ცხოველური და მცენარეული წარმოშობის პროდუქტებში მიკოტოქსინების განსაზღვრის მეთოდი. მიკოტოქსინების განსაზღვრის მეთოდები

მიკოტოქსინები და მათი განსაზღვრის მეთოდები

მიკოტოქსინები (ბერძნული mykes-დან - სოკო და ტოქსიკონი - შხამი) არის მიკროსკოპული ობის მეორადი მეტაბოლიტები გამოხატული ტოქსიკური თვისებებით. მიკოტოქსინების მაღალი საშიშროება გამოიხატება იმით, რომ მათ აქვთ ტოქსიკური ეფექტი უკიდურესად მცირე რაოდენობით და შეუძლიათ ძალიან ინტენსიურად დიფუზირება პროდუქტის სიღრმეში.

აფლატოქსინები მიკოტოქსინების ყველაზე საშიში ჯგუფის წარმომადგენლები არიან, რომლებსაც აქვთ ძლიერი ჰეპატოტოქსიური და კანცეროგენული თვისებები. აფლატოქსინის მწარმოებლები არიან ასპერგილუსის მხოლოდ ორი სახეობის (Aspergillus flavus და Aspergillus parasiticus) სხვადასხვა შტამები, რომლებიც გავრცელებულია მთელ მსოფლიოში. აღსანიშნავია, რომ ტოქსიგენურ სოკოებს შეუძლიათ მცენარის სუბსტრატების დაინფიცირება არა მხოლოდ შენახვისას, არამედ მათი ზრდის, მოსავლის აღების, ტრანსპორტირებისა და გადამუშავების დროს.

აფლატოქსინების ოჯახი მოიცავს ოთხ მთავარ წარმომადგენელს (აფლატოქსინები B1, B2, G1, G2), ასევე 10-ზე მეტ ნაერთს, რომლებიც წარმოადგენენ ძირითადი ჯგუფის წარმოებულებს ან მეტაბოლიტებს (M1, M2, B2a, G2a, GM1, P 1, Q 1). და ა.შ.).

ბუნებრივ პირობებში აფლატოქსინები უფრო ხშირად და ყველაზე დიდი რაოდენობით გვხვდება არაქისის, სიმინდისა და ბამბის თესლებში. გარდა ამისა, მათ შეუძლიათ მნიშვნელოვანი რაოდენობით დაგროვება სხვადასხვა თხილში, ზეთოვან თესლებში, ხორბალში, ქერში, კაკაოსა და ყავის მარცვლებში, აგრეთვე ფერმის ცხოველების საკვებში.

უნდა აღინიშნოს, რომ აფლატოქსინები შეიძლება გამოჩნდეს ცხოველური წარმოშობის პროდუქტებში: რძეში, ცხოველთა ქსოვილებსა და ორგანოებში, რომლებმაც მიიღეს მაღალი კონცენტრაციით აფლატოქსინებით დაბინძურებული საკვები.

დადასტურებულია, რომ ძროხები რძესთან ერთად გამოიყოფა 0,35-დან 2-3%-მდე აფლატოქსინი B 1, რომელიც მიიღება საკვებთან ერთად უაღრესად ტოქსიკური მეტაბოლიტის - აფლატოქსინის M 1-ის სახით. ამავდროულად, რძის პასტერიზაცია და გაშრობის პროცესი არ ხდება. მნიშვნელოვან გავლენას ახდენს მასში აფლატოქსინ M 1-ის შემცველობაზე. აფლატოქსინი M 1 აღმოჩნდა როგორც მთლიან, ისე ფხვნილ რძეში და რძის გადამუშავებულ პროდუქტებშიც კი (პასტერიზაცია, სტერილიზაცია, ხაჭოს მომზადება, იოგურტი, ყველი და ა.შ.). ამრიგად, დაბინძურებული რძისგან ყველის წარმოების პროცესში ხაჭოს მასაში 50% აფლატოქსინი M1 განისაზღვრება. როდესაც კარაქი მიიღება, აფლატოქსინი M1-ის 10% გადადის კრემში, 75% რჩება უცხიმო რძეში.

აფლატოქსინები ოდნავ ხსნადია წყალში, უხსნადი არაპოლარულ გამხსნელებში, მაგრამ ადვილად ხსნადი ზომიერი პოლარობის გამხსნელებში, როგორიცაა ქლოროფორმი, მეთანოლი და დიმეთილ სულფოქსიდი. ისინი საკმაოდ არასტაბილურია მათი ქიმიურად სუფთა სახით და მგრძნობიარენი არიან ჰაერისა და სინათლის მიმართ.

აფლატოქსინები პრაქტიკულად არ ნადგურდება დაბინძურებული საკვები პროდუქტების ნორმალური კულინარიული დამუშავების დროს.

ტრიქოთეცენური მიკოტოქსინები არის Fusarium გვარის მიკროსკოპული სოკოების მეორადი მეტაბოლიტები, რომლებიც გავლენას ახდენენ საკვებსა და საკვებ პროდუქტებზე, რის შედეგადაც ხდება კვების ტოქსიკოზი ცხოველებსა და ადამიანებში. ისინი ყველაზე ხშირად გვხვდება სიმინდის, ხორბლისა და ქერის მარცვლებში. ამ ჯგუფის მიკოტოქსინები ფართოდ არის გავრცელებული, განსაკუთრებით ზომიერი კონტინენტური კლიმატის მქონე ქვეყნებში. არ არის იშვიათი, რომ ორი ან მეტი მიკოტოქსინი გვხვდება ერთსა და იმავე პროდუქტში. სავალდებულო სერტიფიკაციის განხორციელებისას კონტროლი გათვალისწინებულია ამ ჯგუფის ორი წარმომადგენლის, კერძოდ, დეოქსინივალენოლისა და T-2 ტოქსინის შემცველობაზე.

დეოქსინივალენოლი(DON) - ერთ-ერთი გავრცელებული ფუსარიოტოქსინი - თრგუნავს ცილის სინთეზს, ამცირებს იგუნოგაობულინების კონცენტრაციას სისხლის შრატში და შეუძლია დათრგუნოს რეპროდუქციული სისტემა. განსაკუთრებით საშიშია ფერმის ცხოველების საკვების დაბინძურება. ამრიგად, DON იწვევს ღებინებას ცხოველებში და ამცირებს საკვების მოხმარებას გოჭებში. T-2 ტოქსინინაკლებად გავრცელებული, მაგრამ უფრო ტოქსიკური ვიდრე DON. T-2 ტოქსინი იწვევს საჭმლის მომნელებელ ტრაქტში გაღიზიანებას, სისხლდენას და ნეკროზს. ტრიქოთეცენებით მწვავე ინტოქსიკაციას თან ახლავს სისხლმბადი და იმუნოკომპეტენტური ორგანოების დაზიანება. დამახასიათებელია ჰემორაგიული სინდრომის განვითარება, კვებაზე უარის თქმა და ღებინება.

ზეარალენონს და მის წარმოებულებს ასევე აწარმოებენ Fusarium გვარის მიკროსკოპული სოკოები. მთავარი ბუნებრივი სუბსტრატი, რომელშიც ყველაზე ხშირად გვხვდება ზეარალენონი, არის სიმინდი. Fusariurn gra-minearum გვარის სოკოები ხშირად აზიანებენ მინდორში მდგარ სიმინდს და იწვევენ კოჭებისა და ყუნწების ლპობას. სიმინდის დაბინძურება ზეარალენონით ასევე შეიძლება მოხდეს შენახვის დროს. მაღალია ზეარალენონის გამოვლენის სიხშირე ცხოველთა საკვებში, ასევე ხორბალში, ქერსა და შვრიაში. საკვებს შორის ეს ტოქსინი აღმოჩენილია სიმინდის ფქვილში, მარცვლეულსა და სიმინდის ლუდში.

ზეარალენონს აქვს გამოხატული ესტროგენული და ტერატოგენული ეფექტები და სერიოზულ პრობლემას უქმნის მეცხოველეობის წარმოებას ბევრ ქვეყანაში, და ამ მიკოტოქსინის უნარი დაგროვდეს ფერმის ცხოველების ქსოვილებში, მას პოტენციურად საშიშს ხდის ადამიანის ჯანმრთელობისთვის. საკვების ზეარალენონით დაბინძურება იწვევს ნაყოფიერების დაქვეითებას, აბორტს, უნაყოფობას და ანთებით დაავადებებს ღორებში, ძროხებში, ფრინველებსა და კურდღლებში. ამის მიუხედავად, ზეარალენონის ზოგიერთი წარმოებული ბოლო დრომდე გამოიყენებოდა ცხოველთა ზრდის სტიმულატორად და ფართოდ იწარმოებოდა მრეწველობის მიერ.

პატულინი არის განსაკუთრებით საშიში მიკოტოქსინი კანცეროგენული და მუტაგენური თვისებებით. პატულინის ძირითადი მწარმოებლები არიან მიკროსკოპული სოკოები Penicillium patulum და Penicillium expansum. პატულინის მწარმოებლები ძირითადად გავლენას ახდენენ ხილსა და ზოგიერთ ბოსტნეულზე, რაც იწვევს მათ ლპობას. პატულინი გვხვდება ვაშლში, მსხალში, გარგარში, ატამში, ალუბალში, ყურძენში, ბანანში, მარწყვში, მოცვში, ლინგონბერში, ზღვის წიწაკას, კომშისა და პომიდორში. ვაშლს ყველაზე ხშირად აზიანებს პატულინი, სადაც ტოქსინების შემცველობამ შეიძლება მიაღწიოს 17,5 მგ/კგ-მდე. აღსანიშნავია, რომ პატულინი გვხვდება არა მხოლოდ ხილისა და ბოსტნეულის დამპალ ნაწილში, არამედ ნორმალურ ნაწილშიც. მაგალითად, პომიდორში პატულინი თანაბრად ნაწილდება მთელ ქსოვილში.

პატულინი ასევე მაღალი კონცენტრაციით გვხვდება დამუშავებულ ხილსა და ბოსტნეულში: წვენებში, კომპოტებში, მოპეებსა და მურაბებში. განსაკუთრებით ხშირად გვხვდება ვაშლის წვენში (0,02-0,4 მგ/ლ). პატულინის შემცველობა სხვა სახის წვენებში: მსხალი, კომში, ყურძენი, ქლიავი, მანგო მერყეობს 0,005-დან 4,5 მგ/ლ-მდე.

საკვები ნედლეულისა და საკვები პროდუქტების სერტიფიცირებისას სავალდებულოა მიკოტოქსინების შემცველობის კონტროლი. რუსეთში მიღებულია სანიტარული და ჰიგიენური სტანდარტები საკვებ პროდუქტებში მიკოტოქსინების შემცველობის შესახებ, რომელიც მოცემულია ცხრილში. 12.

მიკოტოქსიკოზის პრევენციის ღონისძიებების სისტემა მოიცავს საკვები პროდუქტების სანიტარიულ და მიკოლოგიურ ანალიზს (სურ. 13).

ცხრილი 12. მიკოტოქსინების დასაშვები დონეები გარკვეულ საკვებ ჯგუფში

გარდა ამისა, დიდი ყურადღება ეთმობა მიკოტოქსინებით დაბინძურებული ნედლეულისა და საკვები პროდუქტების დეკონტამინაციისა და დეტოქსიკაციის გზების ძიებას. ამ მიზნით გამოიყენება მექანიკური, ფიზიკური და ქიმიური მეთოდები:

1) მექანიკური- დაბინძურებული მასალის გამოყოფა ხელით ან ელექტრონული კალორიმეტრიული დამხარისხებლების გამოყენებით;

2) ფიზიკურითერმული დამუშავება, დასხივება ულტრაიისფერი გამოსხივებით;

3) ქიმიური- დამუშავება ჟანგვის აგენტების, ძლიერი მჟავების და ფუძეების ხსნარებით.

თუმცა, მექანიკური და ფიზიკური დასუფთავების მეთოდების გამოყენება არ იძლევა მაღალ ეფექტს, იწვევს არა მხოლოდ მიკოტოქსინების, არამედ სასარგებლო საკვები ნივთიერებების განადგურებას, ასევე მათი შეწოვის დარღვევას.

ბრინჯი. 12. საკვები პროდუქტების სანიტარული და მიკრობიოლოგიური ანალიზი

14.8.1 მიკოტოქსინების განსაზღვრის მეთოდები

საკვებსა და საკვებში მიკოტოქსინების შემცველობის გამოვლენისა და განსაზღვრის თანამედროვე მეთოდები მოიცავს სკრინინგ მეთოდებს, რაოდენობრივ ანალიტიკურ და ბიოლოგიურ მეთოდებს.

სკრეპინგის მეთოდები სწრაფი და მოსახერხებელია სერიული ანალიზებისთვის, რაც საშუალებას გაძლევთ სწრაფად და საიმედოდ გამოყოთ დაბინძურებული და დაუბინძურებელი ნიმუშები. სკრინინგის მეთოდებს მიეკუთვნება თხელი ფენის ქრომატოგრაფიის მეთოდები (TLC მეთოდები), ფლუორესცენტური მეთოდი აფლატოქსინებით დაბინძურებული მარცვლის დასადგენად.

მიკოტოქსინების განსაზღვრის რაოდენობრივი ანალიტიკური მეთოდები წარმოდგენილია ქიმიური, რადიოიმუნოლოგიური და იმუნოფერმენტული მეთოდებით. ამჟამად ყველაზე გავრცელებულია ქიმიური მეთოდები, რომლებიც მოიცავს ორ ეტაპს: იზოლაციის სტადიას და მიკოტოქსინების რაოდენობრივი განსაზღვრის სტადიას. იზოლაციის ეტაპი მოიცავს ექსტრაქციას (მიკოტოქსინის გამოყოფა სუბსტრატიდან) და გაწმენდას (მიკოტოქსინის გამოყოფა მსგავსი ფიზიკოქიმიური მახასიათებლების მქონე ნაერთებისგან). მიკოტოქსინების საბოლოო გამოყოფა და რაოდენობრივი განსაზღვრა ხორციელდება სხვადასხვა ქრომატოგრაფიული მეთოდების გამოყენებით. ყველა სახის მიკოტოქსინის განსაზღვრის უნივერსალური მეთოდია თხელი ფენის ქრომატოგრაფია (TLC).

ბევრი პროდუქტის სინჯის აღებისას მთავარი მიზანია მივიღოთ საშუალო ნიმუში ან საშუალო ნიმუში, რომელიც წარმოადგენს მიკოტოქსინის კონცენტრაციას მთელი პარტიისთვის (აღებული ნიმუშები უნდა იყოს მთლიანი ლოტის ხარისხის რეპრეზენტაციული). ამ ამოცანის შესრულება დამოკიდებულია მიკოტოქსინების ბუნებასა და განაწილებაზე, პროდუქტის მახასიათებლებზე (ნედლი, დამუშავებული, ნაყარი, თხევადი, პასტა და ა.შ.) და ნიმუშის მომზადების მეთოდზე. მაგალითად, არაქისის დაბინძურებას აფლატოქსინებით გამოხატული ჰეტეროგენული ხასიათი აქვს:

ცალკეულ არაქისის მარცვლებში მათი შემცველობა შეიძლება განსხვავდებოდეს მილიგრამის მეათასედიდან ათეულ ან მეტ მილიგრამამდე 1 კგ-ზე, ანუ განსხვავდებოდეს სიდიდის 5-6 რიგით. ამ მიზეზით, შერჩევის შეცდომის წვლილი მთლიან ანალიტიკურ შეცდომაში აფლატოქსინების განსაზღვრაში მთავარია და ზოგიერთ შემთხვევაში შეიძლება იყოს 90%-ზე მეტი.

მიკოტოქსინით დაბინძურების ერთგვაროვნების თვალსაზრისით, პროდუქტების წონა შეიძლება დაიყოს ორ ჯგუფად: 1) ჰეტეროგენურობის მაღალი ხარისხის მქონე პროდუქტები (გაჭუჭყიანებული და უჭუჭყიანი არაქისი, ზეთის თესლი, მთლიანი ან დაფქული მარცვლეული, თხილი); 2) დაბინძურების ერთგვაროვანი ბუნების პროდუქტები (სითხეები: რძე, მცენარეული ზეთები, წვენები, ნაპირი; ფქვილი, დაფქული ფქვილი).

1 ჯგუფის პროდუქტების წარმომადგენლობითი საშუალო ნიმუშის მისაღებად, საწყისი ნიმუშის ზომა უნდა იყოს რაც შეიძლება დიდი (მინიმუმ 2 კგ), ხოლო საშუალო ლაბორატორიული ნიმუში უნდა იყოს იზოლირებული მიწის (ჰომოგენიზებული) საშუალო ნიმუშისგან.

მე-2 ჯგუფის ერთგვაროვანი პროდუქტებისთვის (ჯემა, მარმელადი, ხილის წვენები თუნუქის პატარა კონტეინერებში, შესქელებული რძე, მშრალი რძის პროდუქტები და ა. -200 გ), იმ პირობით, რომ პროდუქტი იმავე პარტიიდან მოდის.

ცალკეული აფლატოქსინების გამოვლენისა და იდენტიფიკაციის ქიმიური მეთოდები ეფუძნება მათ სპეციფიკურ ფლუორესცენციას UV შუქზე (დაახლოებით 365 ნმ), თხელი ფენის ქრომატოგრაფიაში მობილურობის განსხვავებებს და მათი შთანთქმის და ფლუორესცენციის სპექტრის სპეციფიკას.

აფლატოქსინებისგან განსხვავებით, ტრიქოთეცენები არ ავლენენ შთანთქმას ან ფლუორესცენციას სპექტრის ხილულ ნაწილში, რაც ართულებს მათ გამოვლენას თხელი ფენის ქრომატოგრაფიით. თუმცა, შესაძლებელია ტრიქოთეცენების იდენტიფიცირება TLC-ის გამოყენებით TLC ფირფიტების სპეციალური რეაგენტებით დამუშავებაზე დაფუძნებული მეთოდების გამოყენებით, რომლებიც ქმნიან ფერად ან ფლუორესცენტურ წარმოებულებს ტრიქოთეცენებთან. მაგალითად, T-2 ტოქსინი, კონცენტრირებული გოგირდის მჟავით ფირფიტების დამუშავებისას, ულტრაიისფერი სინათლეზე წარმოქმნის ლაქებს ლურჯი ფლუორესცენციით.

მიკოტოქსინების რაოდენობრივი განსაზღვრის საარბიტრაჟო მეთოდები შემდეგია:

გაზ-თხევადი ქრომატოგრაფია (T-2 ტოქსინისთვის);

მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფია (HPLC) UV ფოტომეტრული დეტექტორის გამოყენებით (დეოქსინივალენოლისთვის და პატულინისთვის);

HPLC ფლუორესცენციის დეტექტორის გამოყენებით (აფლატოქსისა და ზეარალენონისთვის).

მიკოტოქსინების ანალიზისთვის უფრო ხშირად გამოიყენება გრადიენტური HPLC სისტემები, სადაც მობილურ ფაზად გამოიყენება აცეტონიტრილის ხსნარები წყალში კონცენტრაციით, რომელიც დროთა განმავლობაში წრფივად იცვლება.

ქრომატოგრაფიული სვეტი არის ლითონის მილი, რომლის სიგრძეა 150-დან 250 მმ-მდე, შიდა დიამეტრით 4,6 მმ, ივსება სპეციალური სორბენტით, რომელიც დაფუძნებულია სილიკა გელზე ნამყენი ნახშირწყალბადის რადიკალებით. წინა სვეტი ემსახურება ქრომატოგრაფიული სვეტის დაბინძურებისგან დაცვას.

ულტრაიისფერი ფოტომეტრული დეტექტორი HPLC-სთვის დეტექტორის ყველაზე გავრცელებული ტიპია. დეტექტორის მუშაობის პრინციპი მსგავსია ჩვეულებრივი სპექტრული ფოტომეტრის: ის აღრიცხავს ხსნარის ოპტიკურ სიმკვრივეს. განსხვავება ისაა, რომ UV დეტექტორი არის ნაკადის დეტექტორი და იყენებს ფოტომეტრულ უჯრედს ხსნარის შემცველი კუვეტის ნაცვლად. ელუენტის ნაკადი მიედინება სამუშაო უჯრედში, ხოლო სუფთა მობილური ფაზის ნაკადი მიმართულია საცნობარო უჯრედში. სინათლის წყარო არის ვერცხლისწყლის ნათურა, რომელიც აწარმოებს ინტენსიურ ულტრაიისფერ გამოსხივებას. საჭირო ტალღის სიგრძის სინათლე იზოლირებულია შესაფერისი ოპტიკური ფილტრების გამოყენებით, გადის უჯრედებში, ნაწილობრივ შეიწოვება მოძრავი ფაზის მოლეკულებით და გამოყოფილი კომპონენტებით და იჭერს ფოტოდეტექტორს. ელუატის სინათლის შთანთქმა (ოპტიკური სიმკვრივე) განუწყვეტლივ იწერება ჩამწერი ან კომპიუტერი, ჩაწერს ქრომატოგრამას. ნარევის გამოყოფილი კომპონენტები (მაგალითად, მიკოტოქსინები) წარმოდგენილია ქრომატოგრამაში პიკების სახით. ქრომატოგრამაში პიკის პოზიცია გამოიყენება ნივთიერების იდენტიფიცირებისთვის, ხოლო პიკის ფართობი გამოიყენება რაოდენობრივად.

უფრო რთული მოწყობილობა არის ფლუორესცენტური (ფლუომეტრიული) დეტექტორი. ეს დეტექტორი იყენებს ორგანული ნაერთების, განსაკუთრებით აფლატოქსინების და ზეარალენონის უნარს, ფლუორესციონ ულტრაიისფერი ან ხილული შუქის ზემოქმედებისას. ფლუორესცენციის დეტექტორს აქვს ნაკადის უჯრედი ორი ერთმანეთის პერპენდიკულარული ოპტიკური არხით. ერთი მათგანი ემსახურება ამაღელვებელი გამოსხივების მიწოდებას, მეორე საშუალებას აძლევს გაზომოს ფლუორესცენციის ინტენსივობა. აფლატოქსინების B 1 და M 1 ანალიზის შემთხვევაში, ამაღელვებელი გამოსხივების ტალღის სიგრძეა 360 ნმ, ხოლო გამოსხივებული გამოსხივების ტალღის სიგრძე 420 ნმ.

უნდა აღინიშნოს, რომ ულტრაიისფერი დეტექტორის გამოყენება ასევე შესაძლებელია აფლატოქსინების გასაანალიზებლად, მაგრამ მისი მგრძნობელობა ზომით დაბალია, ვიდრე ფლუომეტრიული დეტექტორის, ამიტომ, აფლატოქსინების დაბალი კონცენტრაციის გაანალიზებისას (MPC დონეზე და ქვემოთ), ფლუორესცენტურია. გამოვლენა სასურველია.

მიკოტოქსინების განსაზღვრის მეთოდები.საკვებსა და საკვებში მიკოტოქსინების შემცველობის გამოვლენისა და განსაზღვრის თანამედროვე მეთოდები მოიცავს სკრინინგ მეთოდებს, რაოდენობრივ ანალიტიკურ და ბიოლოგიურ მეთოდებს.

სკრინინგის მეთოდები სწრაფი და მოსახერხებელია სერიული ანალიზისთვის, რაც საშუალებას გაძლევთ სწრაფად და საიმედოდ გამოყოთ დაბინძურებული და დაუბინძურებელი ნიმუშები. ეს მოიცავს ისეთ ფართოდ გამოყენებულ მეთოდებს, როგორიცაა აფლატოქსინების, ოქროტოქსინი A და ზეარალენონის განსაზღვრის მინიკოლონის მეთოდი; თხელი ფენის ქრომატოგრაფიის მეთოდები (TLC მეთოდები) 30-მდე სხვადასხვა მიკოტოქსინის ერთდროული განსაზღვრისთვის, ფლუორესცენტური მეთოდი აფლატოქსინებით დაბინძურებული მარცვლის დასადგენად და ზოგიერთი სხვა.

მიკოტოქსინების განსაზღვრის რაოდენობრივი ანალიტიკური მეთოდები წარმოდგენილია ქიმიური, რადიოიმუნოლოგიური და ფერმენტული იმუნოანალიზის მეთოდებით. ქიმიური მეთოდები ამჟამად ყველაზე გავრცელებულია და შედგება ორი ეტაპისგან: იზოლაციის ეტაპი და მიკოტოქსინების რაოდენობრივი სტადია. იზოლაციის ეტაპი მოიცავს ექსტრაქციას (მიკოტოქსინის გამოყოფა სუბსტრატიდან) და გაწმენდას (მიკოტოქსინის გამოყოფა მსგავსი ფიზიკოქიმიური მახასიათებლების მქონე ნაერთებისგან). მიკოტოქსინების საბოლოო გამოყოფა ხორციელდება სხვადასხვა ქრომატოგრაფიული ტექნიკის გამოყენებით, როგორიცაა აირის (GC) და გაზ-თხევადი ქრომატოგრაფია (GLC), თხელი ფენის ქრომატოგრაფია (TLC), მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფია (HPLC) და მასის სპექტრომეტრია. მიკოტოქსინის შემცველობის რაოდენობრივი შეფასება ხორციელდება სპექტრის ულტრაიისფერ რეგიონში TLC-ის ფლუორესცენციის ინტენსივობის სტანდარტებთან შედარებით. მიღებული შედეგების სანდოობის დასადასტურებლად გამოიყენება სხვადასხვა ტესტები, რომლებიც ეფუძნება მიკოტოქსინის წარმოებულების მომზადებას სხვა ქრომატოგრაფიული, კოლორიმეტრიული ან ფლუორომეტრიული მახასიათებლებით.

მიკოტოქსინების გამოვლენის, იდენტიფიკაციისა და რაოდენობრივი განსაზღვრის მაღალმგრძნობიარე და მაღალ სპეციფიკური რადიოიმუნოქიმიური და იმუნოფერმენტული მეთოდები სულ უფრო ხშირად გამოიყენება და მკვლევართა ყურადღებას აქცევს. ეს მეთოდები დაფუძნებულია მიკოტოქსინების კონიუგატებზე ანტისერების წარმოებაზე მსხვილფეხა რქოსანი შრატის ალბუმინით. ამ მეთოდების მთავარი უპირატესობა მათი განსაკუთრებული მგრძნობელობაა.

ბიოლოგიურ მეთოდებს, როგორც წესი, არ აქვთ მაღალი სპეციფიკა და მგრძნობელობა და ძირითადად გამოიყენება მათში

შემთხვევები, როდესაც არ არსებობს მიკოტოქსინების გამოვლენის ქიმიური მეთოდები ან მათ დამატებით, როგორც დამადასტურებელ ტესტებს. საცდელ ობიექტად გამოიყენება სხვადასხვა მიკროორგანიზმები, ქათმის ემბრიონი, სხვადასხვა ლაბორატორიული ცხოველები, უჯრედული და ქსოვილის კულტურები.

მიკოტოქსინით დაბინძურების კონტროლი.ამჟამად, საკვები ნედლეულის, საკვები პროდუქტებისა და საკვების მიკოტოქსინებით დაბინძურების კონტროლის საკითხები წყდება არა მხოლოდ ცალკეულ სახელმწიფოებში, არამედ საერთაშორისო დონეზე, ჯანმო-ს და FAO-ს ეგიდით.

სურსათის ნედლეულისა და საკვები პროდუქტების დაბინძურების კონტროლის ორგანიზების სისტემაში შეიძლება გამოიყოს ორი დონე: ინსპექტირება და მონიტორინგი, რომელიც მოიცავს საკვები ნედლეულისა და საკვები პროდუქტების რეგულარულ რაოდენობრივ ანალიზს.

მონიტორინგი საშუალებას გაძლევთ დაადგინოთ დაბინძურების დონე, შეაფასოთ რეალური დატვირთვისა და საფრთხის ხარისხი, იდენტიფიციროთ საკვები პროდუქტები, რომლებიც ყველაზე ხელსაყრელი სუბსტრატია მიკროსკოპული სოკოების - მიკოტოქსინების მწარმოებლებისთვის, და ასევე დაადასტუროთ მიკოტოქსინების დაბინძურების შესამცირებლად მიღებული ზომების ეფექტურობა. მიკოტოქსინით დაბინძურების მონიტორინგს განსაკუთრებული მნიშვნელობა აქვს სხვა ქვეყნებიდან შემოტანილი ნედლეულისა და პროდუქციის ხარისხის დახასიათებისას.

კვებითი ტოქსიკოზის თავიდან ასაცილებლად მთავარი ყურადღება უნდა მიექცეს მარცვლოვან კულტურებს. ამასთან დაკავშირებით აუცილებელია შემდეგი ღონისძიებების დაცვა მარცვლეული კულტურების და მარცვლეული პროდუქტების დაბინძურების თავიდან ასაცილებლად.

1. მინდვრებიდან მოსავლის დროული აღება, მისი სათანადო აგროტექნიკური დამუშავება და შენახვა.

2. შენობებისა და შესანახი კონტეინერების სანიტარიული და ჰიგიენური დამუშავება.

3. მხოლოდ ხარისხიანი ნედლეულის შენახვა.

4. ნედლეულისა და მზა პროდუქციის დაბინძურების ხარისხის განსაზღვრა.

5. ტექნოლოგიური დამუშავების მეთოდის არჩევა ნედლეულის დაბინძურების ტიპისა და ხარისხის მიხედვით.

საკვები ნედლეულისა და საკვები პროდუქტების მიკრომიცეტების ტოქსიკური შტამებით დაბინძურების ძირითადი გზები ნაჩვენებია ნახ. 11.7.

536:: 537:: სარჩევი

537:: 538:: 539:: 540:: 541:: 542:: 543:: 544:: 545:: 546:: 547:: 548:: 549:: 550:: შინაარსი

სტანდარტიზაციის, მეტროლოგიისა და სერტიფიკაციის სახელმწიფოთაშორისი საბჭო

სტანდარტიზაციის, მეტროლოგიისა და სერტიფიკაციის სახელმწიფოთაშორისი საბჭო

სახელმწიფოთაშორისი

სტანდარტი

წვენის პროდუქტები

ოფიციალური გამოცემა

ფორმის სტანდარტები

Წინასიტყვაობა

სახელმწიფოთაშორისი სტანდარტიზაციის სამუშაოების განხორციელების მიზნები, ძირითადი პრინციპები და ძირითადი პროცედურა დადგენილია GOST 1.0-92 „სახელმწიფოთაშორისი სტანდარტიზაციის სისტემით. ძირითადი დებულებები“ და GOST 1.2-2009 „სახელმწიფოთაშორისი სტანდარტიზაციის სისტემა. სახელმწიფოთაშორისი სტანდარტები. წესები და რეკომენდაციები სახელმწიფოთაშორისი სტანდარტიზაციისთვის. შემუშავების, მიღების, გამოყენების, განახლებისა და გაუქმების წესები"

სტანდარტული ინფორმაცია

1 შემუშავებული უმაღლესი პროფესიული განათლების ფედერალური სახელმწიფო საგანმანათლებლო დაწესებულების "მოსკოვის სურსათის წარმოების სახელმწიფო უნივერსიტეტის" მიერ (FSBEI HPE "MSUPP")

2 შემოღებული ტექნიკური რეგულირებისა და მეტროლოგიის ფედერალური სააგენტოს მიერ

3 მიღებულია სტანდარტიზაციის, მეტროლოგიისა და სერტიფიცირების სახელმწიფოთაშორისი საბჭოს მიერ (2014 წლის 25 ივნისის ოქმი No. 45-2014)

4 ტექნიკური რეგულირებისა და მეტროლოგიის ფედერალური სააგენტოს 2014 წლის 19 აგვისტოს No896-st GOST 32835-2014 ბრძანებით ამოქმედდა, როგორც რუსეთის ფედერაციის ეროვნული სტანდარტი 2016 წლის 1 იანვრიდან.

5 ეს სტანდარტი შემუშავებულია შემდეგი საერთაშორისო დოკუმენტების დებულებების გათვალისწინებით:

CODEX STAN 247-2005 Codex ზოგადი სტანდარტი ხილის წვენებისა და ნექტარებისთვის Codex Alimentarius კომისიის:

ევროკავშირის კომისიის დებულება 02/23/2006 წ. არა. 406/2006/EC სასურსათო პროდუქტებში მიკოტოქსინების დონის ოფიციალური კონტროლისთვის სინჯის აღების მეთოდებისა და ანალიზის მეთოდების დადგენის შესახებ (ევროკავშირის კომისიის რეგულაცია 23.02.2006 No. 406/2006/EC „ნიმუშების აღების მეთოდებისა და ანალიზის მეთოდების შესახებ კვების პროდუქტებში მიკოტოქსინების დონის ოფიციალური კონტროლი");

AIJN ხილისა და ბოსტნეულის წვენების ხარისხისა და ავთენტურობის შეფასების პრაქტიკის კოდექსი ევროპის ხილის წვენების ასოციაციის.

6 პირველად შემოვიდა

ინფორმაცია ამ სტანდარტის ცვლილებების შესახებ გამოქვეყნებულია ყოველწლიურ საინფორმაციო ინდექსში „ეროვნული სტანდარტები#. ხოლო ცვლილებებისა და დამატებების ტექსტი მოცემულია ყოველთვიურ საინფორმაციო ინდექსში „ეროვნული სტანდარტები“. ამ სტანდარტის გადასინჯვის (ჩანაცვლების) ან გაუქმების შემთხვევაში შესაბამისი შეტყობინება გამოქვეყნდება ყოველთვიურ საინფორმაციო ინდექსში „ეროვნული სტანდარტები“. შესაბამისი ინფორმაცია, შეტყობინებები და ტექსტები ასევე განთავსებულია საჯარო ინფორმაციის სისტემაში - ტექნიკური რეგულირებისა და მეტროლოგიის ფედერალური სააგენტოს ოფიციალურ ვებგვერდზე ინტერნეტში.

© Standardinform, 2015 წ

რუსეთის ფედერაციაში ამ სტანდარტის სრული ან ნაწილობრივი რეპროდუცირება, ტირაჟირება და გავრცელება, როგორც ოფიციალური პუბლიკაცია, არ შეიძლება ტექნიკური რეგულირებისა და მეტროლოგიის ფედერალური სააგენტოს ნებართვის გარეშე.

სახელმწიფოთაშორისი სტანდარტი

წვენის პროდუქტები

მიკოტოქსინების განსაზღვრა ტანდემური მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფია-მასპექტრომეტრიით (HPLC-MS/MS)

წვენების პროდუქტები. მიკოტოქსინების განსაზღვრა ტანდემი მაღალი ხარისხის თხევადი მასის სპექტრომეტრიით (HPLC-MS/MS)

შესავლის თარიღი - 2016-01-01

1 გამოყენების სფერო

ეს სტანდარტი ვრცელდება ხილისა და ბოსტნეულისგან დამზადებულ წვენებსა და სხვა წვენ პროდუქტებზე. ციტრუსის ხილის უჯრედების გარდა და ადგენს მეთოდს მიკოტოქსინების - პატუ ლ და ნა და ოხრატოქსინი A - ტანდემური მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფიის-მასპექტრომეტრიის გამოყენებით პატულინის მასის კონცენტრაციის საზომი დიაპაზონში 0,1-დან 100,0 მკგ-მდე. /დმ 3 და ოხრატოქსინი A 0,1-დან 20,0 მკგ/დმ3-მდე.

ეს სტანდარტი იყენებს ნორმატიულ მითითებებს შემდეგ სახელმწიფოთაშორის სტანდარტებზე:

GOST 12.1.004-91 შრომის უსაფრთხოების სტანდარტების სისტემა. Სახანძრო უსაფრთხოება. Ძირითადი მოთხოვნები

GOST 12.1.007-76 შრომის უსაფრთხოების სტანდარტების სისტემა. კლასიფიკაცია და უსაფრთხოების ზოგადი მოთხოვნები

GOST 12.1.010-76 შრომის უსაფრთხოების სტანდარტების სისტემა, აფეთქებაგამძლე. Ძირითადი მოთხოვნები

GOST 12.1.019-79 შრომის უსაფრთხოების სტანდარტების სისტემა. ელექტრო უსაფრთხოება. ზოგადი მოთხოვნები და დაცვის სახეების ნომენკლატურა

GOST 61-75 რეაგენტები. ძმარმჟავა. სპეციფიკაციები

GOST OIML R 76-1-2011 სახელმწიფო სისტემა გაზომვების ერთგვაროვნების უზრუნველსაყოფად. არაავტომატური სასწორები. ნაწილი 1. მეტროლოგიური და ტექნიკური მოთხოვნები. ტესტები

GOST 1770-74 (ISO 1042-83. ISO 4788-80) ლაბორატორიული მინის ჭურჭელი. ცილინდრები. ჭიქები, კოლბები, საცდელი მილები. ზოგადი ტექნიკური პირობები

GOST ISO 3696-2013 წყალი ლაბორატორიული ანალიზისთვის. ტექნიკური მოთხოვნები და კონტროლის მეთოდები

GOST ISO 5725-1-2003 გაზომვის მეთოდებისა და შედეგების სიზუსტე (სისწორე და სიზუსტე). ნაწილი 1. ძირითადი დებულებები და განმარტებები

GOST ISO 5725-2-2003 გაზომვის მეთოდებისა და შედეგების სიზუსტე (სისწორე და სიზუსტე). ნაწილი 2: სტანდარტული გაზომვის მეთოდის განმეორებადობისა და განმეორებადობის განსაზღვრის ძირითადი მეთოდი

GOST 5789-78 რეაგენტები. ტოლუენი. სპეციფიკაციები

GOST 16317-87 საყოფაცხოვრებო ელექტრო სამაცივრო მოწყობილობები. ზოგადი ტექნიკური პირობები

GOST 20015-88 ქლოროფორმი. სპეციფიკაციები

GOST 25336-82 ლაბორატორიული მინის ჭურჭელი და აღჭურვილობა. ტიპები. ძირითადი პარამეტრები და ზომები

GOST 26313-84 ხილისა და ბოსტნეულის გადამუშავების პროდუქტები. მიღების წესები, შერჩევის მეთოდები

GOST 26671-85 ხილისა და ბოსტნეულის გადამუშავებული პროდუქტები, დაკონსერვებული ხორცი და ხორცი და ბოსტნეულის პროდუქტები. ნიმუშების მომზადება ლაბორატორიული ანალიზისთვის

ოფიციალური გამოცემა

GOST 29030-91 ხილისა და ბოსტნეულის გადამუშავების პროდუქტები. ხსნადი მყარი ნივთიერებების ფარდობითი სიმკვრივისა და შემცველობის განსაზღვრის პიკნომეტრიული მეთოდი

GOST 29227-91 (ISO 835/1-81) ლაბორატორიული მინის ჭურჭელი. დიპლომირებული პიპეტები. ნაწილი 1. ზოგადი მოთხოვნები

GOST ISO/IEC 17025-2009 ზოგადი მოთხოვნები ტესტირებისა და კალიბრაციის ლაბორატორიების კომპეტენციისთვის

GOST 32689.1-2014 მცენარეული წარმოშობის საკვები პროდუქტები. პესტიციდების ნარჩენების ჰა-ეოქრომატოგრაფიული განსაზღვრის მულტიმეთოდები ნაწილი 1. ზოგადი დებულებები

GOST 32689.2-2014 მცენარეული წარმოშობის საკვები პროდუქტები. პესტიციდების ნარჩენების ჰა-ეოქრომატოგრაფიული განსაზღვრის მულტიმეთოდები ნაწილი 2. ექსტრაქციისა და გაწმენდის მეთოდები

GOST 32689.3-2014 მცენარეული წარმოშობის საკვები პროდუქტები. პესტიციდების ნარჩენების ჰა-ეოქრომატოგრაფიული განსაზღვრის მულტიმეთოდები ნაწილი 3. შედეგების განსაზღვრა და დადასტურება

შენიშვნა - ამ სტანდარტის გამოყენებისას მიზანშეწონილია შეამოწმოთ საცნობარო სტანდარტების მართებულობა საჯარო ინფორმაციის სისტემაში - ტექნიკური რეგულირებისა და მეტროლოგიის ფედერალური სააგენტოს ოფიციალურ ვებსაიტზე ინტერნეტში ან ეროვნული სტანდარტების წლიური ინფორმაციის ინდექსის მიხედვით. , რომელიც გამოქვეყნდა მიმდინარე წლის 1 იანვრის მდგომარეობით და მიმდინარე პერიოდის ყოველთვიური საინფორმაციო ინდექსის „ეროვნული სტანდარტების“ საკითხებზე. თუ საცნობარო სტანდარტი შეიცვალა (შეიცვალა), მაშინ ამ სტანდარტის გამოყენებისას უნდა იხელმძღვანელოთ შემცვლელი (შეცვლილი) სტანდარტით. თუ საცნობარო სტანდარტი გაუქმებულია ჩანაცვლების გარეშე, მაშინ დებულება, რომლითაც მასზე მითითება დიახ, გამოიყენება იმ ნაწილში, რომელიც გავლენას არ ახდენს ამ მითითებაზე.

3 აბრევიატურები

HPLC-MS/MS - ტანდემი მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფია-მასპექტრომეტრია:

OT A - ოხრატოქსინი A;

PAT - ლატულინი;

ESI - ელექტრული ველის სპრეის იონიზაცია (Etectfospray Ionization):

IARC - კიბოს კვლევის საერთაშორისო სააგენტო:

LOD - გამოვლენის ლიმიტი:

LOQ - რაოდენობრივი ზღვარი;

SRM - კომპონენტების იდენტიფიკაცია შერჩეული რეაქციის მონიტორინგის რეჟიმში.

4 მეთოდის არსი

მეთოდის არსი არის მიკოტოქსინების PAT და OTA წინასწარი ექსტრაქცია აცეტონიტრილით უწყლო მაგნიუმის სულფატის თანდასწრებით, კონცენტრაცია, ხელახალი დაშლა აცეტონიტრილში და მიკოტოქსინების მასის კონცენტრაციის რაოდენობრივი განსაზღვრა HPLC-MS/MS გამოყენებით სპრეის იონიზაციით ელექტროში. ველი და კომპონენტების იდენტიფიკაცია შერჩევითი კონტროლის რეჟიმის რეაქციებში.

5 საზომი ხელსაწყოები, დამხმარე მოწყობილობები, საცნობარო მასალები, რეაგენტები და მინის ჭურჭელი

ანალიზური HPLC-MS/MS სისტემა სამმაგი ოთხპოლუსიანი მასის დეტექტორით, მასის დიაპაზონში 10-დან 3000-მდე ატომური მასის ერთეულში (ამუ). მასის გაზომვის სიზუსტით მინიმუმ 0,1 ა. ელექტრულ ველში დაფრქვევის იონიზაცია, არჩეული რეაქციების მონიტორინგისა და ქალიშვილისა და მშობლის იონების სკანირების რეჟიმში მუშაობის უნარი, მინიმალური სიგნალი-ხმაურის თანაფარდობა 2 1000:1. ანალიტიკური სისტემა უნდა მოიცავდეს 8ELC მოდულს. შედგება ორობითი ტუმბოსგან მიქსერით, ქრომატოგრაფიული სვეტის თერმოსტატი, რომელიც უზრუნველყოფს გათბობის ტემპერატურას 50 °C-მდე და ქრომატოგრაფიული სვეტი საპირისპირო ფაზის სორბენტით, მარცვლის ზომით 5 μm C 1b, სიგრძე 150 მმ და შიდა დიამეტრი 3 მმ. გამოყენებული სისტემამ უნდა უზრუნველყოს მიკოტოქსინების გამოვლენა 0.1-დან 100.0 მკგ/დმ3 დიაპაზონში.

სპექტროფოტომეტრს აქვს გაზომვის დიაპაზონი, რომელიც საშუალებას იძლევა ტესტირება ტალღის სიგრძეზე 250-დან 400 ნმ-მდე, ოპტიკური სიმკვრივის გაზომვის აბსოლუტური შეცდომით არაუმეტეს 0,1%.

სასწორები GOST OIML R 76-1 მიხედვით. აწონვის სიზუსტის უზრუნველყოფა ერთჯერადი აწონის მაქსიმალური დასაშვები აბსოლუტური შეცდომით არაუმეტეს ± 0,01 მგ.

ულტრაბგერითი აბაზანა.

ცენტრიფუგა როტორის სიჩქარით 4000 - 5000 rpm საცდელი მილებისთვის 50 სმ 3 მოცულობით.

ცენტრიფუგა როტორის სიჩქარით 10,000 - 12,000 rpm Eppvn-dorf მილებისთვის 1,5 - 2,0 სმ 3 ტევადობით.

საშრობი კარადა, რომელიც ინარჩუნებს ტემპერატურას 200C-მდე.

საყოფაცხოვრებო მაცივარი GOST 16317 მიხედვით.

შეიკერი შერევისთვის.

თხევადი ნიმუშების დოზირების მოწყობილობები მუდმივი ან ცვლადი სიმძლავრით 20 - 1000 მმ 3, რეალური მოცულობის დოზირების შეცდომით არაუმეტეს 2,5%.

მიკროფილტრი - შპრიცის დანამატი (რეგენერირებული ცელულოზა, დიამეტრი 13 მმ. ფორების ზომა 0,2 - 0,4 მიკრონი).

კვარცის კუვეტები სამუშაო სიგრძით 1 სმ.

მიკოტოქსინები PAT და OTA საცნობარო ნიმუშებად გამოსაყენებლად ძირითადი ნივთიერების შემცველობით მინიმუმ 98%.

გლაციალური ძმარმჟავა GOST 61. ანალიტიკური კლასის მიხედვით.

აცეტონიტრილი გრადიენტური HPLC-სთვის.

მეთანოლი გრადიენტური HPLC-სთვის.

მაგნიუმის სულფატი უწყლო, x. თ.

კალციუმის ქლორიდი უწყლო, გრანულირებული, x. თ.

ქლოროფორმი GOST 20015 მიხედვით, x. თ.

ტოლუენი GOST 5789-ის მიხედვით, x. თ.

აბსოლუტური ეთილის სპირტი.

წყალი ლაბორატორიული ანალიზისთვის, სისუფთავის დონე 1 GOST ISO 3696-ის მიხედვით.

მე-2 სიზუსტის კლასის დიპლომირებული პიპეტები 1.2 ტევადობით. 5.10 სმ 3 სიზუსტის მე-2 კლასი GOST 29227-ის მიხედვით.

მე-2 სიზუსტის კლასის საზომი კოლბები ტევადობით 5. 10. 25. 50. 100 და 1000 სმ 3, ვერსიები 2 ან 2a GOST 1770-ის მიხედვით.

წვეტიანი ფსკერიანი კოლბები 10,25 სმ3 ტევადობით.

ეპენდორფის ტიპის ცენტრიფუგა მილი 1,5 - 2,0 სმ 3 ტევადობით.

მიკრომილაკი ტევადობით 100 - 400 მმ 3.

მე-2 სიზუსტის კლასის საზომი ცილინდრები 25. 50. 250 სმ 3 ნებისმიერი კონსტრუქციის GOST 1770-ის მიხედვით.

ცენტრიფუგის მილი ხრახნიანი თავსახურით, ტევადობა 50 სმ3

ფაიფურის ჭიქა 125-150 მმ დიამეტრით.

ლაბორატორიული საშრობი 3 დმ 3 ტევადობით.

ლაბორატორიული ძაბრები GOST 25336 მიხედვით.

ბრტყელძირიანი კოლბები ტევადობით 50, 100, 250 სმ 3 GOST 25336-ის მიხედვით.

ქიმიური სათვალეები ტევადობით 10. 20. 50. 100 და 200 სმ 3 GOST 25336-ის მიხედვით.

ნებადართულია სხვა საზომი ხელსაწყოების, დამხმარე მოწყობილობების, ჭურჭლის გამოყენება, რომლებიც არ ჩამოუვარდება ზემოაღნიშნულს მეტროლოგიური და ტექნიკური მახასიათებლებით და უზრუნველყოფს გაზომვის აუცილებელ სიზუსტეს, აგრეთვე სტანდარტული ნიმუშები, რეაგენტები და მასალები, რომლებიც არ არის უარესი ხარისხის. ზემოთ მოცემული.

6 სინჯის აღება

სინჯის აღება - GOST 26313-ის შესაბამისად. ნიმუშების მომზადება და შენახვა - GOST 26671, GOST 32689.1, GOST 32689.2 და GOST 32689.3 შესაბამისად.

7 მომზადება ტესტირებისთვის

7.1 ზოგადი მოთხოვნები

ტესტირებამდე ტარდება ლაბორატორიული მინის ჭურჭლის წინასწარი მომზადება, ასევე რეაგენტებისა და დამხმარე მასალების ხარისხის კონტროლი GOST 32689.1 მოთხოვნების შესაბამისად. GOST 32689.2 და GOST 32889.3.

7.2 დამხმარე ხსნარების მომზადება

7.2.1 მობილური ა ფაზის მომზადება

პიპეტით 1 სმ 3 გამყინვარების ძმარმჟავას 1000 სმ3 მოცულობით კოლბაში მჭიდროდ დახურული დაფქული მინით ან ფტორპლასტიკური საცობით. 100 სმ 3 მეთანოლი და მიიყვანეთ ნიშნულზე ბიდისტილირებული წყლით. ნარევი საფუძვლიანად არის შერეული.

ოთახის ტემპერატურაზე მობილური A ფაზის შენახვის ვადა არა უმეტეს ერთი თვისა.

7.2.2 მოძრავი B ფაზის მომზადება

1000 სმ 3 მოცულობის მოცულობით კოლბაში მჭიდროდ დახურული დაფქული მინით ან ფტორპლასტიკური საცობით, პიპეტით 1 სმ 3 გამყინვარების ძმარმჟავას და განზავდეს ნიშნულამდე მეთანოლით. ნარევი საფუძვლიანად არის შერეული.

მობილური B ფაზის შენახვის ვადა ოთახის ტემპერატურაზე არა უმეტეს ერთი თვისა.

შენიშვნა - მობილური ფაზის შეხება რეზინისა და პოლიმერული მასალებით [პოლიტეტრაფტორეთილენის (PTFE) გარდა] აკრძალულია.

7.2.3 გამხსნელის მომზადება 1

შესაფერის ჭურჭელში შეურიეთ ტოლუოლის 99 ნაწილი მოცულობითი ნაწილი და გამყინვარების ძმარმჟავას ერთი ნაწილი მოცულობით. ნარევი საფუძვლიანად არის შერეული.

ოთახის ტემპერატურაზე გამხსნელის 1 შენახვის ვადა არაუმეტეს 6 თვისა.

7.3 მაგნიუმის სულფატის მომზადება

უწყლო მაგნიუმის სულფატი, რომელიც გამოიყენება ექსტრაქციის დროს, როგორც სორბენტი, ვადის გასვლის თარიღშიც კი, უნდა გაშრეს ჰაერიდან შეწოვილი ტენის მოსაშორებლად. სორბენტი კალცინირებულია 180 °C - 200 °C ტემპერატურაზე 6 - 10 საათის განმავლობაში და ინახება დეზიკატორში უწყლო კალციუმის ქლორიდზე. რეაგენტის ვარგისიანობის კრიტერიუმია დამატებითი წყლის ფენის არარსებობა ხსნარის გაცხელებისას, ექსტრაქციის ეტაპი ტარდება 30 ° C - 40 ° C ტემპერატურამდე და 2-3 წუთის შემდეგ რეაქციის მასის შერევიდან. .

7.4 მიკოტოქსინის მარაგის ხსნარების მომზადება

7.4.1 PAT ხსნარების მომზადება

7.4.1.1 PAT-ის მარაგის ხსნარის მომზადება 200 მკგ/სმ 3 მასის კონცენტრაციით

მიიღეთ 2.0 მგ სუფთა კრისტალური PAT. იწონიდა 0,01 მგ სიზუსტით. იხსნება 10 სმ 3 მოცულობით კოლბაში მცირე რაოდენობით ქლოროფორმში და შემდეგ ხსნარის მოცულობა ქლოროფორმთან ერთად ნიშნულამდე.

ორიგინალური PAT ხსნარის შენახვის ვადა 0°C ტემპერატურაზე მინის მოცულობით კოლბაში დაფქული საცობით, მჭიდროდ გახვეული ალუმინის ფოლგაში. - არაუმეტეს 1 თვისა.

7.4.1.2 PAT ხსნარის მომზადება 20 მკგ/სმ3 მასის კონცენტრაციით

მიღებული საწყისი PAT ხსნარის 1 სმ 3 (იხ. 7.4.1.1) გადაიტანეთ 10 სმ 3 მოცულობით კოლბაში და შეცვალეთ ხსნარის მოცულობა ნიშნულამდე ქლოროფორმით. ხსნარში PAT-ის ზუსტი მასური კონცენტრაციის დასადგენად, მიღებული სტანდარტული PAT ხსნარის 5.0 სმ 3 იღებენ და გადააქვთ დაახლოებით 15 სმ 3 ტევადობის კონტეინერში, შემდეგ ქლოროფორმს აშორებენ აზოტით აფეთქებით, სანამ მშრალი ნივთიერება არ გახდება. მიღებული. მშრალი ნივთიერების მიღებისთანავე კონტეინერს ემატება 5.0 სმ 3 აბსოლუტური ეთანოლი. PAT მთლიანად დაიშალა. შედეგად მიღებული PAT ხსნარი ემატება კვარცის კუვეტს ოპტიკური ბილიკის სიგრძით 1 სმ, შემდეგ ხსნარის სპექტრი აღირიცხება სპექტროფოტომეტრზე ტალღის სიგრძის დიაპაზონში 250-დან 350 ნმ-მდე. აბსოლუტური ეთანოლის გამოყენება საცნობარო კუვეტში, როგორც კონტროლი.

PAT-ის მასური კონცენტრაცია Spdt ხსნარში. μg/cm3, გამოითვლება ფორმულით

გ.

სადაც A არის სპექტრის ოპტიკური სიმკვრივის მაქსიმალური მნიშვნელობა (ტალღის სიგრძე დაახლოებით 275 ნმ), ერთეული. OP. MIV - PAT-ის მოლეკულური წონა. უდრის 153.1 გ/მოლ:

1000 - კონვერტაციის ფაქტორი:

CF - კორექტირების ფაქტორი განსაზღვრული A დანართის მიხედვით:

c არის ოპტიკური შთანთქმის (ჩაქრობის) მოლური კოეფიციენტი, რომელიც უდრის 14600 მ 2/მოლს.

7.4.1.3 PAT ხსნარის მომზადება 100 მკგ/სმ 3 მასის კონცენტრაციით

PAT-ის საწყისი ხსნარის 5 სმ 3 ქლოროფორმში მასობრივი კონცენტრაციით 200 მკგ/სმ 3 (იხ. 7.4.1.1) გადაიტანება მოცულობით კოლბაში 10 სმ 3 ტევადობით, კონცენტრირებული მშრალ ნარჩენზე ოთახის ტემპერატურაზე. აზოტის ნაკადი და მაშინვე ხელახლა იხსნება აცეტონიტრილში, მისი მოცულობა კოლბაში ნიშნულამდე მიიყვანს.

7.4.1.4 PAT ხსნარების შენახვის ვადა 7.4.1.2 და 7.4.1.3 შესაბამისად 0 °C ტემპერატურაზე მინის მოცულობით კოლბაში დაფქული საცობით, მჭიდროდ გახვეული ალუმინის ფოლგაში. - არაუმეტეს 24 საათისა.

გამოყენებამდე ხსნარების ტემპერატურას აყენებენ ოთახის ტემპერატურამდე (აკრძალულია მოცულობითი კოლბიდან ალუმინის ფოლგის ამოღება, სანამ შიგთავსი არ მიაღწევს ოთახის ტემპერატურას). PAT-ის განადგურების გამო დაუშვებელია საცნობარო ნიმუშების შენახვა გამხსნელის (1) - (2) ამოღების შემდეგ მიღებული მშრალი ნივთიერების თხელი ფირის სახით.

7.4.2 OTA მარაგის ხსნარის მომზადება

7.4.2.1 OTA ხსნარის მომზადება 20 მკგ/სმ3 მასის კონცენტრაციით

2.0 მგ სუფთა კრისტალური OTA. იწონიდა 0,01 მგ სიზუსტით. იხსნება 25 სმ 3 ტევადობის ჭიქაში გამხსნელ 1-თან ერთად (იხ. 7.2.3) და რაოდენობრივად გადაიტანეთ 100 სმ 3 მოცულობის მოცულობით კოლბაში და ხსნარის 1 მოცულობა მიიყვანეთ ნიშნულზე გამხსნელით.

ხსნარში OTA-ს ზუსტი მასის კონცენტრაციის დასადგენად, მიღებული საწყისი OTA ხსნარი ემატება კვარცის კუვეტას ოპტიკური ბილიკის სიგრძით 1 სმ, შემდეგ კი ხსნარის სპექტრი იწერება სპექტროფოტომეტრზე ტალღის სიგრძის დიაპაზონში 300-დან. 370 ნმ. გამხსნელის 1-ის გამოყენებით საცნობარო კუვეტში, როგორც კონტროლი.

OTA-ს მასური კონცენტრაცია სოტას საწყის ხსნარში, μg/cm3, გამოითვლება ფორმულით

ლ L/tf-1000 CF

თან.

სადაც A არის სპექტრის ოპტიკური სიმკვრივის მაქსიმალური მნიშვნელობა (ტალღის სიგრძე დაახლოებით 333 ნმ), ერთეული. OP;

MW არის OTA-ს მოლეკულური წონა. უდრის 402,7 გ/მოლ:

1000 - კონვერტაციის ფაქტორი:

CF - კორექტირების ფაქტორი განისაზღვრება A დანართის შესაბამისად:

c არის ოპტიკური შთანთქმის (გაქრობის) მოლური კოეფიციენტი. უდრის 544, მ 2 /მოლ.

ორიგინალური OTA ხსნარის შენახვის ვადა მინუს 18 °C ტემპერატურაზე მინის მოცულობით კოლბაში დაფქული საცობით, მჭიდროდ გახვეული ალუმინის ფოლგაში. - არაუმეტეს ოთხი წლისა.

7.4 2.2 OTA ხსნარის მომზადება 5 მკგ/სმ3 მასის კონცენტრაციით

აიღეთ 2,5 სმ 3 ორიგინალური OTA ხსნარის (7.4.2.1). გადაიტანეთ 10 სმ3 მოცულობით კოლბაში და განზავეთ გამხსნელით 1 (იხ. 7.2.3) ნიშნულამდე.

OTA ხსნარის შენახვის ვადა 4 °C-ზე მინის მოცულობით კოლბაში დაფქული საცობით, მჭიდროდ გახვეული ალუმინის ფოლგაში. - არაუმეტეს 24 საათისა.

გამოყენებამდე მიიყვანეთ ხსნარის ტემპერატურა ოთახის ტემპერატურამდე (არ ამოიღოთ ალუმინის ფოლგა მოცულობითი კოლბიდან სანამ შიგთავსი არ მიაღწევს ოთახის ტემპერატურას) - .

7.5 PAT და OTA კალიბრაციის ხსნარების მომზადება

PAT და OTA კალიბრაციის ხსნარები მზადდება მათი მარაგის ხსნარების განსაზღვრული მოცულობების შერევით (იხ. 7.4.1.1 და 7.4.2.1) გასუფთავებულ ვაშლის წვენთან, რომელიც არ შეიცავს ანალიზებს.

7.5.1 PAT კალიბრაციის ხსნარების მომზადება

7.5.1.1 PAT-ის შუალედური ხსნარის მომზადება 1000 ნგ/სმ მასის კონცენტრაციით (ხსნარი p-1)

1 სმ PAT ხსნარის (იხ. 7.4.1.3) ან 1 სმ PAT შემადგენლობის სტანდარტული ნიმუშის 1 სმ PAT-ის მასის კონცენტრაციით 100 მკგ/სმ 3 გადადის მოცულობით კოლბაში 100 სმ 3 ტევადობით და მოცულობით. ხსნარი მორგებულია ნიშნულზე აცეტონიტრილით.

7.5.1.2 PAT-ის შუალედური ხსნარის მომზადება 10 ნგ/სმ 3 მასის კონცენტრაციით (ხსნარი l-2)

გადაიტანეთ 1 სმ L-1 ხსნარი (იხ. 7.5.1.1) 100 სმ მოცულობით კოლბაში და აცეტონიტრილით დაარეგულირეთ ხსნარის მოცულობა ნიშნულამდე.

7.5.1.3 PAT კალიბრაციის ხსნარების მომზადება

შეარჩიეთ ცხრილი 1-ის მიხედვით l-1 და l-2 შუალედური ხსნარების გარკვეული მოცულობები (იხ. 7.5.1.1 და 7.5.1.2) და დაამატეთ ისინი 10 სმ 1 მოცულობის მოცულობით კოლბაში.

ცხრილი 1 - ხსნარების მოცულობა l-1 და l-2 PAT კალიბრაციის ხსნარების მოსამზადებლად

კოლბებში ხსნარის მოცულობა მიიყვანეთ ნიშნულამდე გამწმენდი ვაშლის (ან სხვა გაფილტრული) წვენით.

კალიბრაციის ხსნარის შენახვის ვადა 0 °C - 4 °C ტემპერატურაზე მინის მოცულობით კოლბაში დაფქული საცობით არის არაუმეტეს 24 საათისა.

7.5.2 OTA კალიბრაციის ხსნარების მომზადება

7.5.2.1 OTA-ს შუალედური ხსნარის მომზადება 200 ნგ/სმ 3 მასის კონცენტრაციით (ხსნარი A-1)

1 სმ 3 OTA ხსნარი 5 მკგ/სმ 3 კონცენტრაციით (იხ. 7.4.2.2) კონცენტრირებულია მშრალ ნარჩენზე აზოტის ნაკადის ქვეშ ოთახის ტემპერატურაზე და დაუყოვნებლივ გადააქვთ აცეტონიტრილთან ერთად 25 სმ 3 მოცულობით კოლბაში.

7.5.2.2 შუალედური OTA ხსნარის მომზადება 10 ნგ/სმ მასის კონცენტრაციით (ხსნარი A-2)

შუალედური ხსნარის OTA A-1 0,5 სმ 3 (იხ. 7.5.2.1) გადადის 10 სმ 3 მოცულობით კოლბაში და ხსნარი ასწორებენ ნიშნულს აცეტონიტრილით.

7.5.2.3 OTA კალიბრაციის ხსნარების მომზადება

შეარჩიეთ A-1 და A-2 შუალედური ხსნარების მოცულობა მე-2 ცხრილის შესაბამისად (იხ. 7.5.2.1 და 7.5.2.2) და დაამატეთ ისინი 10 სმ 3 მოცულობის მოცულობით კოლბაში.

ცხრილი 2 - A-1 და A-2 ხსნარების მოცულობა OTA კალიბრაციის ხსნარების მოსამზადებლად

კოლბებში ხსნარის მოცულობა მიიყვანეთ ნიშნულამდე გამწმენდი ვაშლის (ან სხვა გაფილტრული) წვენით.

ტესტის ჩასატარებლად e HPLC-MS/MS სისტემა შეჰყავთ 10 მმ 3-ში მომზადებული შესაბამისად

7.5.1.3 და 7.5.2 3 კალიბრაციის ხსნარი PAT და OTA და განახორციელოს კალიბრაცია 7.7-ის შესაბამისად, 8.3.1-ში მოცემული პირობების გათვალისწინებით.

კალიბრაციის ხსნარის შენახვის ვადა 0 °C - 4 °C ტემპერატურაზე მინის მოცულობით კოლბაში დაფქული საცობით არის არაუმეტეს 24 საათისა.

7.6 HPLC-MS/MS სისტემის მომზადება

HPLC-MS/MS სისტემა მომზადებულია გაზომვებისთვის საოპერაციო სახელმძღვანელოს (ინსტრუქციების) და დანართ B-ში მოცემული ინფორმაციის შესაბამისად.

მასსპექტრომეტრის მუშაობის რეჟიმების დაყენებისას რეკომენდებულია MS/MS პარამეტრების გამოყენება მიკოტოქსინების დასადგენად, რომელიც მოცემულია დანართ B-ში.

ამ შემთხვევაში, შემდეგი პირობები უნდა დაკმაყოფილდეს:

გარემოს ტემპერატურა 20 °C-დან 25 °C-მდე:

ატმოსფერული წნევა 84-დან 106 კპა-მდეა.

ქსელის ძაბვა (220 ± 10) V:

დენის სიხშირე ელექტრო ქსელში არის 49-დან 51 ჰც-მდე;

ჰაერის ფარდობითი ტენიანობა 40%-დან 80%-მდე.

7.7 HPLC-MS/MS სისტემების კალიბრაცია

სისტემის კალიბრაცია წვენებში მიკოტოქსინების ხსნარებით 7.5-ის მიხედვით ხორციელდება სახელმძღვანელოს შესაბამისად

HPLC-MS/MS სისტემის გამოყენების სახელმძღვანელო (ინსტრუქცია) და 8.3.1 პირობების გათვალისწინებით თვეში ერთხელ. PAT-ისა და OTA-ს პიკური არეები განისაზღვრება ქრომატოგრამებზე და კალიბრაციის დამოკიდებულება დგინდება კონცენტრაციის დიაპაზონში პიკის ფართობის საფუძველზე 7.5-ის მიხედვით. გამოთვალეთ კორელაციის კოეფიციენტი და მიკოტოქსინების მასის კონცენტრაციის გამოთვლილი მნიშვნელობების გადახრები კალიბრაციის თითოეულ წერტილში ფაქტობრივი მნიშვნელობიდან კალიბრაციის ხსნარების მომზადების პროცედურის შესაბამისად (იხ. 7.5). კალიბრაცია მისაღებია, თუ კორელაციის კოეფიციენტი არის მინიმუმ 0.999 (PAT-ისთვის) და 0.965 (OTA-სთვის). ხოლო მასის კონცენტრაციის გამოთვლილი მნიშვნელობის ფარდობითი გადახრა რეალური მნიშვნელობიდან არ არის ± 10%-ზე მეტი.

ფარდობითი გადახრის ნაცვლად, კალიბრაციის მახასიათებლის მისაღები შეიძლება შეფასდეს ფარდობითი სტანდარტული გადახრით, რომელიც არ უნდა აღემატებოდეს 5%-ს.

8 ტესტირება

8.1 ექსტრაქცია

10 სმ 3 (UV) საფუძვლიანად შერეული წვენის პროდუქტები ემატება ცენტრიფუგაციის მილს ხრახნიანი თავსახურით 50 სმ 3 ტევადობით. სინჯარას ემატება 20 სმ 3 აცეტონიტრილი და 15 გ უწყლო მაგნიუმის სულფატი. ნარევი ინტენსიურად ურევენ სამიდან ხუთ წუთს ხელით ან შეიკერის გამოყენებით. მორევის შემდეგ მიღებული ექსტრაქტი 10 წუთის განმავლობაში ცენტრიფუგირდება 4000 - 5000 rpm ოთახის ტემპერატურაზე ან 5 წუთის განმავლობაში 5 °C-ზე გაცივებულ ცენტრიფუგაში. გაზომილია ექსტრაქტის მთლიანი მოცულობა ცენტრიფუგაციის შემდეგ (V). 18 - 19 სმ 3 (U) ექსტრაქტი, შერჩეული პიპეტის ან დოზირების მოწყობილობის გამოყენებით, გადადის 25 სმ 3 ტევადობის ბასრი ფსკერზე. ხსნარი კონცენტრირებულია მშრალ ნარჩენად აზოტის ნაკადის ქვეშ ოთახის ტემპერატურაზე ან მბრუნავ აორთქლებაზე არაუმეტეს 40 °C ტემპერატურაზე და დაუყოვნებლივ ხელახლა იხსნება 1 სმ3 აცეტონიტრილში.

თუ ჭურჭლის კედლებზე არის უხსნადი კარამელის ფილმი, ის ნადგურდება ულტრაბგერითი აბაზანაში სამიდან ხუთ წუთში. ხსნარი გადააქვთ ეპეიდორფის მილში 1,5 - 2,0 სმ 3 ტევადობით და ცენტრიფუგირდება 10 000 - 12 000 ბრ/წთ 3-5 წუთის განმავლობაში. ზედა ფენა ირჩევა და იფილტრება მიკროფილტრის მეშვეობით 0.2 - 0.4 მიკრონი ზომებით პირდაპირ მიკროტუბში 100 - 400 მმ 3 ტევადობით. HPLC-MS/MS ტესტის ჩასატარებლად სისტემაში შეჰყავთ მომზადებული ნიმუშის 10 მმ 3.

8.2 ნიმუშის მომზადება კონცენტრირებული პროდუქტებისგან

კონცენტრირებული წვენები (პიურეები) იხსნება წყლით ხსნადი მყარი ნივთიერებების მინიმალურ დონემდე, რომელიც საჭიროა მარეგულირებელი დოკუმენტებით კონკრეტული ტიპის წვენის პროდუქტისთვის. კონცენტრირებული წვენების პროდუქტები, რომლებისთვისაც არ არის გათვალისწინებული ხსნადი მყარი ნივთიერებების მინიმალური დონე, ხელახლა ხდება ბიდისტილირებული წყლით ხსნადი მყარი შემცველობით 11,2%. ხსნადი მყარი ნივთიერებების შემცველობა კონტროლდება GOST 29030-ის მიხედვით.

ამოღებული ნიმუშების ამოღება ხორციელდება 8.1-ის მიხედვით.

8.3 გაზომვების აღება

8.3.1 ზოგადი პირობები

8.1-ის მიხედვით მომზადებული ნიმუშებისა და კალიბრაციის ხსნარების ინექცია ხორციელდება შერჩეული თანმიმდევრობით. ყველაზე გავრცელებული მეთოდია კალიბრაციის ხსნარების ინექცია, რათა დაიწყოს და დაასრულოს ნიმუშის ინექციების სერია.

HPLC-MS/MS სისტემა უნდა იყოს კონფიგურირებული SRM რეჟიმში გადასვლებით, რომლებიც უზრუნველყოფენ ანალიზირებული მიკოტოქსინების შერჩევით გამოვლენას. შეკავების დრო და პიკის არეები განისაზღვრება პროგრამული უზრუნველყოფის გამოყენებით ანალიზის შედეგების ჩაწერისა და გამოსათვლელად. მოწოდებული HPLC-MS/MS სისტემით. HPLC/MS/MS სისტემების მაგალითები, გამოყოფის პირობები და მასის სპექტრომეტრიული გამოვლენა მოცემულია დანართ B-ში.

ნიმუშების ტესტები ტარდება განმეორებადობის პირობებში ორი პარალელური განსაზღვრისთვის GOST ISO 5725-1 (ქვესექცია 3.14) და GOST ISO 5725-2 შესაბამისად.

8.3.2 მიკოტოქსინების იდენტიფიკაცია

მიკოტოქსინების იდენტიფიცირებისთვის, ნიმუშის ხსნარებიდან მიღებული შეკავების დრო შედარებულია კალიბრაციის ხსნარებიდან შესაბამისი მიკოტოქსინების შეკავების დროებთან. მიკოტოქსინების არსებობის დასადასტურებლად, პირველი და მეორე hl/2* გადასვლებიდან სიგნალის ინტენსივობის თანაფარდობა შედარებულია კალიბრაციის ხსნარებიდან მიკოტოქსინების სიგნალის ინტენსივობის თანაფარდობასთან.

პიკების თანაფარდობა ერთი მიკოტოქსიკანტისთვის არ უნდა განსხვავდებოდეს სიგნალის ინტენსივობის მოსალოდნელი თანაფარდობიდან 20%-ზე მეტით.

9 ტესტის შედეგების დამუშავება და რეგისტრაცია

9.1 რაოდენობრივი განსაზღვრა

მიკოტოქსინების რაოდენობრივი განსაზღვრა მომზადებული ექსტრაქტის შეყვანილ მოცულობაში (იხ. 8.1) ხორციელდება მიკოტოქსინის პიკის ფართობის (ან სიმაღლის) შედარების გზით მოცემული მიკოტოქსინის შესაბამისი კალიბრაციის მახასიათებლებთან.

მიკოტოქსინების მასობრივი კონცენტრაცია შემოწმებულ პროდუქტებში C. μg/dm3. გამოითვლება ფორმულით

სადაც 1000 არის კონვერტაციის ფაქტორი კუბური სანტიმეტრიდან კუბურ დეციმეტრამდე;

M არის მიკოტოქსინის კონცენტრაცია ექსტრაქტის მოცულობაში 10 მმ e. შეყვანილია 8ELC-MS/MS სისტემაში, განისაზღვრება კალიბრაციის დამოკიდებულებით, ig.

V არის აცეტონიტრილის მოცულობა, რომელშიც ექსტრაქტი ხელახლა იხსნება კონცენტრაციის შემდეგ, სმ 3: V არის ექსტრაქტის მთლიანი მოცულობა, საიდანაც კონცენტრაციისთვის ირჩევა V მოცულობა. სმ 3;

უ"*. - ნიმუშის მოცულობა შეყვანილი ქრომატოგრაფში (U" = 10 მმ 3), მმ 3;

Vb არის ტესტირებისთვის აღებული წვენის პროდუქტის ნიმუშის მოცულობა, სმ 3;

V > - კონცენტრაციისთვის შერჩეული ექსტრაქტის მოცულობა სმ 3.

კონცენტრირებულ წვენ პროდუქტებში მიკოტოქსინების რაოდენობის გაანგარიშებისას მხედველობაში მიიღება მისი წყლით განზავების ხარისხი 8.2-ის მიხედვით.

სამი პარალელური განსაზღვრის შედეგების საშუალო არითმეტიკული გაზომვის შედეგი მიიღება, თუ მისაღები პირობა დაკმაყოფილებულია.

3 ' I 1 * p>sha: WllMNN I ' l QQ

(i', + u" P2 + u" p,)

სად და" ||mt.. და' P((mv - მაქსიმალური და მინიმალური მნიშვნელობები პარალელური განსაზღვრების სამი შედეგიდან, μg/dm 3;

n 'm1' და p"' tv iu - სამი პარალელური განსაზღვრის შედეგები, μg/dm 3;

CRo.es - კრიტიკული დიაპაზონის მნიშვნელობა. %

შეუსაბამობა სამ პარალელურ განსაზღვრებას შორის (საშუალო პროცენტის სახით). შესრულებული ერთ ლაბორატორიაში არ უნდა აღემატებოდეს SNAo 95-ის განმეორებადობის (კონვერგენციის) ლიმიტს. უდრის 3,6 S-ს, ალბათობით P = 0,95. თუ ეს პირობა დაკმაყოფილებულია, სამი პარალელური განსაზღვრის საშუალო არითმეტიკული გაზომვის საბოლოო შედეგი მიიღება. დამრგვალებულია მესამე ათწილადამდე.

გაზომვის შედეგები აღირიცხება პროტოკოლში GOST ISO/IEC 17025-ის შესაბამისად.

9.2 თუ მიღებული შედეგი აჩვენებს, რომ მიკოტოქსინის შემცველობა აჭარბებს კალიბრაციის დამოკიდებულების დიაპაზონის ზედა ზღვარს, მოამზადეთ ახალი ნიმუში, გაზარდეთ მისი განზავება წყლით და გაიმეორეთ გაზომვა.

10 მეტროლოგიური მახასიათებლები

PAT და OTA მეთოდის მეტროლოგიური მახასიათებლები შეესაბამება მე-3 ცხრილში მოცემულ პირობებს.

ცხრილი 3 - HPLC-MS/MS მეთოდის ზუსტი ინდიკატორები

ცხრილის დასასრული 3

PAT და OTA-ს გამოვლენის ლიმიტები წვენის პროდუქტების ნიმუშებშია: LOD - 0.03 μg/dm\ LOQ - 0.1 μg/dm\

11 გაზომვის შედეგების ხარისხის კონტროლი

გაზომვის შედეგების ხარისხის ინდიკატორების მონიტორინგი ლაბორატორიაში გულისხმობს გაზომვის შედეგების სტაბილურობის მონიტორინგს შუალედური სიზუსტის სტანდარტული გადახრის სტაბილურობის შემოწმების გამოყენებით. სტაბილურობის ტესტირება ტარდება Shewhart საკონტროლო სქემების გამოყენებით. გაზომვების შედეგების სტაბილურობის მონიტორინგის სიხშირე რეგულირდება ხარისხის სისტემის შიდა ლაბორატორიულ დოკუმენტებში. თუ კონტროლის შედეგები არადამაკმაყოფილებელია, მაგალითად, როდესაც მოქმედების ლიმიტი გადაჭარბებულია ან გამაფრთხილებელი ლიმიტი რეგულარულად აღემატება, განისაზღვრება ამ გადახრების მიზეზები, მათ შორის რეაგენტების შეცვლა და ოპერატორის მუშაობის შემოწმება.

12 უსაფრთხოების მოთხოვნები

გაზომვების ჩატარებისას უნდა დაიცვან შემდეგი მოთხოვნები:

ელექტრო უსაფრთხოება GOST 12.1.019-ის და ტექნიკური დოკუმენტაციის შესაბამისად HPLC-MS/MS სისტემისთვის;

ცვალებადობა და უსაფრთხოება GOST 12.1.010-ის შესაბამისად;

სახანძრო უსაფრთხოება GOST 12.1.004 შესაბამისად;

უსაფრთხოება საშიშ ნივთიერებებთან მუშაობისას GOST 12.1.007 შესაბამისად.

ყურადღება! მიკოტოქსინებთან მუშაობისას გასათვალისწინებელია, რომ PAT და OTA-ს აქვთ ძლიერი ტოქსიკური თვისებები გამოხატული შეფროტოქსიურობით. იმუნოტოქსიკური. ტერატოგენული და გენოტოქსიური ეფექტი. iARC კლასიფიკაციის მიხედვით, OTA კლასიფიცირებულია, როგორც პოტენციურად საშიში კანცეროგენი ადამიანისთვის (ჯგუფი 2B). მიკოტოქსინებთან მუშაობისას დაცული უნდა იყოს უსაფრთხოების გაზრდილი ზომები. ლაბორატორიის პერსონალი უნდა ატაროს დამცავი ტანსაცმელი. მათ შორის დამცავი ნიღაბი, ხელთათმანები და სათვალე. მიკოტოქსინების ყველა ოპერაცია ტარდება კვამლის გამწოვში. სამუშაოს დასრულების შემდეგ გამოყენებული ლაბორატორიული მინის ნაწარმი და ნარჩენები დეაქტივირებულია.

დანართი A (სავალდებულო)

სპექტროფოტომეტრის შემოწმება და CF კორექტირების ფაქტორის განსაზღვრა მიკოტოქსინების მასის კონცენტრაციის გამოსათვლელად სტანდარტულ ხსნარებში

ა.1 საწყის ხსნარებში მიკოტოქსიკანტების მასური კონცენტრაციების დასადგენად (იხ. 7.4.1.1 და 7.4.2.1), გამოიყენეთ სპექტროფოტომეტრი, რომელიც შესაფერისია ხსნარების ოპტიკური სიმკვრივის გასაზომად კვარცის კუვეტში ოპტიკური ბილიკის სიგრძით 1 სმ ტალღის სიგრძეში. დიაპაზონი 200-დან 400 ნმ-მდე.

სპექტროფოტომეტრი დაკალიბრებულია შემდეგნაირად.

გაზომეთ გოგირდის მჟავაში (HjSO) კალიუმის დიქრომატის (K 2 Cr?0/) ხსნარის ოპტიკური სიმკვრივე.<) - 0.25; 0.125 и 0.0625 ммоль/дм 5 в максимальной точке поглощения (длина волны около 350 им), используя в качестве контроля раствор серной кислоты (H 2 S0 4) концентраты 0.009 ммоль/дм 3 .

შემდეგ გამოითვლება c ოპტიკური სიმკვრივის მოლური კოეფიციენტის მნიშვნელობა. მ"/მოლ. კალიუმის დიქრომატის თითოეული კონცენტრაციისთვის ფორმულის მიხედვით

გ =--<* 1 >

სადაც A არის და ecu არის გოგირდმჟავაში კალიუმის დიქრომატის ხსნარის ოპტიკური სიმკვრივის სხვა მნიშვნელობა შესაბამისი შესაბამისი

მიმდინარე კონცენტრაცია, ერთეული. OL;

C არის კალიუმის დიქრომატის ხსნარის კონცენტრაცია გოგირდმჟავაში, მმოლ/დმ 3.

თუ განსხვავება სამ მიღებულ c მნიშვნელობას შორის არის A ოპტიკური სიმკვრივის გაზომვების გარანტირებული სიზუსტის დიაპაზონის მიღმა, მაშინ უნდა შემოწმდეს კალიბრაციის პროცედურა ან აღჭურვილობა. გავხსნათ საშუალო არითმეტიკული მნიშვნელობა c.

განსაზღვრეთ კორექტირების ფაქტორი CF (განზომილებიანი მნიშვნელობა) კონკრეტული აღჭურვილობისთვის (სპექტროფოტომეტრი და კუვეტები) ფორმულის გამოყენებით

სადაც 3160 არის ოპტიკური სიმკვრივის მოლური კოეფიციენტის დამახასიათებელი მნიშვნელობა კალიუმის დიქრომატის ხსნარებისთვის (K*Cr 2 0/). მკმოლი;

c არის ოპტიკური სიმკვრივის მოლური კოეფიციენტი, რომელიც გამოითვლება ფორმულით (A.1). მ? /მოლ.

თუ მიღებული კორექტირების ფაქტორი CF მნიშვნელობა არის 0,95-ზე ნაკლები ან 1,05-ზე მეტი. შემდეგ გადახრების აღმოსაფხვრელად აუცილებელია კალიბრაციის პროცედურის ან აღჭურვილობის შემოწმება (დაკალიბრებისა და სისუფთავის შესამოწმებლად გამოიყენება იგივე ნაკრები) (1] - .

დანართი B (ცნობისთვის)

HPLC-MS/MS სისტემების მაგალითები წვენებში მიკოტოქსინების დასადგენად და სხვა

წვენების პროდუქტები

B.1 HPLC-MS/MS სისტემა Ня 1

აპარატურის პლატფორმა: Varian 320-MS LC/MS/MS.

დ.მ. ზუბოვსკი, სახელმწიფო დაწესებულება „ბელორუსის სახელმწიფო ვეტერინარული ცენტრი“, მთავარი ვეტერინარი

მეთოდი შემდგომში განვითარდა სახელწოდებით მაღალი ხარისხის თხელი ფენის ქრომატოგრაფია (HPTLC). სტაციონარული ფაზის ფენის სისქის (100 მკმ-მდე) და ნაწილაკების ზომის (5 მკმ-მდე) შემცირებამ გამოიწვია ნივთიერებების უკეთეს გამოყოფა დროის მოკლე მონაკვეთში.
TLC მეთოდები ხელმისაწვდომია თითქმის ყველა მიკოტოქსინისთვის. გამოვლენა და სპეციფიკური იდენტიფიკაცია შემუშავებულია თითოეული ინდივიდუალური მიკოტოქსინის მოლეკულური თვისებების ან ნივთიერების ტრანსფორმაციის რეაქციების გამოყენებით.

თხელი ფენის ქრომატოგრაფიის ძირითადი უარყოფითი მხარეები:
§ დაბალი პროდუქტიულობა;
§ ნიმუშების უმეტესობა საჭიროებს მოპოვებისა და გამწმენდის ეტაპებს, რათა აღმოიფხვრას პოტენციური ინტერფერენციები და მატრიცული ნაერთები ანალიზამდე;
§ ანალიზის კონცენტრაცია უნდა იყოს 0,01-0,1% ფარგლებში;
§ ტოქსიკური და აქროლადი ნივთიერებების გამხსნელად გამოყენება.
მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფიის (HPLC) ტექნიკა მიკოტოქსინების კვლევის სფეროში ძირითადად გამოიყენება მატრიქსის ნაერთების საბოლოო გამოყოფისა და საინტერესო ანალიზისთვის. HPLC მეთოდები ახლა ფართოდ გამოიყენება მათი უმაღლესი შესრულებისა და საიმედოობის გამო თხელი ფენის ქრომატოგრაფიასთან შედარებით. HPLC მეთოდები შემუშავებულია მარცვლეულისა და სხვა სოფლის მეურნეობის პროდუქტების ძირითადი მიკოტოქსინების უმეტესობისთვის. მეთოდების უმეტესობა საიმედო და სტაბილურია.
HPLC მეთოდი ეფუძნება გაანალიზებული ექსტრაქტის გამოყოფას ქრომატოგრაფიული სვეტის სტაციონარულ ფაზაში (სურათი 3) (სვეტები C8 და C18 უფრო ხშირად გამოიყენება მიკოტოქსინების ანალიზისთვის) და მათ შემდგომ იდენტიფიკაციასა და რაოდენობრივ განსაზღვრას სპეციალური დეტექტორების გამოყენებით. მიკოტოქსინის ანალიზის ყველაზე გავრცელებული დეტექტორები დღეს არის ულტრაიისფერი და ფლუორესცენტური.
ამ დეტექტორების გამოყენებით HPLC მეთოდების მგრძნობელობის ლიმიტები შეიძლება მიაღწიოს 1 მკგ/კგ ნიმუშს.
ლიტერატურაში მოხსენებულია მრავალი მიკოტოქსინის ერთდროული ანალიზისთვის HPLC მეთოდების შემუშავება. ტრიქოთეცენური მიკოტოქსინები, კერძოდ ტრიქოთეცენები, განსაკუთრებით წარმატებით ანალიზდება ამ გზით.

პრაქტიკაში საკვებისა და საკვები პროდუქტების შესასწავლად დარგში, წარმოებისა და ტესტირების ლაბორატორიებში, საჭიროა მეთოდები, რომლებიც საშუალებას მისცემს დიდი რაოდენობით ნიმუშების რაოდენობრივ და სწრაფ გამოკვლევას მიკოტოქსინების არსებობისთვის, რაც შეიძლება ნაკლები ძალისხმევით და ფინანსური რესურსებით.
ყველა ეს მახასიათებელი აკმაყოფილებს იმუნოლოგიურ რეაქციებზე დაფუძნებული მეთოდებით. მიკოტოქსინების ანალიზისთვის კომერციულად ხელმისაწვდომი იმუნოლოგიური მეთოდები ეფუძნება სპეციფიკური მონოკლონური და პოლიკლონური ანტისხეულების გამოყენებას სპეციფიკური ტოქსინების წინააღმდეგ და ზოგადად იყოფა:
§ მეთოდი, რომელიც დაფუძნებულია იმუნოაფინურობის სვეტებზე (IAC);
§ ფერმენტის იმუნოანალიზი (ELISA, ELISA) (ცხრილი 1).

როგორც წესი, იმუნოაფინურობის სვეტები რეალურად გამოიყენება მატრიქსის ნაერთების ნიმუშის გასაწმენდად და კონკრეტული მიკოტოქსინის იზოლაციისა და კონცენტრაციის დასაშვებად.
IAC-დან ტოქსინის შემდგომი გამორეცხვა იძლევა რაოდენობრივ განსაზღვრას კლასიკური ანალიტიკური მეთოდების გამოყენებით. ფერმენტული იმუნოანალიზის შემთხვევაში, გამწმენდი პროცედურები, როგორც წესი, არ არის ისეთი ინტენსიური, როგორც სხვა ანალიტიკურ მეთოდებში. მიკოტოქსინის შემცველი ნიმუშის ჰომოგენატი ან ექსტრაქტი ან პირდაპირ რაოდენობრივად შეფასდება სტანდარტული მიკროტიტრული ფირფიტის ან მილის ELISA ფორმატის გამოყენებით, ან ფერმენტთან დაკავშირებული იმუნოსორბენტული მემბრანის ანალიზი გამოიყენება მიკოტოქსინების არსებობის ხარისხობრივი ან ნახევრად რაოდენობრივი განსაზღვრის უზრუნველსაყოფად.
ლიტერატურაში მოხსენებული იმუნოლოგიური მიდგომის გამოყენებით მიკოტოქსინების შესწავლის სხვა მეთოდებია ოპტიკური და აკუსტიკური ბიოსენსორები, კაპილარული ელექტროფორეზი.

იმუნოაფინურობის სვეტები ჩვეულებრივ გამოიყენება ტესტის ნიმუშის გასაწმენდად რთული მატრიცებიდან და ტოქსინების კონცენტრაციიდან მიკოტოქსინის შემცველობის აღმოჩენამდე და შეფასებამდე კლასიკური ანალიტიკური ტექნიკის გამოყენებით, როგორიცაა HPLC, გაზის ქრომატოგრაფია, მასის სპექტრომეტრია, ფლუორომეტრია, HPTLC და TLC. მეთოდი გულისხმობს ნიმუშის ექსტრაქტის ინექციას სვეტში, რომელიც შეიცავს იმუნოაფინურობის მატრიცას, რომელიც შეიცავს მყარ ფაზას (მაგ., აგაროზის მარცვლები), რომელზეც კოვალენტურად არის მიმაგრებული ანტიმიკოტოქსინის ანტისხეულები (სურათი 4). ნიმუშში შემავალი ტოქსინის მოლეკულა მიმაგრებულია შესაბამის იმობილიზებულ ანტისხეულზე. შემდგომი ნაბიჯები მოიცავს მატრიცის შეუზღუდავი კომპონენტების და ექსტრაქტორის მოცილებას, ტოქსინის გამორეცხვას გამორეცხვის შემადგენლობის შეცვლით და ბოლოს ტოქსინის აღმოჩენას ანალიტიკური მეთოდების გამოყენებით. ალტერნატიულად, სვეტში შეკრული მიკოტოქსინი შეიძლება გამოირეცხოს და პირდაპირ გაიზომოს ფლუორომეტრიით, მიკოტოქსინების შინაგანი ფლუორესცენციის საფუძველზე.
მემბრანული ტესტი საშუალებას გაძლევთ უპასუხოთ კითხვას მოკლე დროში (დაახლოებით 10-15 წუთი): არის თუ არა მიკოტოქსინები ტესტის ნიმუშში ამ ტესტის მგრძნობელობის ზღვარს ზემოთ? ანუ, ფაქტობრივად, ეს არის ნიმუშში მიკოტოქსინების არსებობის/არარსებობის თვისებრივი განსაზღვრა. მეთოდი მოითხოვს მოპოვებას, ფილტრაციას, გაწმენდას (სვეტის მეშვეობით) და ნიმუშის განზავებას. შემდეგ, ხსნარი გამოიყენება მონოკლონური ანტისხეულებით მგრძნობიარე მემბრანაზე, რომელსაც ასევე ემატება მიკოტოქსინის ფერმენტის კონიუგატი. თუ ნიმუშში მიკოტოქსინების კონცენტრაცია აღემატება ტესტის გამოვლენის ზღვარს, ზედაპირზე არსებული ყველა ანტისხეული უკავშირდება მათ და დამატებული კონიუგატი ამოღებულია სარეცხი ეტაპის დროს. როდესაც უფერო სუბსტრატს ემატება, მემბრანის ზედაპირზე არსებული კონიუგატი ახდენს ფერის რეაქციას, რის შედეგადაც წარმოიქმნება ფერადი ლაქა კონიუგატის შეკვრის ადგილას. მემბრანის ანალიტიკური ზონის შეღებვა მიუთითებს ნიმუშში მიკოტოქსინების არარსებობაზე.
ფერმენტული იმუნოანალიზები, როგორც წესი, გამოიყენება სატესტო ნიმუშში მიკოტოქსინების არსებობის გარკვეულ დონეზე ზემოთ (ან მათი ნაკლებობის) მონიტორინგისთვის. ახლა უკვე ხელმისაწვდომია მთელი რიგი ხარისხობრივი, ნახევრად რაოდენობრივი და რაოდენობრივი მეთოდები. ELISA-ს შედეგებზე დაყრდნობით, საეჭვო ნიმუშები ხელახლა უნდა შემოწმდეს კლასიკური მეთოდებით. ELISA-ს სხვადასხვა ვარიანტი ხელმისაწვდომია მიკოტოქსინების ანალიზისთვის (მაგ., მემბრანული ტესტები, მიკროტიტრული ფირფიტები და მილის მეთოდები). როგორც წესი, ELISA მეთოდი ეფუძნება კონკურენციის ანალიზს, რომელიც იყენებს ან ფერმენტ კონიუგატთან დაკავშირებულ მიკოტოქსინებს ან ანტისხეულებს სპეციფიკური ტოქსინის წინააღმდეგ, რომელიც ანალიზდება (სურათი 5). რეაქციების ტიპიური თანმიმდევრობა მზა რეაგენტების გამოყენებით მიკროტიტრული ფირფიტის ფორმატში შემდეგია:
1. ფერმენტის კონიუგატი ემატება საცდელი ნიმუშის ექსტრაქტს;
2. ნარევი ემატება შესაბამის ანტისხეულებს, რომლებიც გამოიყენება ფირფიტის ჭაბურღილების ზედაპირზე (მაგალითად, ანტისხეულებით დაფარული მიკროტიტრული ფირფიტა);
3. ტოქსინთან დაკავშირებული და იმობილიზებული ანტისხეულებით შეკრული კონიუგატის რაოდენობა დამოკიდებულია ნიმუშში ტოქსინის რაოდენობაზე; რაც უფრო მაღალია ტოქსინის რაოდენობა ნიმუშში, მით ნაკლებია ფერმენტის კონიუგატის რაოდენობა, რომელიც მიმაგრებულია ფირფიტის ჭაბურღილების ზედაპირზე დატანილ ანტისხეულებზე და პირიქით;
4. ზედაპირული ანტისხეულებით შეკრული კონიუგატის ფერმენტული აქტივობა განისაზღვრება შესაბამისი სუბსტრატის დამატებით, რაც იწვევს ფერადი პროდუქტების წარმოქმნას, რომელთა კონცენტრაცია უკუპროპორციულია ტოქსინის კონცენტრაციის საგამოცდო ნიმუშში.

ბელორუსის სახელმწიფო ვეტერინარული ცენტრის ბაზაზე ჩვენ 2004-2006წწ. საკვებში მიკოტოქსინების შემცველობა გაანალიზდა ფერმენტული იმუნოანალიზის მეთოდით. კვლევისთვის გამოყენებული იყო R-Biopharm-ის მიერ წარმოებული მზა სატესტო სისტემები, გერმანია. ეს კომპანია აწარმოებს უამრავ კომპლექტს მიკოტოქსინების რაოდენობრივი განსაზღვრისთვის: აფლატოქსინები B, G, M, ზეარალენონი, ოხრატოქსინი A, T-2 ტოქსინი, დეოქსინივალენოლი, ფუმონიზინი B1, ციტრინინი. უნდა აღინიშნოს, რომ თითქმის ყველა ჩამოთვლილი მიკოტოქსინისთვის არსებობს ტესტის სისტემების ვერსიები ამ ტოქსიკური ნაერთების განსაკუთრებით დაბალი კონცენტრაციის დასადგენად მგრძნობელობის ლიმიტით ქრომატოგრაფიული ტექნიკის დონეზე (RIDASCREEN® Mycotoxins) (ინკუბაციის დრო 1-2 საათი ) და გამოხატული მეთოდები, რომლებიც შესაძლებელს ხდის პრაქტიკულად იგივე კონცენტრაციების განსაზღვრას 15-30 წუთის განმავლობაში (RIDASCREEN® FAST Mycotoxins). ყველა მეთოდი დამტკიცებულია ბელორუსის რესპუბლიკაში და შეიძლება გამოყენებულ იქნას ლაბორატორიებში, რომლებიც შედიან სოფლის მეურნეობისა და სურსათის სამინისტროს შემადგენლობაში.
საკვებში და საკვებ პროდუქტებში მიკოტოქსინების ანალიზის ორგანიზება ფერმენტული იმუნოანალიზის მეთოდით შესაძლებელია მინიმალური საშუალებებით და უმოკლეს დროში. ექსპლუატაციის სიმარტივე და საჭირო აღჭურვილობის დაბალი ღირებულება განასხვავებს ფერმენტული იმუნოანალიზის მეთოდს ანალიზის კლასიკური მეთოდებისგან (ცხრილები 2, 3) და ხდის მას განსაკუთრებით მიმზიდველს შეზღუდული ფინანსური რესურსების მქონე ლაბორატორიებისთვის.
უნდა აღინიშნოს, რომ პრაქტიკულად თანაბარი გამოვლენის ლიმიტებით, ფერმენტთან დაკავშირებული იმუნოსორბენტული ანალიზის მეთოდები უფრო პროდუქტიულია და იძლევა მხოლოდ ELISA-ს მიერ ეჭვმიტანილი ნიმუშების შერჩევით გამოკვლევას ინსტრუმენტული მეთოდების გამოყენებით. მაგალითად, ELISA მეთოდის გამოყენებით, ერთ ლაბორანტის შეუძლია გამოიკვლიოს 10-100 ნიმუში ერთ სამუშაო ცვლაში, ხოლო HPLC-ის გამოყენებით - მხოლოდ 1-10 ნიმუში. ამ შემთხვევაში ფერმენტის იმუნოანალიზს სჭირდება 15 წუთიდან 3 საათამდე (ნიმუშის მომზადება 1 საათამდე), ხოლო HPLC მეთოდს სჭირდება 2-4 საათი ნიმუშის მომზადების 1-3 დღის განმავლობაში.

დასკვნები. ამ პერიოდის განმავლობაში საკვების მიკოტოქსინებით დაბინძურების გამოსავლენად კვლევების ჩატარებამ შესაძლებელი გახადა რესპუბლიკის რამდენიმე ფერმაში დაავადების უეცარი გავრცელების დიაგნოსტიკა, რამაც შესაძლებელი გახადა ადეკვატური ზომების გამოყენება და ამით მწარმოებლების ეკონომიკური ზარალის შემცირება.
შიდა წარმოებული საკვების დროული გამოკვლევის და განსაკუთრებით სხვა ქვეყნებში შეძენილი საკვების დროული გამოკვლევის ხარჯები ყოველთვის იქნება უფრო დაბალი, ვიდრე დაავადების გავრცელების გადაუდებელი დიაგნოსტიკის, დაბინძურებული საკვების გამოყენების ან განადგურების საჭირო ზომების მიღების ხარჯები, ასევე. დანაკარგები შემცირებული პროდუქტიულობისა და ცხოველების სიკვდილისგან.

ლიტერატურა:
1. ბიოაეროზოლები: შეფასება და კონტროლი, 24.1.3. – ACGIH, ცინცინატი, OH 1999 წ.
2. ვეტერინარული და სანიტარიული სტანდარტები საკვების და საკვები დანამატების უსაფრთხოების შესახებ:: No48: დამტკიცებულია. ბელორუსის რესპუბლიკის სოფლის მეურნეობისა და სურსათის სამინისტრო, 2008 წლის 28 აპრილი: შეყვანა. ძალაშია 28/04/08.
3. ევროპული საინფორმაციო ქსელი მიკოტოქსიკოლოგიის შესახებ. – http://www.mycotoxins.org
4. ევროკომისიის 2001 წლის 8 მარტის №466/2001 რეგულაცია „საკვებში გარკვეული დამაბინძურებლების მაქსიმალური დასაშვები დონის დადგენა“. – OJ L 77, 16.3.2001წ. – გვ. 1.

მიკოტოქსინების განსაზღვრის მეთოდები

საკვებსა და საკვებში მიკოტოქსინების შემცველობის გამოვლენისა და განსაზღვრის თანამედროვე მეთოდები მოიცავს სკრინინგ მეთოდებს, რაოდენობრივ ანალიტიკურ და ბიოლოგიურ მეთოდებს.

სკრინინგის მეთოდებიისინი სწრაფი და მოსახერხებელია სერიული ანალიზებისთვის, რაც საშუალებას გაძლევთ სწრაფად და საიმედოდ გამოყოთ დაბინძურებული და დაუბინძურებელი ნიმუშები. სკრინინგის მეთოდებს მიეკუთვნება თხელი ფენის ქრომატოგრაფიის მეთოდები (TLC მეთოდები), ფლუორესცენტური მეთოდი აფლატოქსინებით დაბინძურებული მარცვლის დასადგენად.

მიკოტოქსინების განსაზღვრის რაოდენობრივი ანალიტიკური მეთოდები წარმოდგენილია ქიმიური, რადიოიმუნოლოგიური და ფერმენტული იმუნოანალიზის მეთოდებით. დღეს ყველაზე გავრცელებულია ქიმიური მეთოდები, რომლებიც მოიცავს ორ ეტაპს: იზოლაციის სტადიას და მიკოტოქსინების რაოდენობრივი განსაზღვრის სტადიას. იზოლაციის ეტაპი მოიცავს ექსტრაქციას (მიკოტოქსინის გამოყოფა სუბსტრატიდან) და გაწმენდას (მიკოტოქსინის გამოყოფა მსგავსი ფიზიკოქიმიური მახასიათებლების მქონე ნაერთებისგან). მიკოტოქსინების საბოლოო გამოყოფა და რაოდენობრივი განსაზღვრა ხორციელდება სხვადასხვა ქრომატოგრაფიული მეთოდების გამოყენებით. ყველა სახის მიკოტოქსინის განსაზღვრის უნივერსალური მეთოდია თხელი ფენის ქრომატოგრაფია (TLC).

პროდუქტის პარტიიდან ნიმუშების აღებისას მთავარი მიზანია მივიღოთ საშუალო ნიმუში ან საშუალო ნიმუში, რომელიც წარმოადგენს მიკოტოქსინის კონცენტრაციას მთელი პარტიისთვის (აღებული ნიმუშები უნდა ახასიათებდეს მთელი პარტიის ხარისხს). ამ ამოცანის შესრულება დამოკიდებულია მიკოტოქსინების ბუნებასა და განაწილებაზე, პროდუქტის მახასიათებლებზე (ნედლი, დამუშავებული, ნაყარი, თხევადი, პასტა და ა.შ.) და ნიმუშის მომზადების მეთოდზე. მაგალითად, არაქისის აფლატოქსინებით დაბინძურებას აქვს გამოხატული ჰეტეროგენული ბუნება: ცალკეულ არაქისის მარცვლებში მათი შემცველობა შეიძლება განსხვავდებოდეს მილიგრამის მეათასედიდან ათეულ ან მეტ მილიგრამამდე 1 კგ-ზე, ანუ განსხვავდებოდეს სიდიდის 5-6 რიგით. ამ მიზეზით, შერჩევის შეცდომის წვლილი მთლიან ანალიტიკურ შეცდომაში არაქიში აფლატოქსინების განსაზღვრისას არის ძირითადი და ზოგიერთ შემთხვევაში შეიძლება იყოს 90%-ზე მეტი.

მიკოტოქსინით დაბინძურების ერთგვაროვნების თვალსაზრისით, ყველა პროდუქტი შეიძლება დაიყოს ორ ჯგუფად: 1) მაღალი ხარისხის ჰეტეროგენულობის მქონე პროდუქტები (გაჭუჭყიანებული და უნაჭუჭოვანი არაქისი, ზეთის თესლი, მთლიანი ან მსხვილ დაფქული მარცვლები, თხილი); 2) დაბინძურების ერთგვაროვანი ბუნების პროდუქტები (სითხეები: რძე, მცენარეული ზეთები, წვენები, პიურეები; ფქვილი, დაფქული ფქვილი).

I ჯგუფის პროდუქტების წარმომადგენლობითი საშუალო ნიმუშის მისაღებად, საწყისი ნიმუშის ზომა უნდა იყოს რაც შეიძლება დიდი (მინიმუმ 2 კგ), ხოლო საშუალო ლაბორატორიული ნიმუში უნდა იყოს იზოლირებული მიწის (ჰომოგენიზებული) საშუალო ნიმუშისგან.

მე-2 ჯგუფის ერთგვაროვანი პროდუქტებისთვის (ჯემა, მარმელადი, ხილის წვენები თუნუქის პატარა კონტეინერებში, შესქელებული რძე, მშრალი რძის პროდუქტები და ა. -200 გ), იმ პირობით, რომ პროდუქტი იმავე პარტიიდან მოდის.

ცალკეული აფლატოქსინების გამოვლენისა და იდენტიფიკაციის ქიმიური მეთოდები ეფუძნება მათ სპეციფიკურ ფლუორესცენციას UV შუქზე (დაახლოებით 365 ნმ), თხელი ფენის ქრომატოგრაფიაში მობილურობის განსხვავებებს და მათი შთანთქმის და ფლუორესცენციის სპექტრის სპეციფიკას.

აფლატოქსინებისგან განსხვავებით, ტრიქოთეცენები არ ავლენენ შთანთქმას ან ფლუორესცენციას სპექტრის ხილულ ნაწილში, რაც ართულებს მათ გამოვლენას თხელი ფენის ქრომატოგრაფიით. ამავდროულად, შესაძლებელია ტრიქოთეცენების იდენტიფიცირება TLC-ის გამოყენებით, მეთოდების გამოყენებით, რომლებიც დაფუძნებულია TLC ფირფიტების დამუშავებაზე სპეციალური რეაგენტებით, რომლებიც ქმნიან ფერად ან ფლუორესცენტურ წარმოებულებს ტრიქოთეცენებთან. მაგალითად, T-2 ტოქსინი ფირფიტების დამუშავებისას; კონცენტრირებული გოგირდის მჟავა აყალიბებს ლაქებს ლურჯი ფლუორესცენციით;) UV შუქზე.

მიკოტოქსინების რაოდენობრივი განსაზღვრის საარბიტრაჟო მეთოდები შემდეგია:

‣‣‣ გაზ-თხევადი ქრომატოგრაფია (T-2 ტოქსინისთვის);

‣‣‣ მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფია (HPLC) UV ფოტომეტრული დეტექტორის გამოყენებით (დეოქსინივალენოლისთვის და პატულინისთვის);

‣‣‣ HPLC ფლუორესცენციის დეტექტორის გამოყენებით (აფლატოქსინებისთვის; და ზეარალენონისთვის).

ნახ. სურათი 2 გვიჩვენებს თანამედროვე თხევადი ქრომატოგრაფის მოწყობილობას მისი უმარტივესი დიზაინით.

მობილური ფაზა კონტეინერიდან 1-დან შეყვანის ფილტრით 9 მიეწოდება მაღალი წნევის ტუმბოს 2 ნიმუშის შეყვანის სისტემას 3 - ხელით ინჟექტორს ან ავტოსამპლერს, და ნიმუში ასევე შეყვანილია იქ. შემდეგ, ფილტრის 8-ით, ნიმუში მობილური ფაზის დენით შედის წინა სვეტის მეშვეობით გამოყოფის სვეტში 4. შემდეგ, მობილური ფაზის ნაკადი ტოვებს სვეტს და შეიცავს გამოსაყოფი ნარევის კომპონენტებს (გამორეცხვა ) შედის დეტექტორში 5 და ამოღებულია დრენაჟის კონტეინერში 7. როდესაც გამორეცხვა მიედინება საზომი საშუალებით, დეტექტორის წრე აღრიცხავს ქრომატოგრამას და გადასცემს მონაცემებს ჩამწერ 6-ზე ან კომპიუტერზე.

თხევადი ქრომატოგრაფი (იზოკრატული სისტემა):

1 - ტევადობა; 2 - მაღალი წნევის სისტემა; 3 - მექანიკური ინჟექტორი ან ავტოსამპლერი; 4 - გამოყოფის სვეტი; 5 - დეტექტორი; ბ - ჩამწერი ან კომპიუტერი; 7 - სანიაღვრე კონტეინერი; 8 - ფილტრი; 9 - შეყვანის ფილტრი

სისტემა ნაჩვენებია ნახ. 2 არის იზოკრატული: ქრომატოგრაფიის პროცესში, მობილური ფაზის შემადგენლობა არ იცვლება. თუ ქრომატოგრაფიული ანალიზის დროს ძალზე მნიშვნელოვანია მობილური ფაზის ერთი ან მეტი კომპონენტის კონცენტრაციის შეცვლა, მაშინ გამოიყენება ეგრეთ წოდებული გრადიენტური სისტემები, რომლებიც ჩვეულებრივ შედგება ორი ან მეტი ტუმბოსგან. გრადიენტური გამორეცხვის შემთხვევაში თითოეული გამხსნელი ცალკე ჭურჭლიდან იკვებება სპეციალურ შერევის კამერაში მაგნიტური ამრევით, სადაც, გარკვეული პროგრამის მიხედვით, მათ ურევენ მოცემული მოცულობის თანაფარდობით.

მიკოტოქსინების ანალიზისთვის უფრო ხშირად გამოიყენება გრადიენტური სისტემები, სადაც აცეტონიტრილის ხსნარები წყალში კონცენტრაციით წრფივად იცვლება დროთა განმავლობაში გამოიყენება როგორც მობილური ფაზა.

ქრომატოგრაფიული სვეტი არის ლითონის მილი oh 150-დან 250 მმ-მდე შიდა დიამეტრით 4.6 მმ, სავსე სპეციალური სორბენტით, რომელიც დაფუძნებულია სილიკა გელის ნამყენი ნახშირწყალბადის რადიკალებით. წინა სვეტი ემსახურება ქრომატოგრაფიული სვეტის დაბინძურებისგან დაცვას.

ულტრაიისფერი ფოტომეტრული დეტექტორი HPLC-სთვის დეტექტორის ყველაზე გავრცელებული ტიპია. დეტექტორის მუშაობის პრინციპი მსგავსია ჩვეულებრივი სპექტროფოტომეტრის: ის აღრიცხავს ხსნარის ოპტიკურ სიმკვრივეს. განსხვავება ისაა, რომ UV დეტექტორი არის ნაკადის დეტექტორი და იყენებს ფოტომეტრულ უჯრედს ხსნარის შემცველი კუვეტის ნაცვლად. ელუენტის ნაკადი მიედინება სამუშაო უჯრედში, ხოლო სუფთა მობილური ფაზის ნაკადი მიმართულია საცნობარო უჯრედში. სინათლის წყარო არის ვერცხლისწყლის ნათურა, რომელიც აწარმოებს ინტენსიურ ულტრაიისფერ გამოსხივებას. საჭირო ტალღის სიგრძის სინათლე იზოლირებულია შესაფერისი ოპტიკური ფილტრების გამოყენებით, გადის უჯრედებში, ნაწილობრივ შეიწოვება მოძრავი ფაზის მოლეკულებით და გამოყოფილი კომპონენტებით და იჭერს ფოტოდეტექტორს. ელუატის სინათლის შთანთქმა (ოპტიკური სიმკვრივე) განუწყვეტლივ იწერება ჩარტების ჩამწერით ან კომპიუტერით, ჩაწერს ქრომატოგრამას. ნარევის გამოყოფილი კომპონენტები (მაგალითად, მიკოტოქსინები) წარმოდგენილია ქრომატოგრამაში მწვერვალების სახით. პიკის პოზიცია ქრომატოგრამაში გამოიყენება ნივთიერების იდენტიფიცირებისთვის, ხოლო პიკის ფართობი გამოიყენება რაოდენობრივი განსაზღვრისთვის.

უფრო რთული მოწყობილობა არის ფლუორესცენტური (ფლუომეტრიული) დეტექტორი.
გამოქვეყნებულია ref.rf
ეს დეტექტორი სარგებლობს ორგანული ნაერთების, კერძოდ აფლატოქსინების და ზეარალენონის უნარით, ფლუორესციონ ულტრაიისფერი ან ხილული შუქის ზემოქმედებისას. ფლუორესცენციის დეტექტორს აქვს ნაკადის უჯრედი ორი ერთმანეთის პერპენდიკულარული ოპტიკური არხით. ერთი მათგანი ემსახურება ამაღელვებელი გამოსხივების მიწოდებას, მეორე საშუალებას აძლევს გაზომოს ფლუორესცენციის ინტენსივობა. აფლატოქსინების B 1 და M 1 ანალიზის შემთხვევაში, ამაღელვებელი გამოსხივების ტალღის სიგრძეა 360 ნმ, ხოლო გამოსხივებული გამოსხივების ტალღის სიგრძე 420 ნმ.

უნდა აღინიშნოს, რომ ულტრაიისფერი დეტექტორი ასევე შეიძლება გამოყენებულ იქნას აფლატოქსინების გასაანალიზებლად, მაგრამ მისი მგრძნობელობა ზომით დაბალია, ვიდრე ფლუომეტრიული დეტექტორის, ამიტომ, აფლატოქსინების დაბალი კონცენტრაციის გაანალიზებისას (MPC დონეზე და ქვემოთ), ფლუორესცენტურია; გამოვლენა სასურველია.

მიკოტოქსინების განსაზღვრის მეთოდები - კონცეფცია და ტიპები. კატეგორიის კლასიფიკაცია და მახასიათებლები "მიკოტოქსინების განსაზღვრის მეთოდები" 2017, 2018 წ.