری است.

2. غلبه بر MDR با واسطه Pgp ممکن است با یک اثر هدفمند بر غشای پلاسمایی سلول های مقاوم همراه باشد. Pgp از سلول ها در برابر اختلال در یکپارچگی غشای پلاسما - نکروز محافظت نمی کند.

دانش علمی

1. برای اولین بار، ایده تشکیل MDR به عنوان یک پاسخ فوری سلولی به یک محرک بیرونی اثبات شده است.

2. برای اولین بار، مکانیسم توسعه یک فنوتیپ مقاومت دارویی خاص، MDR با واسطه P£p، به طور مفصل مورد مطالعه قرار گرفته است: فعال سازی اپی ژنتیکی ژن MYR 1 که این پروتئین را کد می کند.

3. برای اولین بار، مدلی از فعال سازی فوری ژن MHS ایجاد شده است،

همراه با کسب یک فنوتیپ پایدار از MDR با واسطه Pgp در سلول های تومور انسانی کشت شده. 1. مسیرهای انتقال سیگنال، مکانیسم های فعال سازی رونویسی و تنظیم پس از رونویسی ژن MOK 1 در سلول های در معرض داروهای ضد تومور شناسایی شده است. 5. برای اولین بار، کلاس هایی از مواد دارویی - مسدود کننده های انتقال سیگنال درون سلولی - برای جلوگیری از تشکیل MDR با واسطه RCR در سلول های تومور مشخص شده اند. 5. برای اولین بار، مکانیسم‌های مرگ در سلول‌ها با MDR با واسطه PgP مورد مطالعه قرار گرفت و رویکردی برای غلبه بر مقاومت ایجاد شد که شامل آسیب اولیه به یکپارچگی غشای پلاسمایی بود.

ارزش عملی

1. توسعه روش هایی برای جلوگیری از توسعه فوری MDR با واسطه Pgp در سلول های تومور کشت شده در هنگام قرار گرفتن در معرض داروهای شیمی درمانی.

2. آزمایشات پیش بالینی واکسن های دستکاری شده ژنتیکی اصلاح شده برای غلبه بر MDR.

تایید کار.

این پایان نامه در 30 ژوئن 2003 در کنفرانس مشترک گروه های ژنتیک سلول های تومور، سیتوژنتیک با گروه ژنتیک مولکولی، انکوژن های ویروسی و سلولی، غدد درون ریز مولکولی، ایمنی ضد تومور، فارماکولوژی بیوشیمیایی، تحقیقات پزشکی، تشخیص تجربی و بیوتراپی مورد بحث قرار گرفت. از تومورها؛ گروه های Schmunology، هماتولوژی، شیمی درمانی، فارماکولوژی بالینی، روش های درمان پیشرفته مرکز تحقیقات سرطان روسیه به نام. N.N.Blokhsha RAMS.

مواد اصلی پایان نامه در کنفرانس های زیر ارائه شد: دومین سمپوزیوم بین المللی "مقاومت دارویی سیلواستاتیک" (K Germany, 1991). کنفرانس گوردون "پیشرفت در شیمی درمانی" (نیویورک، لندن، ایالات متحده آمریکا، 1994); "سم شناسی مولکولی" (کوه مس، ایالات متحده آمریکا، 1995); "پاسخ های ژنومی القایی" (استیونسون، ایالات متحده آمریکا، 1996)؛ "اسیدهای نوکلئیک - یکپارچه سازی تشخیص مولکولی و درمان" (سان دیگو، ایالات متحده آمریکا، 1996). کنفرانس های سالانه انجمن تحقیقات سرطان آمریکا (1994-2001): کنگره های 6 و 7 "پیشرفت ها در سرطان شناسی"، (Hersonissos، یونان، 2001،2002). "ساختار و عملکرد هسته سلول" (سنت پترزبورگ، 2002)، و همچنین در سمینارها در Oncotech, Inc. (ایروین، ایالات متحده آمریکا، 1996)، موسسه سالک (لاجولا، ایالات متحده آمریکا، 1997)، مرکز سرطان لی موفیت (تامپا، ایالات متحده آمریکا، 1997)، آزمایشگاه جکسون (بار هاربر، ایالات متحده آمریکا، 1997)، مرکز سرطان اسلون-کتگرینگ، نیویورک ] ایالات متحده آمریکا، 1999)، دانشگاه های کپنهاگ (2002)، اینسبروک (2002) و گرونینگز! (2003)، دانشگاه دولتی مسکو. M.V. Lomonosov (2002)، موسسه تحقیقاتی آسیب شناسی تجربی، انکولوژی و رادیو بیولوژی به نام. R.E. Kavetsky (کیف، 2002).

انتشارات.

ساختار و محدوده پایان نامه.

پایان نامه در 181 صفحه تایپی ارائه شده است و مشتمل بر مقدمه فصول «بررسی ادبیات»، «مواد و روش های تحقیق»، «نتایج تحقیق» (دو قسمت)، بحث و نتیجه گیری است. این اثر شامل 44 شکل و 6 جدول است. مطالب کتابشناختی شامل پیوندهایی به 270 منبع ادبی است.

مواد و روش های تحقیق.

حیوانات آزمایشگاهی و خطوط سلولی موش Balb/c استفاده شد. برای آزمایش‌هایی روی فعال‌سازی MDR، از رده‌های سلولی انسانی H9 (لوسمی سلول T)، K562 (لوسمی پرومیلوسیتیک)، SW استفاده کردیم.<

(سرطان روده بزرگ)، و همچنین sublinigo K562Í/S9، که در آن Pgp بدون انتخاب سلول ها برای مقاومت در برابر سموم بیان می شود (Mechetner et al., 1997). برای آزمایش ایجاد ایمنی ضد توموری، خطوط میلوما MPC11، J558 و S194 استفاده شد. برای به دست آوردن خطوط فرعی با MDR، انتخاب گام به گام سلول های MPC11 برای مقاومت به دوکسوروبیسین انجام شد. زیر شاخه های مستقل MPC1 lDoxlO-1 و MPCllDoxlO-2 در حضور 100 نانومولار اسید دوکسوروبیک تکثیر شدند.

مطالعه MDR: RNA ژن MDRI، کمیت و عملکرد Pgp.

برای فعال کردن MDR ، ما از Liggosin-1P-Arabinofuranoside (سیتوزار ، ARA C) ، Doxorubicin ، Vincristine ، Nocodazole ، Blsomycin ، Sphingomistoy ، Ca2+ ionophore A23187 ، Thapsigargin ، 2-deoxybolustin ، trichoxyglustina ، Trichoxyglustralglustralglustralglustralglustralglustralglustralglustralglusاستفاده کردیم. 13 -استات (TPA). برای مهار فعال شدن MDR، اکتینومایسین D، α-آمانیتین، اکتیناسیدین 743 (ET743)، چلرترین، بیس ایندولیل مالیمید I، کالفوستین C، BARTA/AM، TMB-8، پیرولیدیندپتوکاربامات (PDTC)، کتینونیل-Lrom TPCMK)، سالیسیلات سدیم، اسید سالیسیلیک، PD98095. مهارکننده‌ها به مدت 30 دقیقه به سلول‌ها اضافه شدند. قبل از افزودن فعال کننده ها سطح MDR\ mRNA در سلول‌ها توسط واکنش زنجیره‌ای پلیمراز رونویسی معکوس (PCR) (نونان و همکاران، 1990؛ Shtil و همکاران، 2000) با استفاده از آغازگرها: MDRV مورد مطالعه قرار گرفت. مستقیم: 5"-ССС ATS ATT GCA ATA GCA GG-3"؛ معکوس: 5"-GTT CAA ACT TCT GCT SCT GA-3". طول محصول 167 جفت باز p2-microglobulin: مستقیم: 5"-ASS CCC ACT GAA AAA GAT GA-3"; معکوس: 5"-ATC TTC AAA CCT CCA TGA TG-3". طول محصول 120 جفت باز

مقدار Pgp و عملکرد انتقال آن توسط فلوسیتومتری با آنتی بادی انحصاری UIC2 تعیین شد (Mechetner et al., 1997). فلورسئین ایزوتیوسیانات (FITC) آنتی بادی ضد IgG موش کونژوگه به ​​عنوان آنتی بادی ثانویه استفاده شد. برای آموزش Pgp-

انتقال وابسته، بسترهای فلورسنت Pgp-rhodamine 123 (در آزمایشات بر روی القای MDR) (Neyfakh, 1988) و کلسین استروکسی متیل استر (در آزمایشات با سلول های میلوما) (Holló et al., 1996; Shtü et al., 1999) استفاده شد.

سنجش مرگ سلولی بقای سلولی در حضور سموم با کاهش 3-(4،5-دی متیل تیازول-2-یل)-5-(3-کربوکسی متوکسی فنیل)-2-(4-سولفوفنیل)-2P-تترازولیوم (آزمون MTT) مورد مطالعه قرار گرفت. (Mossman، 1983؛ Sidorova و همکاران، 2002). ضمیمه های V-FITC برای تعیین تعداد سلول های آپوپتوز استفاده شد. سلول های نکروزه با پروپیدیوم یدید (PI) شناسایی شدند. پتانسیل الکتریکی گذرنده میتوکندری توسط فلورسانس پروب JC-1 تعیین شد (زمزایر و همکاران، 1997). برای تعیین تکه تکه شدن DNA ژنومی، سلول ها در بافر حاوی سیترات سدیم، NP-40، RNase A و PI لیز شدند. سوسپانسیون بر روی یک فلوسایتومتر آنالیز شد (Shtil et al., 1999؛ DNA تکه تکه شده در ناحیه زیر Gl شناسایی شد. برای مطالعه تشکیل اشکال آزاد اکسیژن در سلول ها، استر دی کلروفلورسین دی استات (DCFDA) استفاده شد که نفوذ می کند. سیتوپلاسم و فلورسانس پس از اکسیداسیون توسط متابولیت های داخل سلولی.

فعالیت PKC در سیتوزول و فراکسیون ذرات با روش رادیواکتیو با فسفوریلاسیون پروتئین پایه میلین پس از لیز سلولی و جداسازی فراکسیون ها با سانتریفیوژ تعیین شد (Shtil et al. 2000).

فعالیت پروتئین کینازهای فعال شده با میتوژن ERK1/2 و JNK1 با فسفوریلاسیون سوبستراهای خاص (پروتئین پایه میلین و c-Jun) پس از لیز سلولی و رسوب ایمنی کینازها تعیین شد (و همکاران، 1996).

پلاسمیدهای گزارشگر، ناقل بیان، ترانسفکشن.

سلول های K562 و B\Y620 با یک پلاسمید حامل ناحیه ای از پروموتر تروگزیمال ژن MOL 1 -1202/118 nt ترایفکت شدند. نسبت به محل شروع رونویسی، در وکتور pOB2b کلون شده است. Pge/1y لوسیفراز به عنوان پروتئین گزارشگر خدمت می کرد. برای آزمایش ساده لوحی transactivation NakB، سلول ها با یک سازه پروموتر گزارشگر حاوی محل های اتصال برای OTkB (5xNκB-lgocyferase) ترایفکت شدند. برای سرکوب فعالیت لوسیفراز، سلول ها به طور همزمان با ساکمید حامل لوسیفراز اجاره ای تحت کنترل پروموتر SIV40 تزریق شدند. در برخی آزمایش‌ها، فعالیت لوسیفراز Pne]\y با غلظت کل SEL در سلول‌های ترانسفکت شده مرتبط بود. برای ترانسفکشن، ما از اسپوفکنش یا لیپوفکتامین و همچنین از "تفنگ ژن" (برای سلول های میلوما) NabilleV1"cb e [a!., 1996) استفاده کردیم. وکتورهایی که زیر واحدهای p50 و p65 κB را تحت کنترل پروموتر BU40 بیان می کنند. برای هم ترانسفکشن با انگل 1202/118-لوسیفراز استفاده شد.

ایمن سازی موش ها سلول‌های MPC11 و زیرخط‌های MDR تحت تابش قرار گرفتند (40 ~r)، با پلاسمید حامل cDNA فاکتور تحریک‌کننده شوری گرانولوسیت-ماکروفاژ-ماکروفاژ (GM-CSF) تریفکت شدند و به صورت زیر جلدی به موش‌ها (105×1.5 سال برای هر حیوان) تزریق شدند. موش‌های کنترل با همان تعداد سلول تحت تابش که با وکتور بدون درج ترانسفکت شده بودند، تزریق شدند. پس از 7 روز، سلول‌های تازه تحت تابش قرار گرفتند و با پلاسمید حامل اینترلوکین 12 (IL-12) DNA یا سلول‌های تحت تابش با یک chasmid بدون درج (شاهد) ترانسفکت شدند. پس از 7 روز دیگر (در مجموع 14 روز پس از اولین واکسیناسیون)، حیوانات با سلول های تازه به صورت زیر جلدی (10 در هفته) تلقیح شدند (Tisher et al., 1998).

فعالیت CTL در کشت مخلوط با سلول های میلوما. طحال 11 روز پس از تزریق سلول های میلوم ترانسفکت شده با IL-2 به موش برداشته شد. اسپلنوسیت ها به مدت 5 روز در دمای 37 درجه سانتی گراد، 5 درصد کشت داده شدند.

COg با سلول های تازه پرتودهی شده از خط مورد استفاده برای ایمن سازی. سپس سلول های میلوم تازه با 51Cr (سلول های هدف CTL) بارگذاری شدند. فعالیت CTL با انتشار mSG در محیط پس از انکوباسیون با اهداف ارزیابی شد. برای مهار پردازش پرفورین، اسپلنوسیت ها با کنکانامایسین A و سپس با اهداف انکوبه شدند (Kataok et al., 1996).

نتایج تحقیق

فعال سازی فوری MDR با واسطه Pgp.

mRNA MDRI در پاسخ به اثرات داروهای ضد تومور در سلول ها تجمع می یابد (چوداری و رونینسون، 1993). برای روشن شدن اینکه آیا این اثر با انتخاب سلول‌های Pgp مثبت یا با القای MDR مرتبط است، آزمایش‌هایی روی سلول‌های H9 MES/Pgp منفی انجام شد. سلول‌ها با Ara C، یک داروی انتقال‌یافته بدون Pgp که در بیماران مبتلا به سرطان سینه و بدخیمی‌های خونی استفاده می‌شود، درمان شدند. بیان MDR در سلول های درمان نشده پس از 25 سیکل PCR شناسایی نمی شود، در حالی که در سلول های تیمار شده با Ara C افزایش mRNA MDRI پس از 3-6 ساعت مشاهده می شود. ضربه (شکل 1، A). اگر غلظت سیتوزار به 75 میکرومولار افزایش یابد، می‌توان افزایش mRNA MDRI را حتی سریع‌تر مشاهده کرد - تنها پس از 1 ساعت قرار گرفتن در معرض. افزایش mRNA MDRI در سلول هایی که با یک قرار گرفتن در معرض Ara C حداقل به مدت 6 هفته زنده می مانند، ادامه می یابد.

سپس بررسی کردیم که آیا مقدار Pgp به موازات تجمع mRNA MDRI افزایش می یابد یا خیر. در شکل شکل 1 B نشان می دهد که سلول های تیمار شده با Ara C Pgp را بیان می کنند. مهم است که قرار گرفتن در معرض Ara C باعث جابجایی به سمت راست کل جمعیت می شود، که نشان می دهد تقریباً هر سلولی در کشت قادر به انباشت Pgp است. سلول های تیمار شده با Ara C، Pgp فعال عملکردی را بیان می کنند: در این سلول ها، حذف می شود

رودامین 123 قوی تر از سلول های دست نخورده است. این اثر توسط وراپامیل، مسدود کننده انتقال وابسته به Pgp حذف می شود.

O 1 3 6 10 16 24 ساعت.

فلورسانس (Ig) -

عکس. 1. افزایش mRNA ژن MDRX و Pgp پس از یک قرار گرفتن در معرض Ara C. A: سلول های H9 تیمار شده با 10 میکرومولار Ara C. MDR1 و mRNA p2-microglobulin (B2M) پس از رونویسی معکوس توسط PCR تعیین شدند. B: سلول ها با 10 میکرومولار Ara C به مدت 24 ساعت تیمار شدند (شماره<яя панель). Контроль - необработанные клетки (верхняя панель). Таким образом, накопление иРНК MDR\ наблюдается в течение первых

قرار گرفتن در معرض یک عاملی که توسط Pgp منتقل نمی شود. این به آن معنا است

محتمل ترین مکانیسم برای این اثر، القای یک فنوتیپ است

نه انتخاب سلول های مقاوم "از قبل موجود".

در شکل شکل 2 وابستگی بقای سلول را به غلظت وین کریستین، یک داروی شیمی درمانی که توسط Pgp منتقل می شود، نشان می دهد. سلول هایی که زنده ماندند

برنج. 2. یک بار قرار گرفتن در معرض cptozar منجر به تشکیل یک داروی پایدار منتقل شده توسط Pgp می شود.

سلول های H9 با 10 میکرومولار Ara C به مدت 24 ساعت تیمار شدند، در محیط تازه معلق قرار گرفتند و به مدت 12 روز انکوبه شدند. پس از ترمیم رشد سلول های لگاریتمی، حساسیت آنها به وین کریستین در مقایسه با سلول هایی که با سیتوزار تیمار نشده بودند (شاهد) بررسی شد. نتایج 4 آزمایش (آزمون MTT)

بنابراین، یک بار قرار گرفتن در معرض سلول‌های Pgp منفی با یک داروی شیمی‌درمانی غیر منتقل شده با Pgp منجر به تجمع سریع - در یک چرخه سلولی - mRNA ژن MDRI، Pgp از نظر عملکردی و مهم‌تر از همه، ایجاد مقاومت در برابر عامل انتقال یافته با Pgp سلول های حساس اولیه MDR با واسطه Pgp را بدست می آورند. مکانیسم این پدیده انتخاب سلول های Pgp مثبت نیست، بلکه فعال شدن فنوتیپ de novo است. چگونه تشکیل با واسطه Pgp رخ می دهد؟ MDR: به دلیل فعال شدن رونویسی ژن MDRX یا تثبیت mRNA، آیا هر دو مکانیسم عمل می کنند؟

در آزمایش های ارائه شده در شکل 3، سلول های H9 با Ara C در حضور تیمار شدند! مهارکننده های رونویسی - اکتینومایسین D، a-amanitin و ecteinascidin 743 (ET743). همه مهارکننده‌های آزمایش‌شده از افزایش سطح mRNA MDRI ناشی از Ara C جلوگیری کردند.

برنج. 3. بازدارنده های رونویسی از تجمع RNA MDR1 جلوگیری می کنند. سلول های H9 با 10 میکرومولار Ara C به مدت 24 ساعت تیمار شدند. بدون یا در حضور اکتینومایسین D، α-آمانیتین یا ET743. نتایج 3 آزمایش خلاصه شده است.

برای مطالعه نیمه عمر (پایداری) mRNA، سلول ها با Ara C به مدت 10 ساعت تیمار شدند. و به محیط یا محیط تازه با اکتینومایسین D منتقل و به مدت 36 ساعت دیگر انکوبه شد. در سلول های درمان نشده، mRNA MDRI کوتاه مدت بود: نیمه عمر آن 30 دقیقه بود. درمان با Ara C نیمه عمر mRNA را به 6 ساعت افزایش داد. بنابراین، تجمع mRNA MDRI، و در نتیجه، توسعه MDR با واسطه Pgp در پاسخ به استرس سیتوتوکسیک، نه تنها با فعال شدن رونویسی MDR1، بلکه با تثبیت mRNA این ژن نیز ایجاد می‌شود.

مکانیسم‌های انتقال سیگنال درون سلولی در فعال‌سازی MDR شکل 4 نشان می‌دهد که درمان منفرد سلول‌های H9 با TFA، آگونیست PKC، منجر به القای ژن MDRI شد. مهارکننده های خاص PKC - chelerythrine، calphostin C و bis-indolylmaleimide I - از فعال شدن MDR توسط فوربول استر و شیمی درمانی جلوگیری کردند. مشابه

داده ها روی سلول های K562 تیمار شده با Ara C، دوکسوروبیسین یا TFA در حضور مهارکننده های PKC نشان داده شده به دست آمد.

برنج. 4. مهارکننده های PKC از القای MDRI جلوگیری می کنند. سلول های H9 با 10 میکرومولار Ara C به مدت 16 ساعت تیمار شدند. بدون یا در حضور مهارکننده های PKC. نتایج 3 آزمایش خلاصه شده است.

به طور خلاصه، PKC برای تنظیم MDRI مهم است (و بنابراین فنوتیپ MJI؛ این ژن می تواند توسط آگونیست PKC القا شود و مهارکننده های PKC از فعال شدن MDRI توسط داروهای ضد سرطان جلوگیری می کنند.

آگونیست فیزیولوژیکی PKC دی اسیل گلیسرول (DAT) است که در طی هیدرولیز فسفاتیدیل‌نوزیتول-4،5-دی فسفات (PIg) توسط فسفاتیدیلینوزیتول اختصاصی فسفولیپاز C و/یا در طی تجزیه فسفاتیدیل‌فولیپاز، فسفاتیدیل‌فولیپاز خاص، تحت اثر فسفاتیدیل فولیپاز تشکیل می‌شود. برای این فسفولیپید (بریج، ایروین، 1984). فعال‌سازی MDRI ناشی از Ara C یا دوکسوروبیسین را می‌توان توسط نئومایسین سولفات و U73122، مهارکننده‌های فسفولیپاز C اختصاصی فسفاتیدیل‌نوزیتول مسدود کرد (شکل 5). فعال سازی MDRI توسط فوربول استر به سولفات نئومایسین و U73122 غیر حساس است زیرا TFA آگونیست مستقیم PKC است و این کیناز در دیستال فسفولیپاز C عمل می کند. مهار فسفاتیدیل کولین اختصاصی

یوسفولیپاز C (دارو B609) منجر به تغییر در بیان MYR 1 شکل 5 نشد. این نتایج نشان دهنده اهمیت هیدرولیز PI2 فسفولیپازون C مخصوص یوسفاتیدیلینوزنگول در فعال سازی MYA 1 است.

برنج. 5. مهارکننده های فسفولیپاز C در القای MDR\.

سلول های H9 با 10 میکرومولار Ara C به مدت 16 ساعت تیمار شدند. بدون یا در حضور سولفات نئومایسین، U73122 یا D609. نتایج 3 آزمایش خلاصه شده است.

فسفولیپاز C PI2 را به DAT و FI تجزیه می کند. محصول اول PKC را فعال می کند، محصول دوم باعث افزایش سطح Ca2 + داخل سلولی به دلیل حرکت آن از شبکه اکتوپلاسمی می شود. نقش Ca2 + داخل سلولی در القای MDRI با توانایی یونوفور A23187 اختصاصی Ca2 و Thapsigargin، یک مهارکننده Ca2+-ATPase، برای فعال کردن این ژن ثابت شده است. شلاتور اختصاصی Ca2+ BARTA/AM از القای MDR توسط شیمی درمانی و TPA جلوگیری کرد (شکل 6).

1 2 3 4 5 در 7 8 E 10 11 12 14 14 15 1617 18 19 Rns. ب نقش Ca2+ داخل سلولی در القای الف) R1.

سلول های H9 با القا کننده های MOI به مدت 16 ساعت تحت درمان قرار گرفتند. به تنهایی یا در حضور شلاتور کلسیم BARTA/AM. آهنگ ها: 1-سلول های درمان نشده، 2،3-A23187. 4.5-

تاپسیگارگین; 6,7-AgaC; 8،9-دوکسوروبیسین؛ 10،11-بلئومایسین؛ 12،13-2-دئوکسی گلوکز؛ 14،15-نوکودازول؛ 16،17-اسفنگومیلیناز؛ 18،19-TFA. آهنگ زوج: سلف فرد (به جز 1): سلف -5 میکرومولار VARTA/AM.

برای روشن شدن مشارکت Ca2 داخل و خارج سلولی در فعال سازی MDR، دو سری آزمایش انجام شد. ابتدا فعال‌سازی ژن در شرایط انکوباسیون سلولی در محیطی بدون Ca2+ مورد مطالعه قرار گرفت. حذف Ca2 خارج سلولی، فعال سازی MDRI توسط شیمی درمانی و TPA را مختل نمی کند. ثانیاً عامل TMB-8 که از ورود Ca2+ به سلول ها جلوگیری می کند و غلظت Ca2+ داخل سلولی را تغییر نمی دهد، بر القای MDRI تأثیری نداشت. بنابراین، کلسیم درون سلولی اما نه خارج سلولی برای فعال سازی MDRX مورد نیاز است. آزمایشات بالا نقش اساسی مسیرهای سیگنالینگ فسفولیپاز C->DAG-*PKS و PI3->Ca2+ را در فعال سازی ژن MDRX توسط مواد مختلف از جمله داروهای شیمی درمانی ثابت می کند.

با این حال، PKC یک مکانیسم جهانی برای فعال کردن MDR نیست. فعالیت PKC در سلول‌های تیمار شده با القاکننده‌های MDRX متفاوت است. تی< активирует ПКС, Ara С не оказывает существенного влияния на активность этой киназы, а церамид - вторичный мессенджер, накапливающийся в обработанных химиопрепаратами клетках (Bose et al., 1995), ингибирует ее (табл. 1).

جدول 1. اثرات القا کننده های ژن MDRI بر فعالیت PKC.

درمان فعالیت PKC، pmol/mg پروتئین در دقیقه.

کسر ذرات سیتوزول

کنترل 119±13 59+9

TFA، YuONM 47+10* 153+14*

Ara C، 25 میکرومولار 143+16 65+10

سرامید، 1 میکرومولار 138+15 27+8*

سرامید، YumkM 83+15* 15+7*

*ر<0,05 в сравнении с контролем (необработанные клетки). Данные 6 опытов.

مهارکننده های PKC chelerygrine و bis-indole-maleimide I از فعال شدن MDR\Ara C، دوسوروبیسین و TFA جلوگیری کردند، اما نه سرامید (شکل 7). بنابراین، فعال سازی PKC پیش نیازی برای القای ژن MDRX نیست. برخی از عوامل (به عنوان مثال، ceramvd) مکانیسم های سیگنالینگ مستقل از ACL را فعال می کنند یا در دیستال ACL عمل می کنند.

برنج. 7. Ceramnd بدون توجه به مداخله ACL MDR را فعال می کند.

سلول های H9 با 25 میکرومولار C2-سرامید به مدت 24 ساعت تحت درمان قرار گرفتند. به تنهایی یا در حضور مهارکننده های PKC. کنترل اثربخشی مهارکننده‌ها مسدود کردن فعال‌سازی MDR در مواجهه با سیتوزار 10 میکرومولار است.

چنین مکانیسم هایی می توانند پروتئین کینازهای فعال شده با میتوژن باشند. دوکسوروبیسین و آرا C در غلظت‌هایی که MDR را فعال می‌کنند، فعالیت JNK1 را افزایش دادند، اما ERK1/2 را افزایش دادند، در حالی که TFA ERK1/2 را فعال کرد، اما فعالیت JNK1 تغییری نکرد (شکل 8). مطابق با این داده‌ها، مهارکننده ERKI/2 PD98059 فعال‌سازی MDRI توسط TFA را لغو کرد، اما نه با شیمی‌درمانی. بنابراین، پروتئین کینازهای فعال شده با میتوژن به عنوان سطحی از واگرایی سیگنال های فعال کننده MDR1 تولید شده توسط مواد مختلف عمل می کنند.

فعال سازی MAP کینازها توسط دوکسوروبیسین و TPA

برنج. 8. فعال سازی افتراقی MAP کینازها توسط القاء کننده های MDR1. سلول های H9 با دوکسوروبیسین و TFA تیمار شدند. فعالیت های ERK1/2 و JNK1 پس از رسوب ایمنی و فسفوریلاسیون سوبستراها تعیین شد. اثرات القا کننده ها به عنوان سطح فعال شدن هر کیناز در مقایسه با سلول های تیمار نشده بیان می شود که در آن فعالیت روی 1 تنظیم می شود. داده های 3 آزمایش خلاصه می شوند.

فاکتور رونویسی NFkB مکانیزمی برای پاسخ سریع سلول ها به محرک های خارجی است (Karin, 1995). در یک سلول در حال استراحت، این پروتئین در سیتوپلاسم در مجتمع با زیر واحد مهاری قرار دارد. در پاسخ به قرار گرفتن در معرض، NFkB از مجموعه جدا می شود، به هسته منتقل می شود و مناطق تنظیم کننده ژن را فعال می کند که دارای سایت های اتصال NFkB هستند. مهارکننده های NFkB PDTC، TPCMC و سالیسیلات ها از فعال شدن MDRX توسط سیتوزار، دوکسوروبیسین و TFA جلوگیری کردند (شکل 9). به ویژه مهم است که سالیسیلاپ، دارویی که به طور گسترده در کلینیک استفاده می شود، یک مسدود کننده موثر فعال سازی فوری MDRI باشد. علاوه بر این، سالیسیلات سدیم فعال سازی طولانی مدت (تا 7 روز) MDRX توسط سیتوزار را لغو کرد (شکل 10)، که تایید می کند. اهمیت NFkB به عنوان مکانیزم فعال سازی MDR

برنج. 9. پیشگیری از القای MDR1 توسط مهارکننده های NFkB. سلول های H9 با 10 میکرومولار Ara C، 5 میکرومولار دوکسوروبیسین یا 10 نانومولار TFA به مدت 16 ساعت تحت درمان قرار گرفتند. به تنهایی یا در حضور مهارکننده های فعال سازی NFkB. نتایج 4 آزمایش خلاصه شده است.

4، شستشو

L ha S - + +----

سالیسیلات - - + \ s 5 7

روزهای بدون AGAS

برنج. 10. اثر طولانی مدت سدیم سالسینات به عنوان یک مهار کننده القاء MDRI.

سلول های H9 با 10 میکرومولار Ara C به مدت 48 ساعت تیمار شدند. به تنهایی یا در حضور سالیسیلات سدیم، مجدداً در محیط تازه معلق و برای 1-7 روز دیگر انکوبه می شود.

اهمیت ایجاد نقش NκB همچنین در این واقعیت است که این مکانیسم رویدادهای سیتوپلاسمی و هسته ای را در فعال سازی ژن MYR 1 "یکپارچه" می کند. شماره kV اگزوژن AYUSH. هم ترانسفکشن زیر واحدهای OTkV p50 و p65 منجر به فعال شدن ناحیه -1202/118 nt شد. پروموتر AYUSH (شکل 11). با این حال، در منطقه نشان داده شده، دنباله متعارف 5 "-COOIM^YUSS-3" (R-هر پایه پورین، aL-هر پایه پیریمیدین) برای تعامل با NakB یا توالی های همولوگ یافت نشد. مفروضات زیر ممکن است: 1) NokV با یک دنباله هنوز ناشناس در منطقه -1202/118- تعامل دارد. 2) NkB یک ژن میانی (ژن) را فعال می کند که محصول آن به ناحیه -1202/+118 nt متصل می شود. و پروموتر MDR1 را القا می کند.

برنج. 11. NFkB - فعال کننده پروموتر MDR.

سلول های K562 با سازه های نشان داده شده و یک پلاسمید حامل Renilla luciferase rei تحت پروموتر SV40 ترانسفکت شدند. فعالیت لوسیفراز کرم شب تاب که منعکس کننده القای ناحیه -1202/118 nt پروموتر MDRX است (که به عنوان MDF نرمال شده به فعالیت Renilla luciferase نشان داده می شود.

تنظیم پروموتر ژن MDR1

مسیرهای انتقال سیگنال های فعال کننده L1 باید یک "نقطه همگرایی" مشترک داشته باشند - ناحیه تنظیم کننده ژن و mRNA. برای مطالعه پروموتر MDRI، ما از داروهایی استفاده کردیم که وضعیت فیزیکوشیمیایی کروماتین - مهارکننده‌های هیستون داستیلاز تریکوستاتین A و سدیم بوتیرات را تعدیل می‌کنند، نمایندگانی از کلاس‌های داروهای شیمی‌درمانی که مستقیماً رونویسی ژن را تنظیم می‌کنند. مقایسه مکانیسم فعال‌سازی MDR توسط این عوامل با Ara C و دوکسوروبیسین، داروهایی که کروماتین هدف مستقیمی برای آنها نیست، مهم است. تریکوستاتین A و سدیم بوتیرات ژن MDRX درون زا را در سلول های H9، K562 و SW620 فعال می کنند. افزایش mRNA (شکل 12، پانل سمت چپ) با فعال شدن لوسیفراز رونویسی شده از سایت -1202M18 nt همراه بود. پروموتر MDRI (شکل 12، پانل سمت راست).

برنج. 12. مهارکننده های هیستون داستیلاز ژن MDRX درون زا و پروموتر (ترانسفکشن گذرا) را القا می کنند.

سلول های اسلش، H9، K562 و SW620 با داروهای نشان داده شده به مدت 24 ساعت تحت درمان قرار گرفتند. سطح mRNA MDRX در GTCR مورد مطالعه قرار گرفت. سمت راست: سلول‌های K562 با ساختار -1202/+P8 n.o.-luciferase ترانسفکت شدند. در 24 ساعت. سلول ها با داروهای نشان داده شده به مدت 16 ساعت تحریک شدند. نتایج 3 آزمایش ارائه شده است.

ثابت شده است که تریکوستاتین A و بوتیرات MDRI را به دلیل برهمکنش فاکتور رونویسی NF-Y با جعبه HAAT معکوس (Jin and Scolto, 1998) فعال می کنند، که زنجیره رویدادها را تأیید می کند "اصلاح القایی-کروماتین -> فعال سازی پروموتر MDRI». با این حال، در شرایط انتقال کمربند، کروماتین روی پلاسمید "ناقص" باقی می ماند.

برای مطالعه نقش کروماتین در القای MDRI، سلول های SW620 با ساختار لوسیفراز کرم شب تاب -1202/+118 nt و پلاسمید حامل ژن neo ترانسفکت شدند. سپس سلول ها برای بقا در حضور نئومایسین انتخاب شدند. در انتخاب‌کننده‌ها، مانند ترانسفکشن موقت، تریکوستاتین A و بوتیرات سدیم باعث تجمع mRNA ژن MDRI درون‌زا و رونویسی از ناحیه -1202/118-i.i شدند. محرک این ژن فعال‌سازی MDRI توسط مهارکننده‌های هیستون داستیلاز توسط ET743، یک مسدودکننده رونویسی، لغو شد. این نشان دهنده ارتباط مستقیم بین افزایش مقدار mRNA MDRI و فعال شدن پروموتر این ژن از طریق استیلاسیون کروماتین است.

این داده‌ها زمانی به دست آمدند که سلول‌ها در معرض عواملی قرار گرفتند که مستقیماً وضعیت فیزیکوشیمیایی کروماتین را تغییر می‌دادند. آیا مکانیسم همیشه مشخص است، زیرا همه داروهای شیمی درمانی (و سایر محرک های بیرونی) تنظیم کننده مستقیم کروماتین نیستند؟ ما اشاره کردیم که نیمه عمر: mRNA MDRI در سلول های تیمار شده با Ara C و TFA افزایش می یابد. شکل 1 نشان می دهد که TFA و تریکوستاتین A القاء کننده قوی فعالیت پروموتور MDRI (رونویسی) هستند، در حالی که نه آرا C، نه دوکسوروبیسین و نه سرامید پروموتر را فعال نکردند یا فقط یک اثر ضعیف ایجاد کردند.

برنج. 13. اثرات فعال کننده های MDR بر القای پروموتر MDRI. سلول های K562 با ساختار لوسیفراز کرم شب تاب -1202/+118 nt ترانسفکت شدند، به قسمت های مساوی تقسیم شدند و به مدت 16 ساعت تحریک شدند. داروهای نشان داده شده

فعالیت لوسیفراز در سلول های تیمار نشده، نرمال شده به محتوای پروتئین کل در لیز سلولی، به 1 تنظیم شد. نتایج در 3 آزمایش بازتولید شد.

این نتایج نشان می‌دهد که افزایش سطح mRNA A/III1 هم در نتیجه فعال‌سازی رونویسی (TFA، تریکوستاتین A) و هم بدون القای مستقیم پروموتر (سیتوزار، دوکسوروبیسین، سرامید) رخ می‌دهد. در مورد دوم، باید مکانیسم های تثبیت mRNA، یا فعال شدن یک ژن میانی، که محصول آن پروموتر MIEX را القا می کند یا رونوشت را تثبیت می کند، شناسایی کرد (به آزمایشات با NakB اگزوژن مراجعه کنید).

جدول 2. مهارکننده های مکانیسم های سیگنال دهی که از فعال شدن فوری ژن MF1 tsntozprom جلوگیری می کند.

دارو غلظت بازدارنده هدف داخل سلولی

chelerythrine PKS 10 میکرومولار

کالفوستین S PKS 1 میکرومولار

بیس ایندولیل

maleimide I PKS 5 میکرومولار

VARTA/AM Ca2+ 5 میکرومولار

PDTK No.kV 5μM

GFKhMK No.kV 25 µM

سدیم سالیسیلات No.kV 20 میلی مولار

یوتیرین №kV 10 میلی مولار

زیستر پلاسماتیک بالاتر

غشای اسید چرب؟ Yumkg/ml

1KTSHGOMISHSH B طول رونویسی؟ 500-1000 نانوگرم در میلی لیتر

x-amanitin RNA پلیمراز II 9 میکروگرم در میلی لیتر

zhgeinascischsh 743 نصب نشده 100 nM

جدول 2 داروهای دارویی را نشان می دهد که نشان دهنده گروه هایی از مهارکننده های انتقال سیگنال هستند که از فعال شدن MDR توسط سیگوسار یا دوکسوروبیسین در سلول های لوسمی H9 و K562 جلوگیری می کنند.

غلبه بر MDR با واسطه Pgp: هدف غشای پلاسما

عمل سیتوتوکسیک

بنابراین، MDR با واسطه Pgp می‌تواند به سرعت در طول یک تقسیم سلولی تشکیل شود و در نسل‌های سلول‌های زنده باقی بماند. بسیاری از محرک ها القاء کننده MDR هستند، از جمله استفاده بالینی از داروهای ضد تومور گروه های شیمیایی مختلف. Pgp مشخصه مکانیسم هایی است که از فعال شدن مرگ برنامه ریزی شده (apopto) جلوگیری می کند (جانستون و همکاران، 1999). راهبردهای غلبه بر مقاومت چند عاملی چیست؟

مرگ چنین سلول هایی تحت تأثیر عوامل ایمنی مورد مطالعه قرار گرفته است. پیش نیاز این رویکرد داده هایی در مورد رد میلوم واکسینه شده توسط سلول های طحالی بود که در طول واکسیناسیون موش ها جمع می شوند. همان تومور، اصلاح شده برای بیان سیتوکین ها (Turner et al., 1996). از آنجایی که مشخص شد ویژگی‌های فرعی MPC1 IDoxlO-l و MPC1 1Dox10-2 مشابه هستند، سلول‌های MPCllDoxlO-1 در زیر تحلیل می‌شوند.

فنوتیپ MDR در انتخابگرها با بیان بیش از حد ژن mdrVo، کاهش انتقال کلسین و مقاومت به دوکسوروبیسین و وین کریستین، سوبستراهای Pgp مشخص شد. برای ایجاد ایمنی نسبت به تلقیح میلول، سلول های MPC11 و MPCI IDoxlO-l با cDNA سیتوکین های GM-KS IL-12 ترانسفکت شدند. تعداد سلول های تلقیح شده پنج برابر حداقل دوز کشتن تومور 100٪ بود.

جدول 3. میزان رد تومور در کنترل و

حیوانات واکسینه شده

پیوند موش

MPC11 MPCllDoxlO-1

دست نخورده 0/15* 0/10

ایمن سازی با سلول های MPC11:

سلول های تحت تابش 1/15 0/10

■سلول های ترانسفکت شده با M-CSF/IL-12 15/15** 9/10**

ایمن سازی با سلول های MPC1 Xox10-1:

سلول های تحت تابش 0/15 0/10

"سلول های ترانسفکت شده با M-CSF/IL-12 9/10** 10/10**

میزان رد تومور: در شمارشگر - تعداد موش هایی که تومور ایجاد نکرده اند. در 1 جایگزین - تعداد کل موش های واکسینه شده، **P<0,001 по критерию х2 в сравнении с еиммунизированными (интактными и вакцинированными только облученными клетками) ивотными.

جدول 3 نشان می دهد که سلول های MPC11 و MPC1 IDoxIO تولید کننده تومور هستند: در 100٪ حیوانات غیر ایمن شده، تومورها 8-10 روز پس از تلقیح سلول های مربوطه ظاهر شدند. با این حال، در موش‌هایی که با سلول‌های بیانگر سیتوکین واکسینه شده بودند، تومورها ظاهر نشدند (واکسیناسیون با MPC11) یا نادر بودند (واکسیناسیون با یک زیر خط مقاوم). ایمنی ضد تومور طولانی مدت بود: تومورها در عرض 5 هفته پس از تلقیح سلول های تازه ظاهر نشدند. بروز رد پیوند بین گروه های ایمن شده با سلول های MPC 11 و سابلین مقاوم مشابه بود. این نتایج نشان دهنده احتمال مرگ سلول های مقاوم بدخیم هنگام قرار گرفتن در معرض فاکتور(های) شناسایی شده در آزمایشات in vivo است.

چنین عاملی CTLهایی هستند که در طحال در پاسخ به ایمن سازی با سلول های بیان کننده سیتولیتیک تولید می شوند. در شکل شکل 14 نشان می دهد که سلول های طحال موش های ایمن شده با سلول های MPC 11 بیان کننده GM-CSF- و IL-12 سلول های هدف MPC 11 و MPCllDoxlO-1 را با کارایی تقریباً یکسان لیز کردند (شکل 14).

-ér-MPCU/MPCJlDoilO

MRS11/MRSI

effectorg.target

برنج. 14. لیز CTL سلولهای والدین و Pgp مثبت.

شمارنده: سلول هایی برای ایمن سازی، مخرج: سلول هایی که باید پیوند شوند.

در نتیجه، ایمنی ضد توموری در حیوانات واکسینه شده با واکسن سلولی بیانگر سیتوکین با حساسیت سلول‌های MDR به عملکرد منطقی CTLها مرتبط است.

فعالیت کشنده CTLها به دلیل ترشح لیگاند CD95/Fas و/یا گرانزیم B-perforin توسط این سلولها است (Vetke, 1994). برای حل این سوال که کدام یک از این مکانیسم ها در سیستم مورد مطالعه عمل می کند، بقای سلولی در حضور لیگاند Fas و MPC1 ShoxY-1 مورد مطالعه قرار گرفت. بنابراین، گرانزیم B/perforin باید یک مکانیسم نامزد برای عملکرد سیتوتوکسیک UTJهای ایمنی در نظر گرفته شود. در واقع، پیش انکوباسیون immuno-CTL با کانکانامایسین A، یک مهارکننده پردازش پرفورین، لیز سلول های هدف MPCllDoxl 0-1 را کاهش داد (شکل 15).

برای یافتن راه‌هایی برای غلبه بر MDR، مهم است که خطوط فرعی با MJB حساسیت به اثرات سیتوتوکسیک را به دلیل اختلال در یکپارچگی غشای پلاسمایی توسط پرفورین حفظ کنند. نفوذ گرانزیم B به داخل سلول از طریق منافذ موجود در غشای پلاسمایی تشکیل شده توسط پرفورین منجر به فعال شدن کاسپازهای گل سرخ می شود. داچشوند

پشت سر هم کشنده - عمل همزمان عاملی که منافذ غشای خارجی و پروتئاز را تشکیل می دهد - باعث مرگ سلول هایی می شود که در برابر تعدادی از تأثیرات خارجی مقاوم هستند. بنابراین، غشای پلاسمایی یک هدف مهم برای درمان با هدف از بین بردن سلول های مقاوم است.

T; با k) o o o

n (o n ii) o o

مؤثر: هدف

برنج. 15. Granznm B/psrforin - مکانیسم مرگ با واسطه CTL. Concanamycin A (میله های باز) لیز سلول های MPC1 XoxI-1 را با واسطه CTL کاهش می دهد. ستون های تیره نشان دهنده لیز اهداف CTL بدون پیش جوجه کشی با کنکانامایسین A است. یکی از 3 آزمایش نماینده نشان داده شده است.

رادیکال های اکسیژن آزاد و Zerschied در غلبه بر MDR. اگر غشای پلاسمایی هدف مورد نظر است، پس چگونه می توان آسیب آن را ایجاد کرد؟ به ویژه مطلوب است که چنین تأثیری توسط یک بازیگر مشترک در بسیاری از داروهای ضد سرطان اعمال شود. یکی از این "واسطه ها" ceramvd است. برای اینکه سرامید برای threodolization MDR موثر باشد، باید حداقل دو شرط را برآورده کند: ;) توسط Pgp به خارج از سلول منتقل نشود. 2) راه‌های مرگ را تحریک می‌کند که در سلول‌های مقاوم عمل می‌کنند. آیا «دور زدن» ناقل غشاء، مکانیسم اصلی MDR، کافی است تا باعث مرگ سلول‌هایی شود که در برابر تعدادی از تأثیرات مقاوم هستند؟

سرامید توسط P-gpicoprotein منتقل نمی شود.

از آنجا که سرامید در پاسخ به انواع داروهای شیمی درمانی تجمع می یابد، ما بررسی کردیم که آیا این متابولیت این شرایط را دارد یا خیر. مشخص شد که سینتیک تجمع سرامید در سلول‌های K562 والدین و خط فرعی K5621/89 Pgp مثبت آنها تقریباً یکسان است (شکل 16). در همان زمان، سلول‌های K562^B9 رودامین 123 کمتری نسبت به سلول‌های K562 (کنترل انتقال با واسطه Pgp) به میزان قابل‌توجهی جمع‌آوری کردند. در نتیجه، سرامید یک بستر انتقال برای Pgp نیست.

8000 6000 4000 2000 0

0 0.05 0.2 1 5 C5-BOO!RU-ceramide

برنج. 16. Pgp سرامید با زنجیره کوتاه را انتقال نمی دهد. سلول های K562 و K5621/59 به مدت 30 دقیقه انکوبه شدند. با C5-ceramide کونژوگه با فلوروکروم VSY1RU (پانل بالا) یا رودامین (III)123 (پانل پایین). لومینسانس سلولی با استفاده از فلوسیتومتری مورد مطالعه قرار گرفت. داده های 3 آزمایش.

هیچ تفاوتی در سمیت سلولی سرامیدهای مصنوعی (C2) و طبیعی (Ci) برای سلول های K562 و K5621/89 و همچنین برای جفت وجود نداشت.

سلول های والدین و انتخاب کننده ها: MCP-7 و MCP-7Ac1g، KV-3-1 و KV-8-5-11. بنابراین سرامید با کارایی یکسان باعث مرگ سلول های Pgp منفی و Pgp مثبت می شود.

از اختلال در یکپارچگی غشای پلاسمایی جلوگیری نمی کند.

برای شناسایی مکانیسم‌های مرگ سلول‌های K5621/59 تحت تأثیر سرامید، پارامترهای زیر مورد مطالعه قرار گرفتند: فعال‌سازی کاسپازهای 9 و 3، برش پلی‌-ADP-ریبوز پلیمراز (PAKR)، تخریب DNA بین‌نوکلئوزومی، انتقال درون غشایی فسفاتیدیل‌سرین. (با اتصال انکسین V)، پتانسیل میتوکندری الکتریکی گذرنده و یکپارچگی غشای پلاسمایی (با ادغام PI در سلول ها). در شکل 17 نشان می دهد که در 24 ساعت. در معرض سرامید، درصد سلول های در حال مرگ به 4+37 درصد رسید. ظاهر سلول‌های "دوبل مثبت" (آنکسین-PI4) بسیار مهم بود، به این معنی که در سلول‌های K562LB9، سرامید در مراحل اولیه باعث اختلال در نفوذپذیری غشای پلاسمایی (نکروز یا آپوپتوز دیررس) می‌شود. در همان زمان، فعال شدن کاسپاز 3، مشخصه آپوپتوز کلاسیک، شناسایی نشد. پروتئولیز PAS یک رویداد دیرهنگام (48 ساعت قرار گرفتن در معرض) بود.

اثر سرامید بر روی سلول‌های K5621/B9 عملاً با تغییر در پتانسیل گذرنده میتوکندری همراه نبود: این شاخص در سلول‌های در حال مرگ با مقدار مربوطه برای سلول‌های تیمار نشده تفاوتی نداشت. تکه تکه شدن DNA بین نوکلئوزومی نیز نشانه اصلی مرگ نبود: تنها حدود 11 درصد از رویدادها در ناحیه زیر 01 (سلول های هیپودیپلوئید) رخ داده است، در حالی که درصد سلول های در حال مرگ (مجموع annexin+/PI، annexin7PI+ و مضاعف مثبت) در مدت زمان قرار گرفتن در معرض همان 64% بود.

زمان (ساعت) با سرامید

■ K562,Annexin+□ K562,Annexin+PI+ BK562i/S9,nH+

IK562.PI+ V K562i/S9,AHHeKCHH+ ■ K562|789,Annexin+PI+

برنج. 17. شاخص های مرگ سلول های K562 و K562L/S9 تحت تأثیر سرامید. سلول‌ها با 25 میکرومولار C2-ceramide برای دوره‌های زمانی مشخص شده تیمار شدند.

در سلول‌های K562، p53 عمل نمی‌کند و پروتئین کیناز کایمریک Br/Ab1 بیان می‌شود، یعنی. این سلول ها حاوی عوامل تعیین کننده مولکولی مقاومت در برابر آپوپتوز هستند. بنابراین، زیر خط K562i/S9 را می توان به عنوان یک مدل مقاومت پلیوتروپیک در نظر گرفت، جایی که Pgp یکی از مکانیسم های آن است. از همه مهمتر داده های مربوط به توانایی سرامید در ایجاد مرگ است! چنین سلول هایی با مکانیسم نکروز.

متابولیت هایی که می توانند باعث نکروز شوند ممکن است رادیکال های آزاد اکسیژن باشند. برای تعیین نقش آنها در مرگ سلول های K562/iS9 ناشی از سرامید، سمیت سلولی سرامید در حضور N استیل سیستئین (NAC)، یک شلاتور رادیکال اکسیژن، مورد مطالعه قرار گرفت و سرعت تشکیل رادیکال های اکسیژن در سلول های تیمار شده با سرامید مورد مطالعه قرار گرفت. b شکل 18 نشان می دهد که NAC سمیت سلولی سرامید را لغو کرد. بنابراین، اکسیژن آزاد نقش تعیین کننده ای در مرگ سلول های مقاوم در مواجهه با سرامید ایفا می کند. شکل 19 وابستگی را نشان می دهد

لورسانس سلول های بارگذاری شده با OCPOA بسته به زمان عمل سرامید و

"عامل کنترل - پراکسید هیدروژن، H2O2 دهنده سریع است."

بعد از 20 دقیقه همینطور - افزایش فلورسانس سلولی سرامید ایجاد شده است

اثر معکوس: بعد از 15 دقیقه. ضربه شدید مشاهده شد - 1.5

ردیف - کاهش درخشش. فقط تا 24 ساعت شدت پردازش

فلورسانس سلولی به سطح این شاخص در بازگشت

سلول های تیمار شده و 48-72 ساعت افزایش یافت. تاثیر زمانی که مقدار

قبلا تعداد زیادی سلول در حال رشد وجود داشت (شکل 17). بنابراین، در پردازش

سلول های رامید در ابتدا تحت کاهش و اکسیداسیون قرار می گیرند

بعداً رخ می دهد، احتمالاً در نتیجه تهی شدن منابع برای بازسازی بسترهای سلولی.

شکل 18. NAC مرگ سلولی K562i/S9 را مسدود می کند. سلول ها با کروم سرامید بدون یا با 5 میلی مولار NAC تیمار شدند. NAC به تنهایی هیچ تاثیری بر زنده ماندن سلول نداشت.

برنج. 19. اکسیداسیون در سلول های K562|/89 تحت تأثیر سرامید. سلول ها با 25 میکرومولار C2-سرامید برای فواصل زمانی مشخص شده تحت درمان قرار گرفتند. اکسیداسیون داخل سلولی با تغییرات در فلورسانس سلول های بارگذاری شده با E>SGOA مورد مطالعه قرار گرفت. H2Og به عنوان کنترل "انفجار اکسیژن" استفاده شد. نتایج 3 آزمایش خلاصه شده است.

بحث در مورد نتایج

تجزیه و تحلیل مکانیسم های فعال سازی ژن MOI1 به ما امکان می دهد موارد زیر را بیان کنیم: 1) ژن AUM و فنوتیپ MDR را می توان با قرار گرفتن در معرض کوتاه مدت سلول ها با بسیاری از مواد القا کرد. بیان بیش از حد MBJ\ و تجمع Pgp در سلول هایی که پس از خاتمه زنده می مانند! اثرات بیگانه بیوتیک بنابراین، فعال سازی اپی ژنتیکی ژن MYR\ یک فنوتیپ MDR پایدار را فراهم می کند.

2) تشکیل فوری MDR توسط مکانیسم های سیگنال دهی سلولی عمومی تنظیم می شود. در واقع، فعال سازی فسفولیپازها، بسیج Ca2+ داخل سلولی، القای NakB و آبشارهای پروتئین کینازهای فعال شده با استرس مکانیسم هایی هستند که پاسخ سلول به استرس را تضمین می کنند. علاوه بر این، فاکتورهای رونویسی و سایت های فعال عملکردی در

ipoMOTope ژن MDR1 که برای فعال‌سازی MDR مهم است، منحصر به این ژن نیست: ■JF-Y، جعبه CCAAT و سیگنال‌های تعدیل‌کننده کروماتین برای تنظیم رونویسی بیشتر ژن‌های یوکاریوتی مهم هستند. این، ظاهرا، القایی بالای ژن MDRX را توضیح می دهد: این ژن توسط محرک های پا در سلول های بافت زایی مختلف فعال می شود. به نوبه خود، تنظیم MDRX توسط مکانیسم‌های عمومی اجرای استرس بر اهمیت iviological فعال‌سازی MDR همراه با سایر پاسخ‌های سلول به تأثیرات برون‌زا تأکید می‌کند.

3) تعدد و قابلیت تعویض مکانیسم های فعال سازی MDR shs.20) توسط ماهیت چند سطحی تنظیم این فنوتیپ تعیین می شود. و هر یک از این سطوح به سلول این فرصت را می دهد تا "انتخاب" کند که آیا MDR را فعال کند یا نه. اول، انتخاب توسط ماهیت محرک دیکته می شود (انواع مختلف از طریق مکانیسم های مختلف عمل می کنند). ثانیاً، مکانیسم خاص بستگی به حضور مولکول های سیگنالینگ خاص و برهمکنش آنها در این نوع شبکه ها دارد دلایل القاپذیری بالا در MDRX (قابلیت تعویض و همپوشانی گسترده مکانیسم های سیگنالینگ و رونویسی القای توسط بسیاری از محرک ها و در انواع مختلف سلول ها را تضمین می کند) و موارد عدم القاء نه با هر محرکی و نه در هر آزمایشی القا می شود. سیستم).

طرح فعال سازی فوری ژن MDRX (با استفاده از مثال سیتوزار و TFA) در شکل 20 نشان داده شده است.

مفهوم القای MDRX به‌عنوان یک رویداد تاخیری، که ابتدا شامل فعال‌سازی پروتئین‌های لازم برای القای toro MDRX می‌شود، تصویر فعال‌سازی اپی ژنتیکی MDR را پیچیده‌تر می‌کند.<ой каскадный механизм может быть главным или дополнительным,

تنظیم MY1 توسط شیمی درمانی و TPA

نئومایسین، 1173122

فعال سازی رونویسی، تثبیت mRNA

برنج. 20. مکانیسم های فعال سازی فوری ژن MY 1.

تشدید یا حفظ سرعت رونویسی. امکان انتخاب سلول از راه‌های مختلف برای القای MDR - مستقیم (بدون فعال‌سازی ژن‌های میانی) و/یا با واسطه القای ژن‌های دیگر - جلوگیری از توسعه MDR را دشوارتر می‌کند.

فعال شدن رونویسی ژن L)/؟ 1 تنها مکانیسم برای توسعه MDR نیست. یکی دیگر از اجزای مهم تنظیم اپی ژنتیکی ممکن است تثبیت nRNA MOK 1 باشد. انواع نیز متفاوت است. این فرض با مفهوم تنظیم چند سطحی بیان ژن MyACh مطابقت دارد (شکل 19).

4) پیشگیری هدفمند از MDR با ایجاد مکانیسم های انتقال سیگنال های فعال کننده M)L1 امکان پذیر است. نیاز به جلوگیری از توسعه MDR در کلینیک با ارتباط بین توسعه MDR و سمیت سلولی داروها تأیید می شود. در واقع، سطح mRNA/eg1 در سلول های تیمار شده با سموم با افزایش غلظت دومی افزایش می یابد. در نتیجه، استفاده از رژیم‌های شیمی‌درمانی با دوز بالا (توجیه برای افزایش اثربخشی درمان) می‌تواند منجر به ایجاد MDR در سلول‌های زنده‌مانده شود. غلظت داروهای مورد نیاز برای تحلیل کامل تومور ممکن است بالاتر از حد قابل قبول برای بیمار باشد که حد افزایش دوز را در شیمی درمانی تعیین می کند. آنتاگونیست های سیگنال دهی داخل سلولی شناسایی شده در بالا ممکن است به عنوان نمونه های اولیه برای مسدود کننده های دارویی MDR در آینده که در ترکیب با داروهای ضد سرطان سنتی استفاده می شوند، عمل کنند. بنابراین، جلوگیری از توسعه فوری MDR، امکان غلبه بر این پدیده نامطلوب بالینی را افزایش می دهد.

چه رویکردهایی برای غلبه بر MDR ایجاد شده وجود دارد؟ یکی از اهداف "آسیب پذیر" در سلول های مقاوم ممکن است غشای پلاسما باشد. نقض یکپارچگی آن باعث مرگ سلول های مقاوم می شود: Pgp از مرگ ناشی از تأثیراتی که باعث نکروز می شوند جلوگیری نمی کند. یک ساختار سلولی مهم از نظر درمانی شناسایی شده است که باید مورد هدف قرار گیرد. بدیهی است که عوامل غشایی به دلیل سمیت کنترل نشده برای بافت ها، از جمله بافت های غیر توموری، نامناسب هستند. یافتن عواملی ضروری است که بر سد Pgp غلبه کرده و باعث آسیب به غشای پلاسما شوند، به عنوان مثال. ایجاد غلظت درون سلولی دارو برای فعال کردن نکروز ماده ای که این شرایط را برآورده می کند ممکن است سرامید باشد، یک اسفنگولیپید که در پاسخ به بسیاری از محرک ها، از جمله داروهای ضد تومور، در سلول تجمع می یابد. سرامید توسط Pgp منتقل نمی شود، که تضمین می کند که غلظت این متابولیت در سلول های مقاوم برای القای مرگ کافی است.

سمیت سرامید برای سلول های مقاوم به این معنی است که مسیرهای سیگنال دهی دیستال به تجمع سرامید در این سلول ها توسط Pgp یا سایر مکانیسم های مرتبط با انتخاب MDR مسدود نمی شوند. بنابراین، غلبه بر مقاومت باید شامل یافتن راه هایی برای تجمع سرامید (و احتمالاً سایر متابولیت های سمی) در سلول های مقاوم باشد. سمیت سلولی سرامید به caveolae یا آنالوگ های آنها نیاز دارد - تشکیلات زیر غشایی غنی از فسفولیپیدها و پروتئین ها و در طول انتخاب برای MDR تجمع می یابند (La\ et al., 1998). نکته مهم، انتخاب برای MDR ممکن است با افزایش اهداف مولکولی سلولی برای درمان ضد سرطان همراه باشد.

به نظر می رسد اشکال آزاد اکسیژن یک مکانیسم اساسی مرگ ناشی از سرامید باشد. این مسئله اهمیت میتوکندری در بقای سلول های MDR را مطرح می کند. مسیر میتوکندریایی

سیگنال های اضافی را برای فعال کردن کاسپازهای افکتور ارسال می کند. "حلقه" لیتوکندری یک عامل قدرتمند در تقویت چنین سیگنال هایی است "کاهش پتانسیل الکتریکی میتوکندری و به خصوص آزاد شدن سیتوکروم C در پلاسما، برگشت ناپذیری روند مرگ را تضمین می کند. از آنجایی که نمی‌توان پیش‌بینی کرد که آیا انتخاب مقاومت با غیرفعال کردن یک یا آن مسیر مرگ مرتبط است یا خیر، مهم است که فقط یک آبشار «قابل اعتماد» در سلول‌های MDR کاربردی باقی بماند.

نتایج ما نشان‌دهنده حساسیت به آدیکال‌های اکسیژن در رده‌های سلولی با MDR با واسطه Pgp است. می توان فرض کرد که اگرچه مقاومت اولیه و انتخاب برای مقاومت دارویی با مکانیسم های زیادی تعیین می شود، هنوز هم می توان با افزایش اکسیداسیون درون سلولی بر مقاومت چند عاملی غلبه کرد. اکسیژن آزاد بلافاصله وارد واکنش های اکسیداسیون متعددی می شود که منجر به آسیب به ساختارهای مهم برای زندگی سلول - DNA و غشاها می شود. در آزمایش‌های فوق، نکروز به عنوان روش اصلی سفید کردن در مواجهه با رادیکال‌های اکسیژن شناخته شد. این بدان معنا نیست که نکروز تنها راه مرگ ناشی از اشکال آزاد اکسیژن است. در یک موقعیت خاص، غلبه این یا نوع دیگری از مرگ باید ثابت شود. تمایز استاندارد بین آپوپتوز و نکروز، انواع مکانیسم های مرگ را مشخص نمی کند. این ارزیابی برای تعیین اینکه آیا آسیب به غشاء اولیه است یا اینکه آیا این فرآیند به تأخیر می افتد مفید است. با این حال، ارزیابی نفوذپذیری غشای پلاسمایی در هر شرایطی مهم به نظر می رسد: نقض یکپارچگی غشاء باعث برگشت ناپذیری می شود، بنابراین، جزء نکروزه مرگ برای تولید سلول های MDR مهم است، زیرا Pgp می تواند از سلول ها در برابر عوامل محافظت کند. که باعث القای آپوپتوز می شوند، اما نه از موادی که باعث ایجاد نکروز می شوند.

آخرین شرایط تعجب آور نیست. برای عملکرد این پروتئین غشای پلاسمایی، به دلیل یکپارچگی آن به یک حالت فیزیکی و شیمیایی خاصی نیاز دارد. با نکروز، آسیب شدید به سلول رخ می دهد که عمدتاً به دلیل اختلال در حمل و نقل آب و یون ها است. این آسیب‌ها تقریباً بر هر ساختار سلولی تأثیر می‌گذارد، برخلاف آبشارهای آپوپتوز، که در برش متوالی سوبستراها بیان می‌شوند - فرآیندی وابسته به انرژی که شامل تشکیل کمپلکس‌های پروتئین-لیپیدی چند جزئی در سلول و ویژگی دقیق برهمکنش است. کاسپازها با بسترها مسدود کردن یک یا چند پیوند از چنین آبشاری (به عنوان مثال، در نتیجه اختلال در حمل و نقل چربی در سلول‌های دارای MNA MS، مجتمع‌های سیگنالینگ موضعی "به درستی" تشکیل نمی‌شوند) انتقال سیگنال‌ها به مکانیسم‌های پایین دستی را قطع می‌کند و در نتیجه سلول ایجاد می‌شود. فرار از مرگ و در نهایت تشکیل مقاومت همچنین به همین دلیل برای مبارزه با MDR، مطلوب است که مکانیسم های مرگ چندگانه باشد و شامل فعال شدن نه تنها کاسپازها، بلکه شامل: سایر خانواده های پروتئازها (لیزوزومی، پروتئازومی، هسته ای) باشد. و همچنین تقویت سیگنال (مسیر میتوکندری) و اختلال در نفوذپذیری غشای پلاسمایی. هر چه مکانیسم های مرگ بیشتر در سلول های مقاوم فعال شود، نتیجه نهایی غلبه بر MDR قابل اطمینان تر است.

1. ژن MYR\ و فنوتیپ MDR با واسطه گلیکوپروتئین P را می توان با قرار گرفتن در معرض کوتاه مدت منفرد با سلول های MN القا کرد.< веществ, в том числе противоопухолевых препаратов. МЛУ закрепляется в

سلول هایی که پس از مواجهه زنده ماندند. فعال سازی اپی ژنتیک در MOT یک فنوتیپ MDR پایدار تولید می کند.

2) تشکیل فوری MDR با فعال سازی بیان ژن ER1 تضمین می شود: القای رونویسی آن و تثبیت mRNA.

3) فعال شدن MDR شامل مکانیسم های کلی پاسخ سلول به استرس است: مسیر اسپاتیدیلینوزیتول، پروتئین کیناز C، بسیج 2+ داخل سلولی، فعال شدن NakB، پروتئین کینازهای فعال شده با میتوژن و تنظیم وضعیت فیزیکی کروماتین. مهار این مکانیسم ها از ایجاد MDR در سلول هایی که از درمان با این داروهای تومور زنده می مانند، جلوگیری می کند.

4) غلبه بر سد PgP و ایجاد مکانیسم های مرگ که در سلول های دارای MDR عمل می کنند، شرایط لازم و کافی برای تخریب چنین سلول هایی است.

5) Pgp به صورت جداگانه و فنوتیپ MDR به عنوان یک کل، بقای pgp را تحت تأثیراتی که باعث نقض اولیه یکپارچگی غشای اوماتیک می شود، تضمین نمی کند. بنابراین، غشای پلاسمایی یک هدف آپئوتیک است و القای نکروز یکی از راهبردهای غلبه بر مقاومت شریانی است.

6) مرگ سلول ها با MDR، ناشی از نقض یکپارچگی غشای زیماتیک (لیز با واسطه سوراخ)، ناشی از لنفوسیت های T سمی است که در پاسخ به ایمن سازی با سلول های کول اصلاح شده برای بیان سیتوکین ها ایجاد می شود.

7) متابولیت های داخل سلولی که می توانند به غشای زیماتیک آسیب رسانده و باعث مرگ سلول ها با MDR شوند، مولکول های آزاد اکسیژن هستند. تولید آنها تحت تاثیر گارات های ضد تومور مکانیسم موثری برای غلبه بر MDR است.

انتشارات اصلی در مورد موضوع پایان نامه:

1. Shtil A.، Shushanov A.، Stavrovskaya A.، Moynova E. فراوانی متاستاز در سلول های تومور همستر سوریه برای سطوح پایین مقاومت چند دارویی "معمولی" انتخاب شده است. آسیب شناسی تجربی و سم شناسی، 1373، 46، 257-262.

2. Erokhina M., Shtil A., Shushanov S., Sidorova T., Stavrovskaya A. بازسازی نسبی اسکلت سلولی اکتین در فیبروبلاست های همستر سوریه تبدیل شده برای سطوح پایین مقاومت چند دارویی "معمولی" J/FEBS Letters، 1994،341، 295-298.

3. Stromskaya T., Filippova N., Rybalkina E., Egudina S., Shtil A., Elisseenkova A., Stavrovskaya "A. تغییرات در سنتز ملانین در سلول های ملانوم انسانی در شرایط آزمایشگاهی برای چند دارو lesislaaccJ/Axperimental and Toxicological Pathology, 199 47، 157-166.

4. Yu R.، Shtil A.، Tan T.-H.، Roninson I.، Kong T. Adriamycin کیناز N ترمینال C-Jun را در سلول های لوسمی انسانی فعال می کند: یک ارتباط با آپوپتوز JlCancer نامه: 1996،107، 73 -81.

5. Komarov P., Shtil A., Buckingham L., Balasubramanian M., Piraner O., Emanuel M, Roninson I., Coon J. Inhibition of cytarabine-induced MDR1 (فعال سازی ژن P-گلیکوپروتئین در سلول های تومور انسانی توسط چربی استرهای اسید-PEG-چرب، بازدارنده های جدید عملکرد P-گلیکوپروتئین، 1996، 245-250.

6. Walter R., Shtil A., Roninson I., Holian O. میدان های الکتریکی 60 هرتز فعالیت پروتئین کیناز C و ژن مقاومت چند دارویی (MDR1) را مهار می کند که تنظیم کننده بالا است JIRadiatio Research, 1997,147, 369-375.

7. Walter R., Shtil A., Roninson I., Reyes H., Holian 0. اثرات فعالیت 60 هرتز الکتریکی پروتئین fon kinase C و بیان ژن مقاومت چند دارویی (MDR1) // Current Surgery, 1997, 54,366- 370 .

Stromskaya T.، Rybalkina E.، Filippova N.، Shtil A.، Stavrovskaya A. تنظیم بیان ژن MDR1 و عملکرد P-گلیکوپروتئین در سلول های ملانوم و هپاتوم کشت شده.//مجله بریتانیایی سرطان، 1998، 77، 1716-1725 .

Komarov P., Shtil A., Holian 0., Tee L., Buckingham L., Mechetner E., Roninson I., Coon J. فعال شدن ژن LRP (پروتئین مرتبط با مقاومت ریه) با قرار گرفتن در معرض کوتاه مدت انسان سلول های لوسمی به استر فوربول و سیتارابین.f/تحقیقات انکولوژی، 1998،10، 185-192.

I. Shtil A, Mandlekar S, Yu R., Walter R., Hagen K., Roninson I., Tan T.-H., Kong T. تنظیم افتراقی پروتئین کینازهای فعال شده با میتوژن توسط عوامل اتصال میکروتوبول در سینه انسان سلول های سرطانی J/Oncogene، 1999، 18، 377-384.

Damiano J.، Cress A.، Hazlehurst L.، Shtil A.، و Dalton W. مقاومت دارویی با واسطه چسبندگی سلولی (CAM-DR): نقش اینتگرین ها و مقاومت به آپوپتوز در رده های سلولی میلوم انسانیMBlood، 1999،93، 1658- 1667.

Shtil A.، Turner J.، Durfee J.، Dalton W. و Yu H. واکسن سلول تومور مبتنی بر سیتوکین به همان اندازه در برابر سلول‌های میلوم مقاوم به چند داروی والدین و ایزوژنیک مؤثر است: نقش لنفوسیت‌های T سیتوتوکسیک. I/Blood، 1999،93، 1831-1837.

Shtil A.، Ktitorova O.، Kakpakova E.، و Holian O. اثرات متفاوت عوامل فعال کننده ژن MDR1 (مقاومت به چند دارو) بر پروتئین کیناز C: شواهدی برای افزونگی مکانیسم های MDR اکتسابی در سلول های لوسمی.//لوسمی و لنفوم، 2000، 40، 191-195.

Shtil A.، Grinchuk T.، Tee L.، Mechetner E.، Ignatova T. بیان بیش از حد ژن MDR1 با کاهش پتانسیل گذرنده میتوکندری در سلول های لوسمی انسانی K562 که برای مقاومت چند دارویی با واسطه P-گلیکوپروتئین انتخاب شده اند، مرتبط است.//بین المللی مجله سرطان شناسی 2000,17,387-392. Shtil A.، Turner J.، Dalton W.، Yu H. مسیرهای جایگزین مرگ سلولی: دور زدن مقاومت پلیوتروپیک در سلول های میلوما: نقش لنفوسیت های T سیتوتوکسیک // لوسمی و لنفوم، 2000، 38، 59-70.

16. شتیل ع.ا. مسیرهای انتقال سیگنال و مکانیسم‌های رونویسی به عنوان اهدافی برای جلوگیری از ظهور مقاومت چند دارویی در سلول‌های سرطانی انسان.

17. Shtil A. A. فعال سازی اپی ژنتیکی مقاومت چند دارویی سلول های تومور: انتقال سیگنال، فعال سازی رونویسی و امکانات پیشگیری // "پیشرفت ها در زیست شناسی مدرن"، 2001، 121، 563-575.

18. Sidorova T.A.، Nigmatov A.، Kakpakova E.S.، Stavrovskaya A.A.، Gerassimova G.K.، Shtil A.A.، و Serebtyakov E.P. اثرات آنالوگ های ایزوپرنوئید oiSDB-ethylenediamine بر روی سلول های تومور مقاوم به چند دارو به تنهایی و در ترکیب با dmgs.l/Journal of Medicinal Chemistry، 2002،21،5330-5339.

19. Shtil A. A. ظهور مقاومت چند دارویی در سلول های لوسمی در طول شیمی درمانی: مکانیسم ها و پیشگیری.

20. Shtil A. A. مقاومت دارویی چند عاملی: P-glycoprotein در راس Vyraxmi.llJournal of Hematotherapy and Stem Cell Research, 2002,11,437-43

21. Shtil A. A. P-glycoprotein به عنوان یک هدف درمانی: خبرهای خوب.l/Leukemia، 2002، 2169-2170.

22. شتیل ع.ا. توسعه مقاومت چند دارویی به عنوان یک پاسخ فوری سلولی به تأثیرات اگزوژن // غشاهای بیولوژیکی (2003,20,236-243.

23. Lehne G.، Shtil A. A. هدف قرار دادن P-glycoprotein برای اجرای مکانیسم های مرگ سلولی در سرطان.، H "Targeted Cancer Therapies, An Odyssey"، 2003، 203-i

سرویس تجهیزات تکثیر مرکز تحقیقات علمی دولتی به نام. H.H. بلوخین RAMS امضا برای انتشار 14 . II .03 سفارش شماره 24"/. تیراژ 100 نسخه.

این پایان نامه باید در آینده نزدیک در کتابخانه ها موجود باشد.

480 روبل. | 150 UAH | 7.5 دلار "، MOUSEOFF، FGCOLOR، "#FFFFCC"،BGCOLOR، "#393939");" onMouseOut="return nd();"> پایان نامه، - 480 روبل، تحویل 1-3 ساعت، از 10-19 (به وقت مسکو)، به جز یکشنبه

شتیل، الکساندر آلبرتوویچ. مقاومت دارویی سلول های تومور با واسطه P-گلیکوپروتئین: مکانیسم های تشکیل فوری و رویکردهای غلبه بر: چکیده پایان نامه. ... دکترای علوم پزشکی: 14.00.14.- مسکو، 2003.- 46 ص: ill.

معرفی کار

مرتبط بودن موضوع

I. مقاومت چند دارویی سلولهای تومور:

مکانیسم های بیولوژیکی و اهمیت در انکولوژی

علیرغم پیشرفت های قابل توجه در فارماکولوژی، از جمله توسعه فناوری برای ایجاد داروهایی با خواص مورد انتظار، موفقیت شیمی درمانی برای تومورها توسط مهمترین ویژگی سیستم های زنده - توانایی پاسخ به تغییرات در محیط خارجی محدود شده است. یکی از مظاهر چنین قشری، ایجاد مقاومت سلول های تومور در برابر داروهای مورد استفاده در شیمی درمانی است. توزیع گسترده و ماهیت طولانی مدت و پایدار سازگاری سلولی با تأثیرات خارجی نشان می دهد که غلبه بر مقاومت دارویی ممکن است نه تنها با جستجوی داروهای مؤثرتر مرتبط باشد: احتمالاً هیچ دارویی وجود ندارد که سلول ها نتوانند نسبت به آن مقاومت ایجاد کنند. تنها تبیین مکانیسم‌های غیرولوژیکی مقاومت در برابر انواع مختلف استرس به عنوان مبنایی برای توسعه استراتژی‌هایی برای غلبه بر مقاومت دارویی، شرط لازم برای افزایش اثربخشی درمان بیماران سرطانی است.

مقاومت چند دارویی (MDR) نئوپلاسم ها - حفظ قابلیت زنده ماندن سلول های تومور در پاسخ به اثرات داروهای مختلف - یکی از دلایل اصلی پیشرفت است! بیماری ها: تومور بدون توجه به ترکیبی از داروهای مورد استفاده، به شیمی درمانی حساس نیست. پدیده MDR یک ویژگی طولانی مدت و پایدار دارد: مکانیسم های مقاومت در طول نسل های سلولی به ارث می رسند. بنابراین، MDR یکی از عوامل کلیدی در پیشرفت تومور است.

دو نوع اصلی مقاومت سلولی در برابر سموم وجود دارد. اولیه g.e. مقاومت مشاهده شده قبل از قرار گرفتن در معرض داروهای شیمی درمانی به دلیل بیان مکانیسم های دفاعی در طول پیشرفت تومور است. بله فعال سازی

مکانیسم‌های ضد آپوپتوزی که به عوامل ایمنی ایجاد مقاومت می‌کنند ممکن است با مقاومت دارویی مرتبط باشند. مقاومت ثانویه (اکتسابی) در سلول هایی که در معرض استرس قرار دارند رخ می دهد. قبل از این اثرات، مکانیسم‌های محافظتی در چنین سلول‌هایی ضعیف بیان می‌شوند یا وجود ندارند. سلول ها پس از درمان با یک سم زنده می مانند، در برابر بسیاری از مواد مقاومت می کنند - MDR (Riordan, Ling, 1985). انتخاب بیشتر فنوتیپ اکتسابی را در طول نسل‌های سلولی تثبیت می‌کند.

مهمترین مکانیسم MDR کاهش تجمع سموم در سلول، به دلیل دفع مواد به محیط بین سلولی است. این انتقال توسط پروتئین انتگرال غشای پلاسمایی P-glycoprotein (Pgp) به دلیل انرژی هیدرولیز ATP انجام می شود (Juliano, Ling, 1984). MDRI(مقاومت چند دارویی 1)، موضعی بر روی کروموزوم 7 (چن و همکاران، 1986). داده های متعدد نشان می دهد که افزایش mRNA MDRIو Pgp اغلب به عنوان عاملی در مقاومت انواع تومورهای متعدد به درمان عمل می کند (لین و همکاران، 1995؛ استاوروسکایا و همکاران، 1998).

II. توسعه MDR در سلول های تومور: بیولوژیکی مکانیسم ها به عنوان اهدافبرای جلوگیری

منطقی است که فرض کنیم که مقدار mRNA افزایش می یابد MDRIناشی از تکثیر این ژن است. این مکانیسم MDR در رده های سلولی کشت شده انتخاب شده برای بقا در حضور سموم شناسایی شده است (رونینسون، 1991). با این حال، هنگام تجزیه و تحلیل تومورهای انسانی، تقویت ژن MDR1پس از درمان در تومورهای اولیه یا در نئوپلاسم ها مشاهده نشد. علت احتمالی MDR بالینی، بیان بیش از حد است MDRIو Pgp با ساختار ژنی بدون تغییر (حفظ تعداد کپی و توالی نوکلئوتیدی)، یعنی. فعالیت اپی ژنتیک فنوتیپ افزایش سطح mRNA در کشت سلولی تومور انسانی MDRIو مقدار Pgp ذکر شده در طول یک درمان شیمی درمانی

متمایز در ساختار شیمیایی و مکانیسم های عمل (چوداری، آنینسون، 1993). شواهدی از تجمع mRNA به دست آمده است MDR\در متاستازهای سرطان به بافت ریه در حال حاضر 20-50 دقیقه پس از شروع انفوزیون ریه حین عمل با دوکسوروبیسین (Abolhoda et al., 1999). این نتایج (امکان فعال سازی اپی ژنتیکی MDR را در آزمایش و در شرایط دیگر تایید می کند: افزایش mRNA MDR\و Pgp در تومورها می تواند بدون تکثیر ژن رخ دهد MDRI.

این نوع تنظیم بیولوژیکی - فعال سازی فوری فنوتیپ - شامل القای رونویسی ژن (ژن ها) کد کننده فنوتیپ مربوطه، و/یا کنترل پس از رونویسی (تثبیت NK، تنظیم سنتز پروتئین و عملکرد در رابطه) است برای MDR، این نوع تنظیم به معنای امکان القای ژن است MDR\محرک های سلولی و توسعه نسبتاً سریع مقاومت در سلول های r/کلسترول در پاسخ به استرس. القا پذیری ژن MDRIتوسعه مسیرهای سیگنالینگ از محیط سلول به هسته را پیشنهاد می کند. چنین مسیرهایی می تواند شامل مکانیسم های سیگنال دهی استرس باشد: پروتئین کیناز C ІКС، فسفولیپازها و Ca2+ داخل سلولی، کینازهای ادراری فعال شده با میتوژن، فاکتور هسته ای کاپا B (NFkB). سیگنال دهی به ناحیه تنظیم کننده یک ژن MDRIو رونوشت فعال شدن فشرده سازی ژن را تضمین می کند.

مطالعه مقررات MDR یک جنبه عملی اساسی نیز دارد. مهار این مکانیسم ها با استفاده از تأثیرات فارماکولوژیک و/یا ژنتیکی از ایجاد MDR در فرآیند جلوگیری می کند [myoteragash.

III. غلبه بر MDR تشکیل شده سلول های تومور.

اگر یک ژن فعال کننده را مسدود کند MDR\سیگنال ها می توانند از تشکیل MDR در سلول های حسی اولیه جلوگیری کنند

این رویکرد برای غلبه بر مقاومت از قبل شکل گرفته قابل اجرا نیست. روش سنتی مبارزه با MDR ثانویه استفاده از تعدیل کننده های Pgp در ترکیب با سیتواستاتیک است (Lehne, 2000). با این حال، استفاده از مهارکننده های Pgp به دلیل عوارض جانبی (اختلالات ریتم قلب، عدم تعادل ایمنی) محدود می شود. به همان اندازه مهم است که اثربخشی ترکیبات تعدیل کننده + هورمون استاتیک ممکن است به دلیل مسدود کردن حداقل برخی مکانیسم های مرگ سلولی در طول انتخاب برای MDR کاهش یابد.

غلبه بر MDR تشکیل شده در صورت رعایت دو شرط قابل دستیابی است: 1) غلظت دارو باید برای فعال کردن مکانیسم های موثر مرگ سلولی کافی باشد، 2) عملکرد این مکانیسم ها باید در سلول های دارای MDR حفظ شود. شرط اول در صورتی انجام می شود که دارو بر سد Pgp غلبه کند. با این حال، لازم است ثابت شود که دستیابی به غلظت بحرانی درون سلولی عامل برای فعال کردن مرگ سلولی که در برابر بسیاری از تأثیرات مقاوم است، کافی است. مکانیسم‌های بقا که در سلول‌های مقاوم عمل می‌کنند باید به عنوان اهدافی برای از بین بردن دومی عمل کنند.

برای اجرای شرط دوم، رویکردهایی با هدف لیز سلول های مقاوم به عنوان مکانیزمی برای القای مرگ آنها امیدوارکننده به نظر می رسد. واکسیناسیون موش‌ها با سلول‌های میلوم سینژنیک ترانسفکت شده با cDNA برخی از سیتوکین‌ها منجر به ایجاد یک پاسخ ایمنی با واسطه لنفوسیت T سیتوتوکسیک (CTL) و رد تومور پیوند شده در حیوانات واکسینه شده می‌شود (Dranoff et al., 1993; Levitsky et al. .، 1996). CTL ها سلول ها را با استفاده از گرانزیم B و پرفورین لیز می کنند. از آنجایی که گرانزیم B کاسپاز 3 را فعال می کند، یکی از عوامل دیستال آپوپتوز، و پرفورین باعث آسیب اولیه به غشای پلاسمایی (نکروز) می شود، می توان امیدوار بود که SL ها در صورت مسدود شدن مکانیسم های مرگ پروگزیمال موثر باشند. ایجاد پیوندهای دیستال آپوپتوز در ترکیب با نکروز

منجر به مرگ سلول های مقاوم به داروهای ضد تومور - محرک های مرگ برنامه ریزی شده سلولی می شود.

فرمول بندی مسئله

MDR یک پدیده بالینی نامطلوب است که غلبه بر آن مستلزم آگاهی از مکانیسم های توسعه آن و راه های وقوع مرگ سلولی است. ابتدا لازم است مکانیسم های ایجاد MDR در MD/? سلول‌های انسانی l/pgp منفی، مطالعه این مکانیسم‌ها برای جلوگیری از ایجاد مقاومت در سلول‌های حساس در درجه اول مفید است. ثانیا، تجزیه و تحلیل فرآیندهای مرگ که در سلول‌های دارای MDR عمل می‌کنند، مبنایی را برای غلبه بر مقاومت در شرایطی که MDR ثانویه تشکیل شده است، ایجاد می‌کند.

هدف از این مطالعه ایجاد مکانیسم‌های تشکیل فوری غدد لنفاوی در سلول‌های تومور انسانی و ایجاد رویکردهایی برای غلبه بر این مقاومت است.

بهینه‌سازی مدل‌هایی برای توسعه MDR در کشت‌های سلولی تومور انسانی در پاسخ به اثرات شیمی‌درمانی و آگونیست‌ها و آنتاگونیست‌های تجربی مکانیسم‌های سیگنالینگ.

اصلی ترین ها را مشخص کنید! مکانیسم توسعه فوری MDR هنگامی که سلول ها با عوامل ضد تومور درمان می شوند: تقویت ژن MDRI،انتخاب سلول های Pgp مثبت یا سرکوب جدید MDR.

بررسی مسیرهای انتقال سیگنال درون سلولی که فعال شدن MDR - پروتئین کیناز C، فسفولیپاز C، Ca + سلولی، پروتئین کینازهای فعال شده با میتوژن، NFkB را تنظیم می کند.

برای شناسایی نقش فعال سازی متجاوزانه و تنظیم پس از تجاوز (پایداری mRNA) بیان ژن MDRIدر توسعه فوری MDR در پاسخ به قرار گرفتن در معرض شیمی درمانی.

ایجاد راه هایی برای جلوگیری از ایجاد MDR در سلول های تومور هنگام ترکیب داروهای شیمی درمانی با مسدود کننده ها MDR\-فعال کردن مسیرهای سیگنالینگ و مهارکننده های رونویسی ژن

برای مطالعه سینتیک فعال‌سازی کاسپ‌های ترشح‌کننده و عامل، تغییرات پتانسیل گذرنده میتوکندری، برش پروتئولیتیک پلی‌(ADP) ریبوز پلیمراز، تکه تکه شدن DNA بین‌نوکلئوزومی و یکپارچگی غشای پلاسمایی در سلول‌های والدین و انواع با MDR در صورت درمان دارو توسط P-گلیکوپروتئین منتقل نمی شود.

از واکسیناسیون با سلول های تومور بیان کننده سیتوکین برای ایجاد پاسخ ایمنی در برابر سلول های MDR استفاده کنید.

مقررات ارائه شده برای دفاع.

تشکیل MDR با واسطه Pgp - یک پاسخ فوری سلولی به بسیاری از تأثیرات - با فعال سازی اپی ژنتیکی ژن انجام می شود. MDRI.این فعال‌سازی به دلیل مکانیسم‌های متعدد سیگنال‌دهی درون سلولی، القای پروموتر ژن و تثبیت mRNA است و می‌توان از مهارکننده‌های این سیگنال‌ها جلوگیری کرد.

غلبه بر MDR با واسطه Pgp ممکن است با هدف قرار دادن غشای پلاسمایی سلول های مقاوم همراه باشد. Pgp از سلول ها در برابر اختلال در یکپارچگی غشای پلاسما - نکروز محافظت نمی کند.

پیشینه علمی برای اولین بار، ایده تشکیل MDR به عنوان یک پاسخ فوری یک سلول به یک محرک برون زا اثبات شده است.

برای اولین بار، مکانیسم توسعه یک فنوتیپ مقاومت دارویی خاص - MDR با واسطه Pgp - به طور مفصل مورد مطالعه قرار گرفته است: فعال سازی اپی ژنتیکی ژن کد کننده این پروتئین MDRI.

3. مدلی از فعال سازی فوری ژن برای اولین بار ایجاد شد MDRI،

همراه با کسب یک فنوتیپ پایدار از MDR با واسطه Pgp در سلول های تومور انسانی کشت شده. \. مسیرهای انتقال سیگنال، مکانیسم‌های فعال‌سازی رونویسی و تنظیم ژن پس از رونویسی شناسایی شده‌اند. MDRXدر سلول های در معرض داروهای ضد تومور. 5. برای اولین بار، کلاس هایی از مواد دارویی - مسدود کننده های انتقال سیگنال درون سلولی - برای جلوگیری از تشکیل MDR با واسطه Pgp در سلول های تومور مشخص شده اند. 5. برای اولین بار، مکانیسم های مرگ در سلول ها با MDR با واسطه Pgp مورد مطالعه قرار گرفت و رویکردی برای غلبه بر مقاومت ایجاد شد که شامل آسیب اولیه به یکپارچگی غشای پلاسمایی بود.

ارزش عملی

توسعه روش‌هایی برای جلوگیری از توسعه فوری MDR با واسطه Pgp در سلول‌های تومور کشت‌شده هنگام قرار گرفتن در معرض داروهای شیمی‌درمانی.

آزمایشات پیش بالینی واکسن های دستکاری شده ژنتیکی اصلاح شده برای غلبه بر MDR.

تایید کار.

این پایان نامه در 30 ژوئن 2003 در کنفرانس مشترک آزمایشگاه های ژنتیک سلول تومور، سیتوژنتیک با گروهی از ژنتیک مولکولی، انکوژن های ویروسی و سلولی، غدد درون ریز مولکولی، ایمنی ضد تومور، فارماکولوژی بیوشیمیایی، تحقیقات پزشکی، تشخیص تجربی و بیوتراپی تومورها؛ گروه Schmunology، هماتولوژی، شیمی درمانی، فارماکولوژی بالینی، روش های درمان پیشرفته مرکز تحقیقات سرطان روسیه به نام. N.N. RAMS بلوخین.

مواد اصلی پایان نامه در کنفرانس های زیر ارائه شد: دومین سمپوزیوم بین المللی "مقاومت دارویی سیتواستاتیک" (U Germany, 1991). کنفرانس گوردون "پیشرفت در شیمی درمانی" (نیویورک، لندن، ایالات متحده آمریکا، 1994); "سموم شناسی مولکولی" (کوپر کوه، ایالات متحده آمریکا، 1995); "پاسخ های ژنومی القایی" (استیونسون، ایالات متحده آمریکا، 1996)؛ "اسیدهای نوکلئیک - یکپارچه سازی تشخیص مولکولی و درمان" (سان دیگو، ایالات متحده آمریکا، 1996). کنفرانس سالانه انجمن آمریکایی تحقیقات سرطان (1994-2001): ششم وهفتمین کنگره "پیشرفت در انکولوژی"، (هرسونیسوس، یونان، 2001، 2002). "ساختار و عملکرد هسته سلول" (سنت پترزبورگ، 2002)، و همچنین در سمینارها در Oncotech, Inc. (ایروین، ایالات متحده آمریکا، 1996)، موسسه سالک (لاجولا، ایالات متحده آمریکا، 1997)، مرکز سرطان لی مافیت (تامپا، ایالات متحده آمریکا، 1997)، آزمایشگاه جکسون (بار هاربر، ایالات متحده آمریکا، 1997)، مرکز سرطان اسلون-کترینگ، نیویورک ] ایالات متحده آمریکا، 1999)، دانشگاه های کپنهاگ (2002)، اینسبروک (2002) و گرونینگی (2003)، دانشگاه دولتی مسکو. M.V. Lomonosov (2002)، موسسه تحقیقاتی آسیب شناسی تجربی، انکولوژی و رادیو بیولوژی به نام. R.E. Kavetsky (کیف، 2002).

انتشارات.

ساختار و محدوده پایان نامه.

مطالعات مرگ سلولی برنامه ریزی شده - آپوپتوز (از یونانی. αποπτωσις - افتادن برگ) - در دهه اخیر چندین اکتشاف علمی مهم را به دنبال داشته است: یک سیستم جامع برای اجرای این پدیده کشف شد - ژن های تنظیم کننده آن و همچنین گیرنده های سلولی سطحی و لیگاندهای آنها که واسطه مرگ سلولی هستند شناسایی شدند.
در آزمایش های متعدد، دانشمندان ثابت کرده اند: مرگ برنامه ریزی شده یک ویژگی اجباری و جدایی ناپذیر هر سلول از هر سیستم چند سلولی است. (هر روز حدود 5 درصد از سلول های بدن دچار آپوپتوز می شوند و سلول های جدید جای آنها را می گیرند. بین 15 دقیقه تا 2 ساعت طول می کشد تا یک سلول بدون اثری ناپدید شود).
در سال 2002، سیدنی برنر، زیست شناس مولکولی ( سیدنی برنررابرت هورویتز ( اچ رابرت هورویتز) و جان سولستون ( جان ادوارد سالستون) برای اکتشافات در زمینه "تنظیم ژنتیکی رشد ارگانیسم و ​​مرگ برنامه ریزی شده سلولی" جایزه نوبل فیزیولوژی یا پزشکی را دریافت کرد.
کارشناسان بر این باورند که تحقیقات بیشتر در مورد آپوپتوز می‌تواند به تولید داروهایی برای مقابله با بیماری‌های خطرناکی مانند سرطان، سکته مغزی، حمله قلبی، بیماری آلزایمر، بیماری پارکینسون و برخی دیگر کمک کند.

الکساندر آلبرتوویچ استیل– دکترای علوم پزشکی، رئیس آزمایشگاه مکانیسم‌های مرگ سلول‌های توموری، موسسه تحقیقات سرطان‌زایی، مرکز تحقیقات سرطان روسیه به نام. N.N. آکادمی علوم پزشکی بلوخین روسیه.

متخصص در زمینه انکولوژی سلولی و مولکولی.

علایق علمیمکانیسم های مرگ برنامه ریزی شده سلولی (باکتری ها و یوکاریوت ها، به ویژه سلول های تومور).

سوالات_النا وتروا
مارس آوریل
مسکو، 2009

الکساندر آلبرتوویچ، آپوپتوز یکی از فرآیندهای بیولوژیکی کلیدی است که در طول زندگی در بدن اتفاق می افتد. نقش مهمی در رشد جنینی بدن (مورفوژنز) و حفظ تعادل پویا در اندام‌ها و بافت‌ها (هموستاز) و در فرآیند شروع و توسعه تومورها دارد.(سرطان زایی).
در چه موارد دیگری برنامه خودکشی سلولی در بدن روشن می شود؟ و چگونه این برنامه "می داند" چه چیزی برای بدن خوب است و چه چیزی بد است؟

مرگ برنامه ریزی شده در طول فرآیندهای فیزیولوژیکی فعال می شود - در ساده ترین موجودات، به عنوان مثال، باکتری ها، برای حفظ اندازه جمعیت سلولی که برای شرایط محیطی خاص (مواد مغذی، دما) بهینه است. این اثر در بیوفیلم ها، جوامع باکتریایی خود تنظیم کننده مشاهده می شود.
در رشد جنینی بافت‌ها و اندام‌های ارگانیسم‌های بالاتر و در ارگانیسم بالغ، مرگ برنامه‌ریزی‌شده برای جایگزینی جمعیت‌های سلولی - پیری و از دست دادن عملکرد - با جمعیت جوان است.
این برنامه نمی داند چه چیزی برای بدن خوب است و چه چیزی بد است، فقط زندگی چگونه کار می کند - مرگ یک طرف زندگی است...

یعنی یک عارضه فرگشت همین استآگوست وایزمن در مورد چه چیزی صحبت می کند؟جانورشناس و تکامل شناس آلمانی در پایان قرن نوزدهم نوشت ...

بنابراین، مرگ سلول‌های غیر توموری در طول شیمی‌درمانی بد است: آپوپتوز سلول‌های طبیعی در اینجا نامطلوب است، اما این برنامه بین «بد و خوب» توزیع نمی‌شود، بلکه به کسانی که می‌توانند زنده بمانند، اجازه می‌دهد تا زنده بمانند و بیشتر را از بین ببرد. آسیب‌پذیر، حساس‌تر... عدالت در درک انسان اینجا جواب نمی‌دهد و باید تاوان این ناامیدی و «بی‌وجدانی» را بپردازید.

دانشمندان در مورد وجود آپوپتوز نه چندان دور، حدود نیم قرن پیش، مطلع شدند. این کشف چگونه بر توسعه علم تأثیر گذاشت؟

این کشف این امکان را در مدت کوتاهی - در طی حدود 15 سال - ایجاد ایده هایی در مورد مهمترین فرآیندهای بیولوژیکی - انتقال سیگنال های درون سلولی، تنظیم پروتئولیز - فرآیند تجزیه پروتئین ها و پپتیدها در بدن، تنظیم شکل هسته، اندامک ها و غشاها.

مطالعه نقش پروتئین های کروماتین در بیان ژن تشدید شده است.

ایده‌های مربوط به مکانیسم اثر عوامل سیتواستاتیک، عمدتاً داروهای ضد تومور و پرتوهای یونیزان، بر روی سلول‌های تومور و نرمال اثبات شده‌اند.

کشف مکانیسم های مرگ سلولی امروزه بسیاری از جهات علمی - از زیست شناسی و شیمی تا درمان بیماری های انسان، حیوان و گیاه را متمرکز کرده است.

بله، این جهت یکی از امیدوار کننده ترین در زیست شناسی مولکولی در نظر گرفته می شود. این به طور خوش بینانه با توسعه داروهای اساساً جدید برای درمان بیماری های دژنراتیو هنوز صعب العلاج، سرطان، و حتی احتمال شکست دادن پیری همراه است.
بر اساس برخی گزارش ها، امروزه بیش از چهارصد آزمایشگاه در جهان به نوعی درگیر این موضوع هستند.

نوید مطالعه آپوپتوز برای زیست شناسی مولکولی به این دلیل است که این پدیده (و به طور گسترده تر، مرگ سلولی) ترکیبی از بسیاری از ایده ها و جهت های علمی را پوشش می دهد. یک سلول، چه ساده و چه پیچیده، همیشه یک سیستم پیچیده است و مرگ یک ویژگی جدایی ناپذیر موجودات زنده است. بنابراین مطالعه مرگ به طور کلی برای درک ماهیت زندگی امیدوارکننده است.
و در واقع، از نظر عملی، مطالعه مکانیسم‌های مرگ، تعیین تأثیر بسیاری از داروها را ممکن می‌سازد.

نسبتاً اخیراً این پدیده کشف شده است اثر تماشاگر (« اثر تماشاگر"): هنگامی که سلول ها به هر دلیلی می میرند، سیگنال خاصی را به سلول های سالم مجاور خود می فرستند و خود تخریب می شوند. چه چیزی آنها را تحریک می کند؟ آیا فرضیه ای در این مورد وجود دارد؟

این نمونه ای از تنظیم بیولوژیکی در یک سیستم پیچیده است: به این ترتیب سلول ها با ارسال سیگنال به همسایگان خود یکدیگر را می کشند. سیگنال (معمولا یک پروتئین محلول در آب) برای سلول های خود مضر نیست، اما برای سلول هایی با منشاء متفاوت واقع در همان جمعیت مخرب است - بازی بر اساس این تفاوت در حساسیت است.

نقش اکسیژن و پراکسید هیدروژن در فرآیند آپوپتوز چیست؟

بسیار مهم - رادیکال های اکسیژن از نظر شیمیایی بسیار فعال هستند. آنها واکنش هایی را ایجاد می کنند که به پروتئین ها، اسیدهای نوکلئیک و لیپیدها آسیب می رساند.

اثر درمانی پرتوهای یونیزان و آنتی بیوتیک های آنتراسایکلین بر اساس همین خاصیت است. تحریک ترکیبات شیمیایی خاص - حساس کننده نور - توسط نور باعث انفجار اکسیژن و آسیب شدید سلولی می شود. اگر چنین حساس کننده نوری در تومور جمع شود و تومور روشن شود، مرگ سلول های تومور رخ می دهد. در سرطان شناسی، چنین درمانی فتودینامیک نامیده می شود و به طور گسترده ای برای تومورهایی استفاده می شود که در دسترس نور هستند و اندازه آنها خیلی بزرگ نیست.

اصل آپوپتوز در هر دو سطح سلولی و درون سلولی، در بافت ها و اندام ها مشاهده می شود. ولادیمیر اسکولاچف، آکادمی آکادمی علوم روسیه پیشنهاد کرد که این پدیده را فنوپتوز نامیده شود. چرا در طبیعت برخی از گیاهان و حیوانات (بامبو پس از گلدهی، ماهی قزل آلا پس از تخم ریزی) در اوج زندگی خود برنامه خود تخریبی را اجرا می کنند؟ بعید است که این به دلیل جهش های ژنی برگشت ناپذیر باشد.

احتمالاً ربطی ندارد، اما این مکانیسم طبیعت است - زبانی که می گویند بامبوی پژمرده خواهد مرد... مکانیسم اپی ژنتیکی است - هیچ جهشی وجود ندارد، اما تغییرات سریعی در خواص فیزیکی و شیمیایی کروماتین وجود دارد. ، و یک ژن مهم (ژن) از کار خاموش می شود. چنین زبانی نیازی به تخریب ندارد - کافی است یک گروه شیمیایی - متیل، فسفات، استیل - از یک پروتئین به پروتئین دیگر متصل یا جدا شود.
اشاره کافی...

این فرضیه وجود دارد که سرطان همچنین مرگ برنامه ریزی شده یک ارگانیسم ژنتیکی ناپایدار است که حاوی آسیب های جبران ناپذیر است (و بنابراین برای تکامل خطرناک است). به طور فزاینده‌ای شنیده می‌شود که انکولوژیست‌ها می‌گویند ظاهر شدن یک سلول کاملاً تبدیل شده فقط یک موضوع زمان است. اگر چنین است، پس سرطان مانند پیری یک بیماری نیست، بلکه نتیجه مشخصی از توسعه یک سیستم زنده است. اما دانشمندان فرض می‌کنند و آینده‌شناسان پیروزی بر سرطان را در آینده پیش‌بینی می‌کنند. و در واقع، در نهایت، انسان مدتهاست که از تکامل انتظار رحمت ندارد. آیا می توان سرطان را شکست داد؟

شاید نتوان آن را شکست داد - سرطان یکی از مکانیسم هایی برای از بین بردن یک فرد غیرقابل تحمل، همراه با سایر فرآیندهای پاتولوژیک معمولی - التهاب، آلرژی است. زندگی ارگانیک بر روی گردش موجودات ساخته شده است - مرگ اجتناب ناپذیر است و مکانیسم هایی برای اجرای آن ضروری است. سرطان یکی از این مکانیسم هاست. وظیفه دانشمندان به تاخیر انداختن مرگ است نه اجتناب از آن.

اگر بین پیری و ابتلا به سرطان ارتباط قوی وجود دارد و ظاهراً کسی در این مورد شک ندارد، شاید لازم باشد جبهه مبارزه با آن را تا حد مبارزه با پیری گسترش دهیم؟

مبارزه با پیری هم به عنوان بخشی از مبارزه با تومورها و هم از جنبه های دیگر ضروری است - این بدون شک است.

دفاع ضد سرطانی بدن بر اساس آپوپتوز است. چرا آپوپتوز پس از یک سری جهش از کار می افتد؟ چرا بدن در نقطه ای از مقاومت دست می کشد و شروع به کمک به تومور (مثلاً سیستم ایمنی) می کند؟

زیرا آپوپتوز مانند هر فرآیند بیولوژیکی با جهش مختل می شود و همچنین به این دلیل که آپوپتوز بدون جهش به راحتی مختل می شود.

نقش گروه آنزیم های سیتوکروم P450 در فرآیند سرطان زایی چیست؟

3.سر جان سولستون- زیست شناس بریتانیایی، عضو انجمن سلطنتی بریتانیا. آزمایشگاه او شرح کاملی از ترتیب تقسیم سلول‌های جنینی نماتد Caenorhabditis elegans را گردآوری کرد و سرنوشت مطلقاً تمام 959 سلول آن را در طول تکامل ردیابی کرد.

بدون شک. وجود چنین پروتئین هایی اهمیت اساسی آپوپتوز را در زیست شناسی تأیید می کند - مکانیسم های این پدیده تصادفی نیست، آنها در DNA سلول کدگذاری می شوند و زمانی که سیگنال مناسب وجود دارد وارد عمل می شوند. بدون آنها مرگی وجود ندارد.

اخیراً محققان آمریکایی از موسسه پزشکی آلبرت انیشتین کشف کردند که یک قطعه کوچک از پروتئین داخل سلولی p115 آپوپتوز را فعال می کند.
قبل از آپوپتوز، p115 به دو قطعه تجزیه می شود که کوچکتر از 205 اسید آمینه تشکیل شده است. به گفته دانشمندان، نقش مهمی در روند مرگ سلولی ایفا می کند، زیرا بیان آن منجر به آزاد شدن سیتوکروم C از میتوکندری به سیتوپلاسم سلول ها می شود که منجر به مرگ آنها می شود. دانشمندان امیدوارند که این کشف بتواند منجر به توسعه داروهای جدید برای مبارزه با سرطان و سایر آسیب شناسی هایی شود که با تکثیر بیش از حد سلول مشخص می شوند.
به نظر شما کدام یک از آخرین اکتشافات در زمینه آپوپتوز برای پزشکی و زیست شناسی کلیدی است؟

رویکردهای جدید برای درمان بیماری های تکثیری مبتنی بر یک پدیده مشابه است - ایجاد شرایطی که تحت آن پروتئین های خود سلول به عنوان کشنده عمل کنند. بنابراین، برش پروتئولیتیک پروتئین پلی (ADP-ribose) پلیمراز، که در طی القای آپوپتوز رخ می دهد، قطعه آن را تشکیل می دهد که به DNA متصل می شود و از ترمیم آسیب آن جلوگیری می کند. پروتئین معمولی پلی مراز (ADP-ribose) که برای التیام آسیب DNA ضروری است، برای سلول مخرب می شود.

آخرین اکتشافاتی که اکنون کاربردهای عملی مهمی برای تنظیم مرگ سلولی دریافت می کنند، شواهدی مبنی بر امکان سرکوب یک ژن خاص در یک سلول و کل ارگانیسم از طریق معرفی به اصطلاح RNA های ضد سنجاق مو کوتاه است.

فناوری ژن خاموش ( خاموش کردنژن)، زمانی که اتصال مولکول های RNA دو رشته ای کوتاه به توالی تنظیمی ژن هدف، توقف فرآیند سنتز در این ژن را ممکن می سازد.
ژن درمانی ناقل (ویروسی) امیدوارکننده.

این ابزارها که محصول سال ها همکاری شیمیدانان و زیست شناسان هستند، دستیابی به خاموشی طولانی مدت ژن را ممکن می سازد. اگر محصولات چنین ژن هایی برای زنده ماندن سلول مهم باشد، ما با حداقل عوارض جانبی مرگ را القا می کنیم. مورد دوم به ویژه در یک کلینیک انکولوژی مهم است - اغلب بیماران شیمی درمانی را شدیدتر از خود بیماری تحمل می کنند... داروهای استاندارد هنوز به درستی درک نشده اند که کدام سلول ها و به چه روش هایی را از بین ببرند. ممکن است ژن درمانی موثرتر باشد و عوارض جانبی درمان کاهش یابد.

بدون شک، مفهوم هدفمند - هدفمند - اگرچه با مشکلات متعددی مواجه است، مثمر ثمر است (از انگلیسی در هدف - هدف، هدف) درمان تومور.

در شکل د اثر داروی Herceptin - (تولید شده توسط Roshe / سوئیس). ساخته شده بر اساس آنتی بادی هایی که می توانند پروتئین های گیرنده HER2 را مسدود کنند.
رشد تومور را مهار می کند.
وضعیت بیمار را تثبیت می کند.
دوره شیمی درمانی را کوتاه می کند.

(شکل وقتی با مکان نما روی آن کلیک می کنید بزرگ می شود)

داروهای انفرادی که برای غیرفعال کردن یک هدف خاص (پروتئین) در سلول تومور ایجاد می‌شوند، بسیار مؤثر هستند و در دوره‌های طولانی درمان به خوبی تحمل می‌شوند (مثلاً - Gleevec، Iressa).

آزمایشگاه شما مشغول تحقیق در مورد استراتژی هایی برای هدف قرار دادن مسیرهای شروع و اجرای مرگ سلول های تومور است. در حل این مشکلات تا کجا پیش رفته اید؟

متخصصان آزمایشگاه ما مکانیسم های مرگ سلول های تومور را تحت تأثیر داروهای جدید ایجاد شده در روسیه ایجاد کرده اند. به طور خاص، مکانیسمی شناسایی شده است که در آن می توان مقاومت دارویی سلول های تومور را دور زد: ترکیبات شیمیایی جدید بر سدی غلبه می کنند که در غیر این صورت از ورود داروها به سلول جلوگیری می کند.

علاوه بر تحقیق در مورد نقش ترکیبات شیمیایی در برنامه ریزی مجدد سلول ها به سلول های سرطانی و مرگ سلول های سرطانی، شما درگیر توضیح مکانیسم های مولکولی مرگ سلولی هستید. چه چیزی در مورد این مکانیسم ها مبهم باقی مانده است؟ دانشمندان هنوز باید به چه سوالاتی پاسخ دهند؟

مهم است که بفهمیم چگونه از القای آپوپتوز در سلول های غیر توموری جلوگیری کنیم. کشتن یک سلول مشکلی نیست، مشکل این است که چگونه از یک سلول سالم محافظت کنیم...

آیا آزمایشگاه شما روی مطالعه مکانیسم های عملکرد کشنده سلول های سرطانی کار می کند؟ آیا اصولاً می توان از فعالیت مخرب بدن یک سلول سرطانی و تأثیر آن بر بافت های طبیعی جلوگیری کرد؟

ممکن و ضروری است. به نظر می رسد که ابزارها فاکتور نکروز تومور را غیرفعال می کنند، سمی که توسط یک سلول سرطانی ترشح می شود و باعث تخریب سلول های طبیعی می شود، نوعی اثر تماشاگر. این محصولات در حال انجام آزمایشات بالینی اولیه هستند.

شما هشت سال در آمریکا کار کردید. چه چیزی رویکردهای روسی و غربی را برای مبارزه با سرطان متمایز می کند؟ مشخص است که در ایالات متحده بودجه قابل توجهی برای مبارزه با آن و پیشگیری از سرطان اختصاص داده شده است. و مهمترین نتیجه این اقدامات کاهش تدریجی مرگ و میر ناشی از سرطان است.
در روسیه، وضعیت بروز سرطان همچنان دشوار است. چه اقداماتی می تواند وضعیت نامطلوب را معکوس کند؟

سبک علمی غربی با تمایل به مطالعه عمیق مکانیسم ها، و نه فقط پدیده ها، کامل بودن بازنمایی، به لطف ارتباطات گسترده بین رشته ای، و رقابت زیاد برای ایجاد اطلاعات مهم علمی مشخص می شود.

مرگ و میر ناشی از سرطان همچنان یک مشکل جهانی است، اما برای برخی از مناطق وضعیت بهبود یافته است. به عنوان مثال، موارد کمتری از سرطان معده وجود داشته است - شرایط رژیم غذایی تغییر کرده است، نگهداری طولانی مدت مواد غذایی با توسعه صنعت تبرید ایمن شده است، تبلیغات ضد تنباکو سازماندهی شده است - این اقدامات عمومی در واقع نتایج مثبتی به همراه دارد. .
در مورد نوآوری در مراقبت های بهداشتی(در درجه اول در زمینه درمان سرطان) برنامه ریزی شده است 10 میلیارد دلار- دو برابر پیش بینی شده در سال مالی جاری.

و وضعیت روسیه را می توان با متحد کردن تلاش های مشترک بسیاری از اقشار اجتماعی و البته با بودجه کافی برای چنین وظایف پیچیده و مهمی بهبود بخشید.